説明
直鎖状ポリエチレンイミン PEI 25000 トランスフェクション試薬は、高電荷カチオン性ポリマーで、負に帯電した核酸分子と容易に結合し、複合体を形成し、複合体が細胞内に侵入することを可能にします。このトランスフェクション試薬は、HEK293 や CHO などの細胞において、細胞毒性が低く、トランスフェクション効率が高く、遺伝子発現効率が高い一過性トランスフェクション試薬です。直鎖状 PEI トランスフェクション試薬は、HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2、Hela 細胞など、さまざまな細胞株に広く適用できることが検証されています。この試薬は血清含有培地と互換性があり、核酸を効率的に細胞に導入できます。
仕様
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名前 |
ポリエチレンイミン直鎖 (PEI) MW25000 |
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CAS番号 |
9002-98-6, 26913-06-4 |
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分子式 |
（CH 2 CH 2 NH） n |
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分子量 |
25,000 |
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外観 |
白色または淡黄色の粉末 |
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融点 |
73〜75 ℃ |
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溶解度 |
熱水、低pHの冷水、メタノール、エタノールに溶けます。ベンゼン、エーテル、アセトンには溶けません。 |
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構造 |
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配送と保管
製品は室温で出荷され、粉末は 2 ～ 8 ℃ で 2 年間保存できます。原液は 2 ～ 8 ℃ で 3 か月間保存できます。
注意事項
1) 調製した PEI 溶液を -20 ºC から取り出して解凍した後は、4 ºC の冷蔵庫で保存できますが、再凍結しないでください。
2) ほとんどの細胞では、DNA 1μgあたり3.0μLのPEIトランスフェクション試薬で高いトランスフェクション効率を達成できます。最適化のために、DNA 1μgあたり1.5～4μLの線形PEIトランスフェクション試薬を使用することもできます。
3) 安全と健康のため、作業時には白衣、使い捨て手袋、ドラフトチャンバーを着用してください。
4) この製品は科学研究目的のみに使用され、人体への使用には適していません。
ストック溶液調製（1 mg/mL）
1. 材料
PEI 25000、Milli-Q®水/注射用水（WFI）または同様の生物学的グレードの水、12 mol/L塩酸（HCl）、10 mol/L水酸化ナトリウム（NaOH）、使い捨て0.1〜0.2 μm PES真空滅菌フィルター、滅菌HDPEまたはポリプロピレン保存ボトル。
2. ストック溶液（1 mg/mL）を調製する
1) 1 L ガラスビーカーに、PEI 25000 粉末 1 g を Milli-Q® 超純水または同等の生物学的水 900 mL に加え、マグネティックスターラーで均一に撹拌して小さな渦を発生させます。
2) 撹拌しながら塩酸（12mol/L）を滴下し、pHが2.0未満になるまでpHを調整します。
3) ビーカーの上部を覆い、完全に溶解するまで 3 時間撹拌します。この間、pH は 2.0 未満に保ちます。
【注意】：溶解できない小さな繊維状の粒子が残っている場合がありますが、これは正常な現象です。
4) 撹拌しながらNaOH（10mol/L）を滴下し、pHが6.9～7.1になるまで調整します。
5) 溶液をメスシリンダーに移し、水を加えて1Lにする。
6) 使い捨ての0.1～0.2µm PES真空フィルターで濾過・滅菌し、1mg/mLのストック溶液を得る。
7) 必要に応じて小分けし、-20℃で保存します。1年間安定します。
【注意】：保存液を再解凍した後、4℃で保存でき、2週間安定しますが、再凍結しないでください。
トランスフェクション手順（6ウェルプレートを例に）
1. 細胞接種：トランスフェクション効率を向上させるために、トランスフェクションの1日前に細胞を接種することが推奨され、トランスフェクション時の細胞密度は70％〜80％であることが好ましい。
2. DNA-PEI 複合体を調製する: 以下のシステムに従って、DNA-PEI 核酸トランスフェクション試薬複合体を調製します。
1) 細胞の各ウェルに対して、2 μg のターゲット DNA を 100 μL の無血清培地で希釈し、よく混合して DNA 希釈液を作成します。
[注記]: 無血清希釈液にはOpti-MEMまたはddH2Oが推奨されます
2) すぐに 5 μL の PEI 25000 トランスフェクション試薬を 100 μL の DNA 希釈液に加え、10 秒間ボルテックスしてよく混ぜます。
3) 室温で10〜25分間インキュベートして、DNA-PEIカチオン核酸トランスフェクション試薬複合体を形成します。
3. トランスフェクトされた細胞:
1) 複合体形成中に、細胞増殖培地を除去し、各ウェルに新鮮な予め温めた完全培地 2 mL を追加します。
2) 100μLのDNA-PEI核酸-PEI複合体を細胞に直接加え、培養プレートを振って軽く混ぜます。
3) 37℃、5% CO2インキュベーターで培養すると、トランスフェクション後7時間でトランスジーンの発現を検出できます。適切なテスト時間はご自身で決定してください。
4. 定常回転スクリーニング（オプション）
トランスフェクションの24時間後、細胞を新鮮な増殖培地（細胞を10倍以上に希釈）に継代培養し、5％CO2インキュベーターで37℃で一晩インキュベートしました。翌日、トランスフェクション耐性遺伝子に一致するスクリーニング薬剤を添加しました。薬剤耐性クローンは約1〜2週間でスクリーニングできます。この期間中、スクリーニング薬剤を含む増殖培地は頻繁に交換する必要があります。
さまざまな細胞培養容器のトランスフェクション投与量（参考のみ）：
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培養容器 |
表面面積あたり 井戸*(cm2) |
DNA(μg) |
トランスフェクション 試薬(μL) |
希釈培地の容量**(μL) |
メッキ量 中くらい |
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96ウェル |
0.3 |
0.1 |
0.1 |
10 |
100μL |
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48ウェル |
0.7 |
0.2 |
0.3 |
20 |
200μL |
|
24ウェル |
1.9 |
0.5 |
1 |
50 |
500μL |
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12ウェル |
3.8 |
1 |
2 |
50 |
1mL |
|
6ウェル |
10 |
2 |
4 |
100 |
2mL |
|
フラスコ 25cm² |
21 |
4 |
8 |
200 |
4mL |
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フラスコ 75cm² |
58 |
10 |
20 |
500 |
10mL |
引用と参考文献:
[1] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. グレリン受容体のアゴニズムと逆アゴニズムの分子メカニズム。Nat Commun. 2022;13(1):300. 2022年1月13日発行。doi:10.1038/s41467-022-27975-9 (IF:14.919)
[2] Wang Y、Chen J、Gao WQ、Yang R. METTL14はm6A-YTHDF2依存性メカニズムを介してTHBS1を阻害することにより前立腺腫瘍形成を促進する。Cell Death Discov. 2022;8(1):143。2022年3月30日発行。doi:10.1038/s41420-022-00939-0 (IF:5.241)
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