Ultra-Clean UCF.ME ™ Thermostable RNase H: Precieze snijden voor efficiëntere experimenten!

Ideaal voor rRNA-verwijdering En mRNA-afsluiting efficiëntiedetectie!

Thermostabiele RNase H overtreft, dankzij zijn uitzonderlijke hittebestendigheid, reguliere RNase H in zowel specificiteit als efficiëntie!

Inleiding tot RNase H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) is een enzym dat specifiek de RNA-component van RNA-DNA-hybridestrengen afbreekt. Het speelt een cruciale rol in processen zoals DNA-replicatie, -reparatie en -transcriptie door de RNA-streng te splitsen om de integriteit en stabiliteit van de DNA-template te behouden. Hierdoor wordt het veel gebruikt in moleculair-biologische experimenten, waaronder cDNA-synthese, rRNA-verwijdering en RNA-interferentiestudies. E. coli RNase H heeft echter enkele beperkingen:

• Het kan leiden tot niet-specifieke splitsing van enkelstrengs RNA of DNA, waardoor de nauwkeurigheid van experimentele resultaten afneemt.
• Door de slechte thermische stabiliteit kan het zijn activiteit niet behouden bij hoge temperaturen. Hierdoor is het ongeschikt voor experimenten zoals reverse transcriptie bij hoge temperaturen of PCR, waarvoor hoge temperaturen nodig zijn.

Deze tekortkomingen hebben onderzoekers ertoe aangezet om thermostabiele RNase H te ontwikkelen om de toepassingen ervan te verbreden en de experimentele efficiëntie te verbeteren.

Figuur 1: RNase H-mechanisme

Thermostabiele RNase H van Thermus thermophilus

Thermostabiele RNase H, afgeleid van Thermus thermophilus, is een homoloog van E. coli RNase H en deelt vergelijkbare ribonucleasefuncties. Het identificeert en splitst de fosfodiësterbindingen van de RNA-streng in RNA:DNA-hybriden nauwkeurig en efficiënt, terwijl de integriteit van de DNA-streng behouden blijft. Diepgaande structurele analyse onthult dat, hoewel de algehele stabiliteitsverdeling lijkt op die van E. coli RNase H, T. thermophilus RNase H significante verbeteringen vertoont in zowel de algehele stabiliteit als de lokale residustabiliteit.

Met een optimale activiteitstemperatuur boven 65°C levert Thermostable RNase H verbeterde specificiteit en efficiëntie bij hogere reactietemperaturen, waardoor niet-specifieke splitsing wordt geminimaliseerd. Deze eigenschap ontsluit zijn enorme potentieel in moleculair biologische experimenten, waaronder:

• rRNA-verwijdering
• Detectie van mRNA-cappingsnelheid
• Verwijdering van mRNA poly(A) gehybridiseerd aan poly(dT)
• Verwijdering van mRNA tijdens cDNA tweede-streng synthese
• Verbeterde amplificatie-efficiëntie bij reverse transcriptie bij hoge temperatuur, isotherme amplificatie en PCR-experimenten

Figuur 2: Driedimensionale structuurvergelijking van thermostabiele RNase H en E. coli RNase H ^[1]

UCF.ME™Thermostabiele RNase H (Cat14545)

Thermostabiele RNase H wordt vaak gebruikt in experimenten voor de detectie van pathogenen, zoals rRNA-verwijdering bij metagenomische sequencing (mNGS) en pathogeengerichte sequencing (tNGS). Residuen van gastheer- of achtergrondbacteriële nucleïnezuren in het enzym kunnen de detectienauwkeurigheid aanzienlijk in gevaar brengen. Om dit aan te pakken, Yeasen Biotechniek introduceert UCF.ME™ Thermostabiele RNase H (Cat14545), ontwikkeld met behulp van zijn gepatenteerde UCF.ME™ ultra-schone procestechnologie. Geproduceerd bij de UCF.ME™ In een ultra-schone moleculaire enzymfaciliteit ondergaat dit product strenge kwaliteitscontroles, van materiaalselectie en omgevingsbeheer tot procesoptimalisatie en testen, waarbij minimale achtergrondbacteriële gDNA- en nucleaseresiduen worden gegarandeerd.Dit garandeert nauwkeurige, betrouwbare en reproduceerbare experimentele resultaten.

Productvoordelen:

• Hoge activiteit en uitstekende batch-tot-batch consistentie
• Extreem laag gastheer-gDNA-residu: <0,02 kopieën/U
• Geen exonuclease-, endonuclease- of RNase-residuen
• Uitstekende stabiliteit: Geen significant verlies van enzymactiviteit na 32 dagen bij 4°C, 16 dagen bij 25°C of 7 dagen bij 37°C

Prestatie-etalage van UCF.ME™ Thermostabiele RNase H (Cat14545)

1. Hoge activiteit en batchconsistentie

Drie batches van UCF.ME™ Thermostabiele RNase H werd geïncubeerd met RNA:DNA-substraten en bandveranderingen werden geanalyseerd via agarosegelelektroforese. Resultaten tonen aan dat slechts 0,05 U van dit enzym effectief het RNA in 20 pmol RNA:DNA-substraten splitst, met uitstekende batch-to-batch consistentie, wat de stabiliteit en betrouwbaarheid benadrukt.

Figuur 3: Resultaten van activiteitsdetectie van UCF.ME™ Thermostabiele RNase H

Opmerking: Reactieomstandigheden: 50°C gedurende 20 minuten; RNA:DNA-substraat – 20 pmol

2. Laag Host gDNA-residu: <0,02 kopieën/U

Uit tests op gDNA-residuen van de gastheer (E. coli) in meerdere batches blijkt dat alle drie de batches UCF.ME™ Thermostabiele RNase H heeft residuniveaus die ruim onder de 0,02 kopieën/E liggen, wat een hoge zuiverheid en experimentele betrouwbaarheid garandeert.

Figuur 4: Host gDNA Residu Resultaten van UCF.ME™ Thermostabiele RNase H

3. Geen exonuclease-, endonuclease- of RNase-residuen

25 U van UCF.ME ™ Thermostabiele RNase H werd geïncubeerd met nucleïnezuursubstraten en bandveranderingen werden beoordeeld door agarosegelelektroforese. Er werden geen exonuclease-, endonuclease- of RNase-residuen gedetecteerd in een van de drie batches, wat een sterke garantie biedt voor de nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van de resultaten.

Figuur 5: Detectieresultaten van exonuclease-, endonuclease- en RNase-residuen in UCF.ME™ Thermostabiele RNase H

4. Uitstekende stabiliteit

UCF.ME™ Thermostable RNase H werd onderworpen aan stabiliteitstesten: 32 dagen bij 4°C, 16 dagen bij 25°C en 7 dagen bij 37°C. Enzymactiviteitsmetingen lieten geen significante afname zien, wat de uitzonderlijke stabiliteit over een breed temperatuurbereik en de geschiktheid voor langdurige opslag en uiteenlopende experimentele omstandigheden bewijst.

Figuur 6: Versnelde stabiliteitsresultaten van UCF.ME™ Thermostabiele RNase H

Aanbevolen gerelateerde producten

Bron	Productnaam	Kat NO.
T. thermophilus	UCF.ME™ Thermostabiele RNase H	14545ES
E.coli	RNase H	12906ES

Referenties

1. Hollien J, Marqusee S. Structurele verdeling van stabiliteit in een thermofiel enzym [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. Selectieve karakterisering van mRNA 5'-eind-capping door DNA-probe-gerichte verrijking met plaatsspecifieke endoribonucleasen [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Nieuwe rRNA-depletiemethoden voor totale RNA-sequencing en ribosoomprofilering ontwikkeld voor vogelsoorten [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.