説明
Hieff Trans™ユニバーサルトランスフェクション試薬は、最新のナノテクノロジーに基づいて開発された多目的で便利で効率的なリポソームトランスフェクション試薬です。初代細胞を含むDNA、RNA、オリゴヌクレオチドのトランスフェクションに適しており、ニューロンを含むトランスフェクションが難しい細胞のトランスフェクション効率が高くなります。独自の配合により、培地に直接添加でき、血清の存在がトランスフェクション効率に影響を与えないため、血清除去による細胞へのダメージが軽減されます。トランスフェクション後に核酸-トランスフェクション試薬複合体を除去したり、新鮮な培地に交換したりする必要がなく、細胞の栄養状態に応じて4〜6時間後に新鮮な培地を交換することもできます。
製品構成
コンポーネント番号 |
コンポーネント |
品番/サイズ |
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40808ES02 |
40808ES03 |
40808ES03 |
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40808-A |
ユニバーサルA |
0.5mL |
1mL |
5×1mL |
40808-B |
ユニバーサルB |
0.5mL |
1mL |
5×1mL |
配送と保管
商品は保冷剤と一緒に発送され、2〜8℃で1年間保存できます。冷凍しないでください。
注意事項
1) トランスフェクション操作中、細胞集密度が 70% ~ 90% に達することが望ましく、具体的な播種密度は細胞の状況に応じて決定されます。
2) トランスフェクション複合体の調製には、DNA とトランスフェクション試薬を無血清培地で希釈する必要があります。
3) トランスフェクション中に培地に抗生物質を添加することはできません。
4) 高純度の DNA または RNA を使用すると、トランスフェクション効率が向上します。また、プラスミド内のエンドトキシンはトランスフェクションの敵です。
5) 2~8℃で保管し、長時間繰り返し蓋を開けないように注意してください。
6) 最大のトランスフェクション効率を得るために、初回使用時には核酸濃度と試薬量を最適化する必要があります。
7) この製品は科学研究目的のみにご使用いただけます。
説明書
DNAのトランスフェクション
【注意】トランスフェクション試薬の使用量については、細胞の種類や実験条件などにより異なりますので、初回使用時には最適な使用量となるようグラジエントを設定することを推奨します。
1) 細胞を播種し、トランスフェクションの時点で細胞集密度が 70% ~ 90% になっている必要があります。
2) 下の表に従って、Universal-B 溶液を Opti-MEM 培地で希釈し、軽く混ぜます。
3) DNA を Opti-MEM 培地で希釈して DNA プレミックスを取得し、Universal-A 溶液を加えて軽く混ぜて希釈 DNA を取得します。
4) 希釈したDNAを希釈したUniversal-B溶液に加えます(1:1の比率)。
5) 室温で5分間インキュベートします。
6) DNA-リポソーム複合体を細胞に滴下し、軽く混ぜます。
7) 遺伝子発現解析まで、37℃、5% CO2インキュベーターで48~96時間インキュベートする。
siRNAのトランスフェクション
siRNA のトランスフェクションの手順は DNA トランスフェクションの手順と同じですが、siRNA を希釈するときに Universal-A 溶液 (手順 3) を追加する必要がない点が異なります。
表1 異なる細胞培養容器におけるトランスフェクション量(参考値)
細胞培養容器 |
96ウェル |
24ウェル |
6ウェル |
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接着細胞 |
1-4×104 |
0.5-2×105 |
0.25-1×106 |
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下の表に従って、Universal-B 溶液を Opti-MEM 培地で希釈し、軽く混ぜます。 |
Opti-MEM培地 |
5μL |
25μL |
125μL |
ユニバーサルB |
0.2μL |
1μL |
5μL |
|
DNA を Opti-MEM 培地で希釈して DNA プレミックスを取得し、Universal-A 溶液を加えて軽く混ぜて希釈 DNA を取得します。 |
Opti-MEM培地 |
5μL |
25μL |
125μL |
DNA(0.5~5μg/μL) |
0.1μg |
0.5μg |
2.5μg |
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ユニバーサルA(2μL/μg DNA) |
0.2μL |
1μL |
5μL |
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希釈した DNA を希釈した Universal-B 溶液 (1:1 の比率) に加えます。 |
希釈DNA溶液 |
5μL |
25μL |
125μL |
ユニバーサルB |
5μL |
25μL |
125μL |
|
室温で5分間インキュベートします。 |
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DNA-リポソーム複合体 |
コンポーネント(各ウェル) |
96ウェル |
24ウェル |
6ウェル |
オプティMEM |
10μL |
50μL |
250μL |
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DNA(0.5~5μg/μL) |
0.1μg |
0.5μg |
2.5μg |
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ユニバーサルB |
0.2μL |
1μL |
5μL |
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ユニバーサルA |
0.2μL |
1μL |
5μL |
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DNA-リポソーム複合体を細胞に滴下し、軽く混ぜます。 |
DNA-リポソーム複合体 |
10μL |
50μL |
250μL |
[注意] 表中の使用量は参考値です。DNAとUniversal-B溶液の具体的な使用量は、細胞の種類やその他の実験条件に応じて最適化する必要があります。比率は1:0.5~1:5にすることをお勧めします。
安全データシート
(1)Q:核酸トランスフェクション試薬複合体を調製する際に血清を存在させることはできますか?
A: 血清の存在はリポソームの形成に影響します。核酸トランスフェクション試薬複合体を調製する場合は、無血清培地(通常は MEM 培地)を使用することをお勧めします。
(2)Q:トランスフェクション試薬は凍結できますか?
A: この試薬は 2 ~ 8°C で保管する必要があり、キャップを繰り返し長時間開けることは避けてください。キャップを長時間開けるとリポソームが酸化され、トランスフェクション効率に影響します。
(3)Q:Hieff Trans™ユニバーサルトランスフェクション試薬を使用する際に注意すべきことは何ですか?
A: 1) トランスフェクション操作中、細胞集密度が 70% ~ 90% に達することが望ましく、具体的な播種密度は細胞の状況に応じて決定されます。
2) トランスフェクション複合体の調製には、DNA とトランスフェクション試薬を無血清培地で希釈する必要があります。
3) トランスフェクション中に培地に抗生物質を添加することはできません。
4) 高純度の DNA または RNA を使用すると、トランスフェクション効率が向上します。また、プラスミド内のエンドトキシンはトランスフェクションの敵です。
5) 2~8℃で保管し、長時間繰り返し蓋を開けないように注意してください。
6) 最高のトランスフェクション効率を得るために、初回使用時には核酸濃度と試薬量を最適化する必要があります。
(4)Q:トランスフェクション後に停止させる必要がありますか?
A: 必要ありません。トランスフェクション後に核酸-トランスフェクション試薬複合体を除去したり、新鮮な培地に交換したりする必要はありません。また、細胞の栄養状態に応じて、4〜6時間後に新鮮な培地を交換することもできます。
(5)Q:トランスフェクション試薬はウイルスベクターパッケージングのトランスフェクションに使用できますか?
A: はい。ウイルスベクターのパッケージングの効率は、必ずしもトランスフェクションの効率に関係しているわけではなく、パッケージングプラスミドの選択とプラスミド間の比率にも関係しています。
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。