アウレオバシジン A は、AbA、バシファンギン、ブレオマイシン A とも呼ばれ、糸状菌アウレオバシジウム プルランス No. R106 から単離された環状エステル ペプチド抗生物質です。強力な抗真菌作用があり、イノシトールリン酸化セラミド合成酵素 AUR1 の阻害剤です。低濃度 (0.1～0.5 μg/mL) でも酵母に対して毒性があります。オーレオバシジン A に感受性のある菌類には、サッカロミセス・セレビシエ、シゾサッカロミセス・ポンベ、カンジダ・グラブラータ、アスペルギルス・ニデュランス、アスペルギルス・ニガーなどがあります。オーレオバシジン A に感受性のある菌類には、歯酵母 (サッカロミセス・セレビシエ)、シゾサッカロミセス・ミレット (シゾサッカロミセス・ポンベ)、カンジダ・グラブラータ (カンジダ・グラブラータ)、アスペルギルス・ネスト (アスペルギルス・ニデュランス)、アスペルギルス・ニガー (アスペルギルス・ニガー) などがあります。作用機序は、オーレオバシジン A が、菌類の成長に必要なイノシトールホスホラミダイト (イノシトールホスホリルセラミド、IPC) 合成酵素の活性を阻害し、スフィンゴ脂質の合成を妨害することで菌株をさらに死滅させるというものです。 IPC 合成酵素をコードする遺伝子は、サッカロミセス・セレビシエの AUR 1 遺伝子や相同性のある A. sinensis の AURA 遺伝子など、さらに研究されています。これらのコード遺伝子をミュートすると、AUR 1-C 遺伝子などの菌株はオーレオバシジン A に耐性になります。

オーレオバシジン A は、陽性クローンをスクリーニングするための薬剤選択マーカーとして非常に適しています。オーレオバシジン A 耐性は、酵母シングルハイブリッドおよびツーハイブリッド研究における理想的なレポーターでもあります。この製品は、濃度 1 mg/mL でメタノールに溶解したオーレオバシジン A の溶液です。

特徴

純度≥ 97%

工場大量生産方式による標準化生産

アプリケーション

酵母ツーハイブリッド研究

酵母ワンハイブリッド研究

厳格な酵母薬剤選択マーカー

オーレオバシジンA耐性は酵母ハイブリダイゼーション研究の理想的なレポーターである

仕様

コンポーネント

配送と保管

オーレオバシジンA （ AbA ） 製品は-15 ℃～ -25 ℃で2年間保管してください。

説明書

1.作業集中力

具体的な濃度については関連文献を参照し、ご自身の実験条件（実験目的、細胞の種類、培養特性など）に応じて検討し、最適化してください。

2.細胞実験（in vitro実験）

オーレオバシジンAはセラミド中毒と必須イノシトールホスホリルセラミドの欠乏の両方を通じて酵母細胞の増殖を阻害する^[1] 。

各 CArG ボックス モチーフの 3 重タンデム リピートを合成しました。すべての DNA フラグメントは、適切な制限部位を使用して Y1H ベクター pAbAi (Clontech、米国マウンテン ビュー) にクローニングされました。次に、組み立てられた各 pAbAi コンストラクトを BstbI で線状化し、Yeast Transformation System 2 マニュアル (Clontech、米国マウンテン ビュー) に従って Saccharomyces cerevisiae Y1HGold 株に形質転換しました。目的の DNA フラグメントを含むクローンは、示されているように、100 ～ 900 ng/mL の濃度の Aureobasidin A を添加した合成ウラシル ドロップアウト培地 (Clontech、米国マウンテン ビュー) ^[2]で自動活性化についてスクリーニングされました。

SlBES1遺伝子のオープンリーディングフレーム（ORF）を増幅し、pGBKT7-GAL4BDプラスミドに連結した。融合GAL4BD-SlBES1コンストラクトをさらにY2H Gold酵母細胞に形質転換した。SD/ -Trp培地プレートを使用して酵母形質転換体を培養した。形質転換体のα-ガラクトシダーゼ活性はX- α- galによって同定され、AUR1-Cの発現はオーレオバシジンA ^[3]によってスクリーニングされた。

3. さまざまな酵母に対するオーレオバシジンの最小発育阻止濃度

4.操作手順（AbA耐性酵母形質転換システムの場合）

1)一晩培養した酵母培養液 0.5 mL を YPD 培地 50 mL に加えます (組成: 液体培地 1 L には酵母エキス 10 g、ポリペプトン 20 g、D-グルコース 20 g が含まれます。固体培地の場合は、寒天をさらに 2% 加えます)。

2) OD660が1〜2になるまで、 30 ℃で約6時間インキュベートします。二倍体を使用する場合は、OD660が2〜4になるように測定します。

3) 1,000 × gで5分間遠心分離します。

4)ペレットを10mLの溶液A（組成：100mM酢酸リチウム、10mMトリス-HCl pH7.5、1mM EDTA）に再懸濁し、1,000 × gで5分間遠心分離します。

5) E OD660が150になるまでペレットを溶液Aに懸濁します。

6)細胞懸濁液100µLをチューブに分注し、30 ℃で1時間インキュベートします。

7)ベクター（環状または線状DNA）5µgとキャリアDNA（100 ℃で10分間加熱し、急冷したもの）150µgを加えます。

注意: pAUR101 では、形質転換に線状 DNA が必要です。環状 DNA を使用すると、形質転換の効率が低下したり、失敗することもあります。pAUR112 および pAUR123 では、形質転換に完全なプラスミド DNA が必要です。

8)溶液B 850 µL（組成：ポリエチレングリコール 4000 40 g を溶液A 100 mL に溶解し、よく混合し、使用前に新しく調製する）を加え、軽く混ぜます。

9) 30 ℃で30分間インキュベートし、その後42 ℃で15分間インキュベートします。

10) 室温で10分間置きます。

11) 5,000 rpmで1分間遠心分離し、ペレットを5 mLのYPD培地に再懸濁します。

12) 30 ℃で6時間から一晩培養します。

13) 5,000～10,000 rpmで遠心分離し、ペレットを1～10 mLの0.9% NaClに再懸濁します。

14) 細胞懸濁液 100 µL を YPD 選択培地プレート (株の種類に応じて、一定濃度の AbA を含む) に播種します。形質転換が完了するまで、 30 ℃で 3 ～ 4 日間インキュベートします。

15)陽性の形質転換体を選択し、形質転換効率（プラスミド DNA 1 マイクログラムあたりに形質転換されたコロニーの数として表される）を決定します。

ドキュメント:

安全データシート

60231 _MSDS_HB22042 0 _EN.pdf

マニュアル

60231 _マニュアル_HB2 5 011 6 _EN.pdf

数字

図1 . 酵母プレート成長チャート

実験株：GS115

使用量： 0.05μg/mL 、 0.1μg/mL 、 0.5μg/mL 、 1μg/mL

治療: 3-5 30 ℃の日

上段がイェーセン製品、下段がT*ブランドです。