Fluorescente kwantitatieve PCR is een zeer gevoelig experiment dat een hoge mate van precisie vereist in de uitvoering door laboratoriumpersoneel. Daarom komen we tijdens het qPCR-experimentproces onvermijdelijk problemen tegen:
I. Problemen met betrekking tot niet-experimentele factoren
- In het laboratorium worden veel qPCR-experimenten uitgevoerd en de instrumenten zijn bezet, waardoor de zorgvuldig bereide reactiemengsels niet op een duidelijke manier kunnen worden afgevoerd.
- Er zijn talrijke kwantitatieve monsters, het toevoegen van monsters is een lastige taak en er is een risico op fouten bij het toevoegen van monsters vanwege duizeligheid, wat kan leiden tot onbetrouwbare experimentele resultaten.
- Lange machinelooptijden, een beperkt aantal experimentele runs en experimentele taken kunnen niet op regelmatige basis volgens planning worden voltooid.
- De laboratoriumapparatuur wordt vervangen door nieuwe instrumenten, er zijn meerdere kwantitatieve instrumenten in het laboratorium aanwezig en de kwantitatieve reagentia zijn niet compatibel met de instrumenten.
II. Problemen beperkt door experimentele factoren
Kwantificeringsproblemen met genen met een lage overvloed. Complex primerontwerp en screeningprocessen, gevoeligheid en reproduceerbaarheid van replicate wells...
Als ervaren fabrikant die zich toelegt op onderzoek en ontwikkeling van qPCR-reagentia,
Producteigenschappen
- Breed instrument verenigbaarheid: De voormengsel bevat A specifiek type van referentie verven, elimineren de behoefte naar aanpassen de ROX concentratie.
- Eenvoudig Traceren: De blauw voormengsel staat toe voor rechtstreeks visualisatie naar onderscheiden of de steekproef heeft geweest toegevoegd, gewoon door observeren de kleur.
- Hoog Stabiliteit: De systeem is voorbereid bij kamer temperatuur, En de gemengd systeem kan zijn opgeslagen bij 4°C voor omhoog naar 24 uren zonder elk wijziging in de test resultaten.
- Snel Instellen: Verenigbaar met beide standaard En snel programma's, toestaan de kwantitatief experiment naar zijn voltooid in als snel als 46 notulen.
- Uitstekend Versterking Prestatie: Hoog versterking efficiëntie, Goed specificiteit, geschikt van detecteren genen bij de enkel kopiëren nummer.
Bestel Informatie
| Productpositionering | Productnaam | Kat# |
| Hooggevoelige universele kwantitatieve premix | 11184ES | |
| Kleurvolging Hoge gevoeligheid Fluorescentie Kwantitatief Voormengsel | 11188ES | |
| 11189ES | ||
| 11190ES |
Productprestaties
1. Hoge gevoeligheid: kan tot één enkel exemplaar detecteren
Figuur 1. Hieff UNICON™ Universal Blue premix kan effectief een template hoeveelheidsbereik detecteren over 7 ordes van grootte, met een hoge amplificatie-efficiëntie en een goede lineaire relatie binnen een breed lineair bereik. De gebruikte template was 2 µL plasmide met een concentratie van 10^6 tot 10^0 kopieën, wat het menselijke IL23R-gen amplificeerde.
2.De detectie tarief En specificiteit Zijn Goed: wijdverbreid van toepassing naar versterkers met 30-70% GC inhoud
Figuur 2. Hieff UNICON™ Universal Blue premix is breed toepasbaar op amplimers met 30-70% GC-inhoud, wat zorgt voor een extreem hoge specificiteitsdetectiesnelheid. Met 2 µL 293T cDNA als template werden 1000 paren primers voor 200 bp amplimers (GC%-inhoud 30%-70%) ontworpen met Primer5-software, en 27 van deze amplimers werden willekeurig geamplificeerd.
3. Hoge resolutie: Kan nauwkeurig verschillen in sjabloonconcentratie van 2-voudig onderscheiden
Figuur 3. Hoog UNICON™ Universele blauwe premix kan nauwkeurig verschillen in templateconcentratie van 2-voudig onderscheiden. De gebruikte template was een 2-voudige gradiëntverdunning van 2 µL van 293T cDNA-voorraadoplossing, waardoor het GAPDH-gen werd versterkt.
4. Goede reproduceerbaarheid van duplicaatputten: 90 duplicaatputten
Figuur 4. Hieff UNICON™ Universal Blue premix vertoont een uitstekende reproduceerbaarheid, waarbij de amplificatiecurven van 90 duplicaatputjes een hoge coïncidentie vertonen en een standaarddeviatie van Ct-waarden van minder dan 0,2. Met behulp van 1 µL 293T cDNA als template werd het GAPDH-gen geamplificeerd.
5.Goede stabiliteit: de premix blijft onaangetast in zijn amplificatieprestaties, zelfs na 50 keer invriezen en ontdooien
| Vries-dooicycli | 0 keer | 10 keer | 30 keer | 50 keer |
| Gemiddelde Ct | 23.11 | 23.17 | 23.18 | 23.25 |
| ▲Ct | - | 0,06 | 0,07 | 0,14 |
Figuur 5. Hieff UNICON™ Universal Blue premix vertoont geen verandering in amplificatieprestaties na 50 keer invriezen en ontdooien. Met behulp van 1 µL 293T cDNA als template werd het C2orf68-gen geamplificeerd met premix die verschillende aantallen vries-ontdooicycli had ondergaan.
Klant Fterugsturen
Bron van het monster: Muis-ovariumkankercellijn ID8, HM1
Bron van het monster: epididymaal vet-RNA van muizen
Bron van het monster: Arabidopsis thaliana blad-RNA
Literatuur met een hoge impactfactor die gedeeltelijk is gepubliceerd met behulp van Yeasen qPCR-mix
[1] Li Y, Wang D, Ping X, et al. Lokale hyperthermietherapie induceert bruining van wit vet en behandelt obesitas. Cell. 2022;185(6):949-966.e19.doi:10.1016/j.cell.2022.02.004.(ALS=66.850)
[2] Seki T, Yang Y, Sun X, et al. Bruin-vet-gemedieerde tumorsuppressie door koud-veranderd globaal metabolisme. Nature. 2022;608(7922):421-428. doi:10.1038/s41586-022-05030-3.ALS=69.504)
[3] Chen P, Wang W, Liu R, et al. Olfactorische sensorische ervaring reguleert gliomagenese via neuronale IGF1. Nature. 2022;606(7914):550-556. doi:10.1038/s41586-022-04719-9.ALS=69.504)
[4] Dong W, Zhu Y, Chang H, et al. Een SHR-SCR-module specificeert het corticale cellot van peulvruchten om nodulatie mogelijk te maken. Nature. 2021;589(7843):586-590. doi:10.1038/s41586-020-3016-z.(ALS=69.504)
[5] Lu XY, Shi XJ, Hu A, et al. Voeding induceert cholesterolbiosynthese via de mTORC1-USP20-HMGCR-as. Nature. 2020;588(7838):479-484. doi:10.1038/s41586-020-2928-y.(ALS=69.504)
[6] Bi X, Wang K, Yang L, et al. Traceren van de genetische voetafdrukken van gewervelde landingen in niet-beenvissen met straalvinnige vissen. Cell. 2021;184(5):1377-1391.e14. doi:10.1016/j.cell.2021.01.046.(ALS=66.850)
[7] Liu S, Hua Y, Wang J, et al. RNA-polymerase III is vereist voor het herstel van DNA-dubbelstrengsbreuken door homologe recombinatie.ALS=66.850)
[8] Liu CX, Li X, Nan F, et al. Structuur en afbraak van circulaire RNA's reguleren PKR-activering in aangeboren immuniteit. Cell. 2019;177(4):865-880.e21. doi:10.1016/j.cell.2019.03.046.ALS=66.850)
[9] Han X, Wang R, Zhou Y, et al. In kaart brengen van de muizencelatlas door Microwell-Seq. Cell. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001.ALS=66.850)
[10] Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. Een bacteriële fosfolipidefosfatase remt pyroptose van de gastheer door ubiquitine te kapen. Science. 2022;378(6616):eabq0132.doi:10.1126/science.abq0132.(ALS=63.714)
[11] Yu Q, Liu S, Yu L, et al. RNA-demethylering verhoogt de opbrengst en biomassa van rijst- en aardappelplanten in veldproeven. Nat Biotechnol. 2021;39(12):1581-1588. doi:10.1038/s41587-021-00982-9.ALS=68.164)
[12] Han F, Liu X, Chen C, et al. Hypercholesterolemie-risico-geassocieerde GPR146 is een wees-G-proteïne-gekoppelde receptor die het cholesterolgehalte in het bloed reguleert bij mensen en muizen. Cell Res. 2020;30(4):363-365. doi:10.1038/s41422-020-0303-z.ALS=46.297)
[13] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucine-tRNA-synthase-2-expressieve B-cellen dragen bij aan immuno-evasie bij colorectale kanker. Immuniteit. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017.(ALS=43.474)
[14] Bi Q, Wang C, Cheng G, et al. Microglia-afgeleide PDGFB bevordert neuronale kaliumstromen om basale sympathische toniciteit te onderdrukken en hypertensie te beperken. Immuniteit. 2022;55(8):1466-1482.e9. doi:10.1016/j.immuni.2022.06.018.(ALS=43.474)
[15] Wang X, Ni L, Wan S, et al. Koortstemperatuur controleert kritisch de differentiatie en pathogeniteit van T-helper 17-cellen. Immuniteit. 2020;52(2):328-341.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.01.006.(ALS=43.474)
[16] Xiao J, Li W, Zheng X, et al. Targeting 7-Dehydrocholesterol Reductase Integreert Cholesterol Metabolisme en IRF3 Activering om Infectie te Elimineren. Immunity. 2020;52(1):109-122.e6. doi:10.1016/j.immuni.2019.11.015.(ALS=43.474)
[17] Zhang X, Zhang C, Qiao M, et al. Uitputting van BATF in CAR-T-cellen verbetert de antitumoractiviteit door resistentie tegen uitputting en de vorming van centrale geheugencellen te induceren. Cancer Cell. 2022;40(11):1407-1422.e7. doi:10.1016/j.ccell.2022.09.013.ALS=38.585)
[18] Wang XY, Wei Y, Hu B, et al. c-Myc-gedreven glycolyse polariseert functionele regulerende B-cellen die pathogene ontstekingsreacties veroorzaken. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):105. Gepubliceerd 2022 Apr 18. doi:10.1038/s41392-022-00948-6.(ALS=38.104)
[19] Fan H, Hong B, Luo Y, et al. Het effect van wei-eiwit op virale infectie en replicatie van SARS-CoV-2 en pangolin coronavirus in vitro. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):275. Gepubliceerd 24 nov. 2020. doi:10.1038/s41392-020-00408-z.(ALS=38.104)
[20]Ren Y, Wang A, Wu D, et al. Dubbele remming van aangeboren immuniteit en apoptose door humaan cytomegalovirus-eiwit UL37x1 maakt efficiënte virusreplicatie mogelijk. Nat Microbiol. 2022;7(7):1041-1053. doi:10.1038/s41564-022-01136-6.ALS=30.964)