Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (High Rox) is een pre-oplossing voor 2× real-time kwantitatieve PCR-amplificatie, met een hoge fluorescentie-intensiteit, hoge gevoeligheid en specificiteit en een hoge amplificatieopbrengst. De kerncomponent, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, wordt warm gestart door een antilichaammethode, die niet-specifieke amplificatie veroorzaakt door primer-annealing tijdens monsterbereiding effectief kan remmen. Tegelijkertijd voegt de formule factoren toe om de amplificatie-efficiëntie van de PCR-reactie te verbeteren en facilitators om de amplificatie van genen met verschillende GC-inhoud (30~70%) gelijk te maken, zodat de kwantitatieve PCR een goede lineaire relatie kan verkrijgen in een breed scala aan kwantitatieve regio's. Het product maakt gebruik van de gemengde kleurveranderingsreactie van verschillende kleurstoffen om de pipetteerbewerking te bewaken, wat het optreden van pipetteerfouten effectief vermindert.

Functies

Pipetteren volgen: verminder het risico op gemiste fouten/toevoegfouten

Uitstekende versterking: goede lineariteit over een breed lineair bereik

Hoge precisie: kan nauwkeurig sjablonen onderscheiden met een concentratieverschil van 2 keer

Goede herhaalbaarheid: Kleine inter-well variabiliteit in replicatiewells, wat resulteert in een betere herhaalbaarheid

Stabiel en betrouwbaar: het reactiesysteem kan 24 uur bij kamertemperatuur worden bewaard en het product blijft onaangetast na 20 vries-dooicycli

Toepassingen

Analyse van verschillen in genexpressie

Absolute kwantitatieve analyse

Specificaties

Componenten

Verzending en opslag

Dit product moet gedurende 1 jaar bij -25~-15℃ bewaard worden.

Cijfers

Figuur 1. Binnen het dynamische bereik kunnen betrouwbare resultaten worden verkregen.

Met behulp van 2 µL plasmide-templates met een gradiënt van 10^1-10^7 werden de gerelateerde genen versterkt. Hieff UNICON™ ColorGPS Master Mix kan effectief een sjabloonhoeveelheidsbereik van 7 ordegroottes detecteren en bereikt daarmee een goede lineariteit binnen een breed lineair bereik.

Figuur2Kan nauwkeurig verschillen in sjabloonconcentratie van 2-voudig onderscheiden.

Met behulp van 2 µL plasmide verdund in een 2-voudige gradiënt als template, werden de gerelateerde genen versterkt. Hieff UNICON™ ColorGPS Master Mix kan nauwkeurig de verschillen in sjabloonconcentratie oplossen.

Figuur3Er wordt een kleine variatie tussen putjes waargenomen, wat duidt op een betere herhaalbaarheid.

Met behulp van tientallen kopieën van plasmide als template werd amplificatie uitgevoerd met verschillende fluorescerende kwantitatieve reagentia volgens de procedures die in hun respectievelijke instructiehandleidingen zijn gespecificeerd. De SD-waarden geven aan dat het nieuwe product, vergeleken met andere reverse transcriptiereagentia, kleinere verschillen heeft tussen replicatenputjes en een betere herhaalbaarheid.

Figuur4. Flexibeler, geschikt voor standaard- of snelle procedures.

Bij de standaardprocedure worden de denaturatietijd en de extensietijd respectievelijk op 10 seconden en 30 seconden ingesteld, terwijl bij de snelle procedure de denaturatietijd en de extensietijd respectievelijk op 3 seconden en 10 seconden worden ingesteld om de Ct-waarden te detecteren die overeenkomen met 10 doelgenen.Uit de resultaten blijkt dat de Ct-waarden die met het nieuwe product worden verkregen in zowel de standaard- als de snelle procedure, sterk gecorreleerd zijn en dat het nieuwe product goede resultaten kan behalen met de snelle procedure.

Figuur5Nadat het reactiesysteem is bereid, kan het 24 uur lang stabiel blijven bij kamertemperatuur.

Met behulp van verschillende genen van muis, menselijke 293-cellen en Arabidopsis thaliana als doelen, werd het reactiesysteem na het voorbereiden in het donker geplaatst bij verschillende temperaturen gedurende 24 uur voor detectie. Vergeleken met directe verwerking, is het detectieverschil voor verschillende genen niet groter dan 0,5 Ct, wat aangeeft dat stabiele resultaten ook kunnen worden verkregen met langdurige bewerkingen.

Documenten:

Handleidingen

11190_Handmatig_Versie EN20241218.pdf