Vindt u het nog steeds vervelend dat de homologe recombinatie van multifragment- of superlange fragmenten zo weinig efficiënt is en dat er zo weinig kolonies zijn?
Nog steeds voor de drager of het fragment is kostbaarder, lage opbrengst, om grondstoffen te besparen, het gebruik van kleine systemen lage concentratie ligatie, maar de ligatie-efficiëntie is laag en lastig?
Vergelijking van eenstapsklonen met traditionele enzymrestrictie-kloneringsmethoden
| Methode | Voorbereiding van insertiefragmenten | Beperking van beperkingslocaties | Universele eigenschap | Verbind tijd | Positief tarief |
| Snelle recombinante kloneringstechniek in één stap | Stap 1 zuivering | Geen | ★★★★★ | De snelste tijd was 5 min | Tot 95% |
| De restrictie-digestie- en ligatie-kloneringstechniek | Stap 2 zuivering | Ja | ★★ | de nacht doorbrengen | Verschillende genen variëren enorm |
Productvoordeel
Oriëntatie: 1-7 DNA-fragmenten in één stap klonen.
Eenvoudig: Meerdere fragmenten kunnen in één buisje worden afgebonden.
Snel: snelste ligatie in 5 min.
Hoge efficiëntie: hoge positieve kloonsnelheid.
Klein systeem: Het totale ligatiesysteem kan zo klein zijn als 6 μL.
Overlengte: Meer dan 25 kb (drager- en fragmentlengte) voor ligatie.
Prestatie Weergave
- Efficiënte recombinatie van een enkel fragment 6 μL klein systeem
Afbeelding 1 10 ng enkele fragmenten met lage invoer werden afgebonden in de niet-reanimatie-receptieve cellentoestand van het 6 μL kleine systeem.De resultaten toonden aan dat 10923ES betere prestaties had dan concurrerende producten, met een hoge ligatie-efficiëntie, meer kolonies en een positief percentage van 100%. AB: Gereconstitueerde conversieplaat. De molaire verhouding van drager (10 kb) tot insertfragment (1 kb) was 1:2. C: PCR-identificatie van insertfragment. M:
- Efficiënte recombinatie van meerdere fragmenten
Afbeelding 2 Zes fragmenten (7,6 kb) geligeerd. De resultaten toonden aan dat 10923ES betere prestaties had dan concurrerende producten, met meer kolonies en een positief percentage van 100%. AB: Gereconstitueerde conversieplaat. De molaire verhouding van drager (11,6 kb) tot insertfragment (7,6 kb) was 1:2. C: PCR-identificatie van insertfragment. M:
- Lage concentratie multifragment efficiënte recombinatie
Afbeelding 3 Bind de fragmenten met een lage concentratie van vijf en zes afzonderlijk af. De resultaten toonden aan dat 10923ES een stabiele connectiviteit vertoonde bij lage concentraties, met een hoog aantal bacteriën en een positiviteitspercentage van 100%. AB: Recombinant Conversion Plate. CD: Insertion fragment PCR-identificatie-elektroforese-afbeelding, M:
- Reagens stabiliteit
Afbeelding 4 Nadat het 7 dagen op 37℃ was geplaatst, lieten de resultaten zien dat 10923ES stabiel bleef in het verbinden van de vijf en zes fragmenten bij lage concentraties. AF: Recombinante conversieplaat. GH: Insertiefragment-PCR-identificatie-elektroforese-afbeelding, M:
Klantcase
-
Efficiënte reorganisatie van kleine systemen
Figuur 5 10923ES werd aan een enkel fragment geligeerd in een 10 μL klein reactiesysteem, met een positief percentage van 100%. A: Gereconstitueerde conversieplaat. B: PCR-identificatie van insertfragment. Dragergrootte: 5.631 bp; Doelfragmentgrootte: 1.384 bp.
Afbeelding 6 10 μL Klein systeem, enkelvoudige fragmentverbinding en puntmutatiekloon, 100% positief percentage. A & C: Recombinatietransformatieplaten. B: PCR-identificatie van insertfragmenten, banen 1-5 zijn kolonie 1, kolonie 2, negatieve controle, positieve controle (genoom als template), positieve controle (PCR-gezuiverd fragment als template). D: Elektroforegram van PCR-identificatie van insertfragmenten.
-
Efficiënte recombinatie van korte fragmenten met een lage concentratie
Afbeelding 7 10923ES aansluiten van de fragmenten met lage concentratie. Vergeleken met concurrerende producten was het aantal kolonies hoog en was het positieve percentage (10 / 11) > 90,9%. AB: Gereconstitueerde conversieplaat. C: PCR-identificatie van insertfragment. Dragergrootte: 3.000 bp; doelfragmentgrootte: 441 bp.
-
Efficiënte en snelle multisegmentligatie
Afbeelding.8 10923ES vier segment ligatie, hoge GC en korte segment combinatie verbinding, vergeleken met S merk, heeft een hoger bacteriegetal van 10923ES en een positief percentage van 100%. D: Recombinant conversie tablet. E: Insert fragment sequencing identificatiekaart. F: Sanger sequencing bevestigde de succesvolle verbinding tussen vector en fragmenten, en de sequencing op de verbindingsplaats was correct.
Sterkte Ster Product Aanbeveling
10923ES Bestelkanaal
| Productoriëntatie | Nik ben | Kunst.Nee | Sspecificaties |
| 1 – 7 fragmenten werden in één stap samengevoegd en de recombinatiereactie werd in de snelste 5 minuten voltooid | Hieff KloonTM Universele II One Step Cloning Kit | 20 Ton/50 Ton |
Ruitgelaten Pproducten
| Productoriëntatie | Nik ben | Kunst.Nee | Sspecificaties |
| Hoge betrouwbaarheid PCR | 2× Hoog CanaceTM AdvanceFast PCR Master Mix (met kleurstof) | 1 ml/5×1 ml | |
| Snelle PCR-upgrade, kan kolonie-PCR zijn en is geschikt voor complexe template-amplificatie | 2×HieffTM Ultra-Rapid II HotStart PCR Mastermix | 1 ml/5×1 ml |