Bij het gebruik van traditionele high-fidelity enzymen voor PCR is het onvermijdelijk dat u een aantal lastige problemen tegenkomt. De fidelity is bijvoorbeeld mogelijk niet voldoende, wat leidt tot mutaties of deleties in de doelbasen, zelfs na het sequencen van de geamplificeerde fragmenten. De amplificatietijd is ook relatief lang; soms kan het amplificeren van een fragment van 5 kb bijna 2 uur duren. Nu introduceert XiaoYi een snelle high-fidelity PCR om uw problemen op te lossen! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (ultrasnelle, zeer betrouwbare PCR-premix).
De 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (met kleurstof) bevat een vooraf toegevoegde elektroforese-indicator, waardoor de PCR-producten direct kunnen worden gebruikt voor elektroforese. De versterkte producten hebben stompe uiteinden. Deze high-fidelity enzymmix biedt de voordelen dat deze snel, eenvoudig, zeer gevoelig, sterk specifiek en stabiel is. In het reactiesysteem hoeven alleen primers en templates te worden toegevoegd. Daarnaast bevat het product ook een specifiek beschermingsmiddel, dat ervoor zorgt dat de high-fidelity PCR-premix een stabiele activiteit behoudt, zelfs na herhaaldelijk invriezen en ontdooien.
Producteigenschappen
- Hoog Trouw: Laag niet overeenkomend tarief, met A baseren niet overeenkomend verhouding van 231/300.000 in hoog GC vatbaar voor mutaties sequenties;
- Snel Versterking Snelheid: Verlenging tarief als snel als 5 seconden per kb-bestand;
- Breed Toepasbaarheid: Geschikt van bedekken genen met 20-80% GC inhoud, verdraagt muis lysaten En 20% bloed;
- Goed Stabiliteit: Kan zijn opgeslagen bij 37°C voor 7 dagen zonder beïnvloedend product prestatie;
- Snel En Handig: Gewoon toevoegen grondlagen En sjabloon voor versterking, komt met laden kleurstof voor rechtstreeks elektroforese.
Productprestatiedemonstratie
Hoge betrouwbaarheid, lage mismatch-ratio
Met behulp van verschillende soortengenomen als templates werden zes GC-rijke fragmenten die zeer gevoelig zijn voor basemutaties/verliezen geselecteerd voor amplificatie. De respectievelijke PCR-producten werden gekloond in vectoren en 100 enkele klonen voor elke sequentie werden uitgekozen voor sequentiebepaling om basemismatch/mutatievoorkomens te bevestigen. De resultaten toonden aan dat de snelle high-fidelity PCR-mastermix (10164ES) een superieure mate van basemismatch/mutatie had vergeleken met binnenlandse en internationale merkreagentia.
De verlengingstijd kan oplopen tot 5 seconden/kb
Met behulp van de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) en Product T werden fragmenten van verschillende lengtes (0,4-10 kb) geamplificeerd uit 100 ng humane genomische DNA-template met een extensiesnelheid van 5 sec/kb, waarbij de extensietijd 5 sec/kb moest zijn. De resultaten toonden aan dat de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) fragmenten binnen 10 kb kan amplificeren met een extensiesnelheid van 5 sec/kb.
Kan genfragmenten met verschillende GC-inhoud versterken
Met behulp van de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) om genfragmenten met 23-76% GC-inhoud van humane genomische DNA-sjablonen te amplificeren, met de extensietijd ingesteld op 5 sec/kb. De resultaten toonden aan dat het product een goede amplificatiespecificiteit heeft en in staat is om fragmenten met verschillende GC-inhouden te amplificeren.
In staat om genfragmenten met variërende GC-inhoud te versterken
Met behulp van de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) om fragmenten van verschillende lengtes uit verschillende monsters te amplificeren, met een extensietijd ingesteld op 5-10 seconden per kilobase. De resultaten geven aan dat dit product uitstekende amplificatiespecificiteit vertoont en compatibel is met de amplificatie van verschillende fragmenten uit verschillende templates.
Opmerking: 1. Muis genomisch DNA 1 kb; 2. Muis genomisch DNA 2 kb; 3. Muis genomisch DNA 6 kb; 4. Maïs genomisch DNA 1 kb; 5. Rijst genomisch DNA 2 kb-A; 6. Rijst genomisch DNA 2 kb-B; 7. Menselijke 293 cel cDNA 1 kb; 8. Menselijke 293 cel cDNA 2 kb; 9. Menselijke 293 cel cDNA 3 kb; 10. Menselijke 293 cel cDNA 12 kb; 11. E. coli bouillon 8 kb; 12. E. coli bouillon 16 kb; 13. Rijst genomisch DNA 10 kb-A; 14. Rijst genomisch DNA 10 kb-B; 15. Rijst genomisch DNA 10 kb-C; 16. Rijst genomisch DNA 20 kb-A; 17. Rijst genomisch DNA 20 kb-B; 18. Directe amplificatie van menselijk bloed 3 kb.
Hoge detectiegraad van template-amplificatie bij verschillende soorten
Met behulp van de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) werden verschillende GC-inhoudsfragmenten variërend van 0,5-10 kb in Arabidopsis, koolzaad en aardappel geamplificeerd, met een verlengingstijd van 5 sec/kb. De resultaten toonden aan dat de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) succesvolle amplificatie kan garanderen.
Met behulp van de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) werden willekeurige sequenties (willekeurig geselecteerd) van Arabidopsis, koolzaad, fruitvliegen, Caenorhabditis elegans en zebravissen, met fragmentgroottes variërend van 0,5-10 kb en 20-80% GC-inhoud, versterkt. De extensietijd werd ingesteld op 5 sec/kb. De resultaten toonden aan dat de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) een hoge detectiegraad heeft.
Goede stabiliteit
Met behulp van de snelle high-fidelity enzyme premix (10164ES) die hitte-versneld is opgeslagen bij 37℃ gedurende respectievelijk 3 dagen en 7 dagen, om 3 kb en 5 kb DNA fragmenten te amplificeren van 100 ng van menselijk genomisch DNA, met een extensietijd ingesteld op 5 sec/kb. De resultaten tonen aan dat het product een goede stabiliteit heeft.
Feedback van klanten over proefperiode
Dier gDNA-120bp-50%GC
Klantbeoordeling: Het PCR-proces is snel, de banden zijn geschikt en kunnen direct in agarosegelelektroforese worden geladen. De banden van het merk N zijn naar boven gericht, wat kan komen door de invloed van zijn eigen buffer, en aangezien er geen laadbuffer is toegevoegd, kan dit product het high-fidelity-enzym in mijn huidige experimentele protocol vervangen.
Plant cDNA-729bp-45,13%GC
Klantbeoordeling: Vergeleken met het T-merk zijn de kloonbanden helderder en uniformer en is het hele PCR-proces sneller. Er hoeft geen extra kleurstof te worden toegevoegd bij het uitvoeren van de gel, wat erg handig en tijdbesparend is.
Microbieel gDNA-1158、1953bp-58,8%、52,9%GC
Klantbeoordeling: Vergeleken met het merk V is het effect vergelijkbaar, maar persoonlijk vind ik het nog beter.
Plant cDNA-2000bp-40%GC
Klantbeoordeling: Het effect is erg goed en de strip is helder.
Selectiegids voor High-Fidelity PCR
| Productpositionering | Productnaam | Kat# |
| 5s/kb, zorgt voor betrouwbaarheid en snelheid (met Kleurstof) | 10164ES | |
| 5s/kb, garandeert betrouwbaarheid en snelheid (zonder kleurstof) | 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR-mastermix | 10163ES |
| 83×Taq, hoge detectiegraad (met kleurstof) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (met kleurstof) | 10154ES |
| 83×Taq enkel enzym + Buffer apart | 10153ES |