Hoofdstuk 1: PCR-technologie
1.1 Principes van PCR
PCR (Polymerase Chain Reaction), of polymerasekettingreactie, verwijst naar het DNA-polymerase gekatalyseerd door de oorspronkelijke DNA-streng als sjabloon, met een specifieke primer voor de uitbreiding van het startpunt, de toevoeging van dNTP, Mg2+ En extensiefactoren, versterking van de versterking factoren. Door middel van denaturatie-, annealing- en extensiestappen, De in vitro replicatie van de dochterstreng is complementair aan het template-DNA van de ouderstreng, dat elk doel-DNA in vitro snel en specifiek kan versterken.
1.2 Classificatie van DNA-polymerasen
DNA pol is een belangrijk enzym voor cellulair replicatie van DNA. Volgens thermische stabiliteit, synthesevermogen, snelheid, betrouwbaarheid en specificiteit, het kan worden geclassificeerd als Taq DNA-polymerase, high-fidelity DNA-polymerase, hot-start DNA-polymerase, direct-expansion DNA-polymerase, lang gefragmenteerd DNA-polymerase enzym, snelle DNA-polymerase, meervoudige DNA-polymerase enzovoort.
De meest voorkomende hiervan is Taq DNA-polymerase, dat polymerase-activiteit heeft aan het 5'→3'-uiteinde en exonuclease-activiteit aan het 5'→3' einde, maar nee 3'→5' eindcorrectieactiviteit. De belangrijkste eigenschap van Taq is zijn goede hittebestendigheid, die bestand is tegen thermische denaturatie stap van PCRwaardoor het niet nodig is om halverwege het proces extra enzym toe te voegen. Taq heeft echter een lage betrouwbaarheid omdat het geen proefleesactiviteit heeft. wordt voornamelijk bereikt door de concentratie en verhouding van magnesiumionen en dNTP's.
Een DNA-polymerase met een hoge betrouwbaarheid bevat een polymerisatiecentrum en een splitsingscentrum. Het polymerisatiecentrum heeft een 5'→3' DNA-polymerase-activiteit, die kan katalyseren de synthese van DNA in de richting van 5'→3'; het splitsingscentrum heeft een 3'→5' exonuclease-activiteit, die de reparatie van base-mismatches kan uitvoeren. Daarom heeft high-fidelity DNA-polymerase, naast de kenmerken van Taq DNA-polymerase, ook een corrigerende activiteit, verantwoordelijk voor uitsnijden de niet-passende nucleotiden, waardoor de nauwkeurigheid van het product wordt gegarandeerd.
Het diagram hierboven laat zien hoe DNA-polymerase werkt [1].
Directe PCR (Direct PCR) is een reactie die gebruikt ongezuiverde monsters voor PCR-amplificatie en dierproeven of plantenweefsels voor directe amplificatie. Momenteel,
De bovenstaande afbeelding toont de directe PCR-techniek.
A. Directe methode: neem een kleine hoeveelheid monster en voeg deze direct toe aan de PCR Mastermix voor PCR-identificatie;
B. Lysismethode: Nadat het monster is genomen, voegt u het toe aan de lysisoplossing om het genoom vrij te maken. Neem een kleine hoeveelheid van de lysissupernatant en voeg deze toe aan de PCR Master Mix voor PCR-identificatie.
1.3 Veelgestelde vragen en oplossingen
| Probleem | Reden | Oplossing |
| Zonder versterkte banden | Problemen met het elektroforesesysteem | Problemen met nucleïnezuurkleurstof, gelconcentratie en elektroforesebuffer oplossen. |
| Onjuiste denaturatietemperatuur | Is de aangegeven temperatuur van het PCR-instrument in overeenstemming met de werkelijke temperatuur? Als de temperatuur te hoog is, wordt het enzym snel in de eerste paar cycli; als deze te laag is, is de denaturatie van de template niet compleet. | |
| Verontreiniging van protease en nuclease in het reactiesysteem | Het reactiesysteem moet 5-10 minuten worden verwarmd tot 95°C voordat het Taq-enzym wordt toegevoegd. | |
| Primer-fout | Controleer de primerspecificiteit of herontwerp primers met BLAST. | |
| Sjabloon bevat onzuiverheden | Vooral in formaldehyde gefixeerde en in paraffine ingebedde weefsels bevatten vaak mierenzuur, wat leidt tot DNA-depurinatie en invloed heeft op de PCR-resultaten. | |
| Verslechtering en falen van de primer | Bevestig dat de synthetische primers correct, gezuiverd of geïnactiveerd zijn als gevolg van onjuiste opslagomstandigheden. | |
| Minder hoeveelheid PCR-product | Onjuiste gloeitemperatuur | Er werd een gradiënt-PCR-reactie ontworpen om de annealingtemperatuur te optimaliseren met een gradiënt van 2 graden. |
| Aanwezigheid van remmers in het DNA-sjabloon | Zorg ervoor dat het DNA-sjabloon schoon is. | |
| Langdurige denaturatie | Langdurige denaturatie leidt tot inactivering van DNA-polymerase. | |
| Verlenging te kort | De extensietijd is te kort. Stel de extensietijd in op het principe van 1kb/min. | |
| Hoeveelheid DNA-sjabloon te laag | Vergroot de hoeveelheid DNA-sjabloon. | |
| Onvoldoende hoeveelheid primers | Verhoog het primergehalte in het systeem. | |
| Onvoldoende aantal PCR-cycli | Verhoog het aantal reactiecycli. | |
| Meerdere banden | Slechte primerspecificiteit | Primerontwerpsoftware zoals BLAST en Primer werd gebruikt om de primerspecificiteit te controleren of primers opnieuw te ontwerpen. |
| Overmatig aantal lussen | Verhoog de hoeveelheid sjabloon op de juiste manier en verminder het aantal cycli. | |
| Exogene DNA-verontreiniging | Zorg voor een schone werking. | |
| Overmatig aantal sjablonen | De hoeveelheid plasmide-DNA moet <50ng zijn, terwijl de hoeveelheid genomisch DNA <200ng moet zijn. | |
| Te veel primer | Verminder het aantal primers in het reactiesysteem. | |
| De reactieoplossing is niet goed gemengd | Zorg ervoor dat de reactiebuffer volledig gesmolten en goed gemengd is. | |
| Mag Hoge concentratie | Pas de concentratie van het gebruikte Mg indien nodig aan. | |
| Hoge enzymdosering of slechte enzymkwaliteit | Verminder de hoeveelheid enzym of vervang het door een andere bron. | |
| Lage gloeitemperatuur, lange gloei- en rektijd | Verhoog de annealingtemperatuur om de denaturatie- en extensietijd te verkorten, of ontwerp een gradiënt-PCR-reactie om de annealingtemperatuur te optimaliseren. | |
| Problemen met de PCR-mix zelf | Als het een PCR-premix betreft, kan het aan de kwaliteit van het reagens zelf liggen. In dat geval is het raadzaam om de batch te veranderen of een ander merk te gebruiken. | |
| Verkeerde maat | Cbesmetting | Maak de werkbank schoon met nieuwe reagentia en tips. |
| Onjuist gebruik van sjablonen of primers | Vervang primers en sjablonen. | |
| Genotype | Sequentieanalyse en BLAST-onderzoeken werden uitgevoerd op de bestudeerde genen. |
Hoofdstuk 2: Nucleïnezuurelektroforese
2.1 Principes van nucleïnezuurelektroforese
De beweging van geladen deeltjes onder invloed van een elektrisch veld naar een elektrode die tegengesteld is aan hun elektrische eigenschappen, wordt elektroforese genoemd. Het gebruiken van de geladen deeltjes in het elektrische veld bewegen met verschillende snelheden en scheiding van de technologie bereiken, wordt elektroforese genoemd. Nucleïnezuurelektroforese is een belangrijk hulpmiddel voor nucleïnezuuronderzoek en is een integraal onderdeel van technieken zoals nucleïnezuurprobes, nucleïnezuuramplificatie en sequentieanalyse. Nucleïnezuurelektroforese is meestal uitgevoerd in agarose of polyacrylamidegels. Verschillende concentraties van agarose en polyacrylamide kunnen gels vormen met verschillende maaswijdtes van moleculaire zeven, die gebruikt kunnen worden om nucleïnezuurfragmenten met verschillende moleculaire gewichten te scheiden.
2.2 Agarosegelelektroforese
Agarose is een lineair polymeer dat uit zeewier wordt gewonnen. Agarose wordt verhit in een bufferoplossing en gesmolten tot een heldere, transparante sol, die vervolgens wordt gegoten in een gelatinevorm en stolt tot een vaste matrix die bekend staat als een gel, waarvan de dichtheid afhangt van de concentratie van agarose.
Agarose gelelektroforese is een soort elektroforesemethode waarbij agarose als dragermedium wordt gebruikt, en het belangrijkste verschil tussen de analytisch principe en andere ondersteunende elektroforese is dat het de dubbele rol van "moleculaire zeef" en "elektroforese". De gel wordt in de elektrisch veld, onder de actie van de elektrisch veld, de geladen nucleïnezuren migreren naar de positief pool door het gaas van de gel. De tarief van migratie wordt beïnvloed door de omvang van nucleïnezuurmoleculen, agaroseconcentratie, aangelegde spanning, elektrisch veld, elektroforesebuffer en de hoeveelheid ingebedde kleurstof. Na een geschikte tijd van elektrofoorSis onder verschillende omstandigheden, nucleïnezuurfragmenten met verschillende groottes en conformaties zullen zich op verschillende posities op de gel bevinden, waardoor het doel van scheiding wordt bereikt.De scheiding van agarosegel heeft een breed scala, wordt veel gebruikt bij het terugwinnen van DNA-knipgel, DNA-isolatie en wordt gebruikt om te ondersteunen of het DNA recombinant is, plasmide, enz. Of het plasmide nu wel of niet wordt geknipt, verschillende concentraties agarosegel kan worden gescheiden van de lengte van 200bp naar 50kb van DNA fragmenten.
2.3 Experimentele methoden
Maken lijm
Neem een concentratie van 1% als voorbeeld: weeg 1 g agarose af, giet het in een erlenmeyer van 250 ml, voeg 100 ml 0,5×TBE-elektroforesebuffer toe en meng het goed, kook het in een magnetron en dan Laat het aan de lucht drogen tot ongeveer 60℃, voeg een geschikte hoeveelheid nucleïnezuurkleurstof toe en schud het goed en giet het vervolgens in een schone gelplaat die al is voorbereid, neem een kam met beide handen om verticaal in de geloplossing plaatsen en wachten tot gel zijn op natuurlijke wijze laten afkoelen tot het volledig gestold is (25-30 min.).
Verwijder de lijmkam
Breng de gel voorzichtig over naar de elektroforesetank (met de gellade of alleen de gel)), Plaats de monsterputzijde in de negatieve pool en voeg 0,5× TBE toe elektroforesebuffer totdat de gel ongeveer 1 mm onder de gel zit.
Toevoegen steekproef
Voeg 10× laadbuffer toe (laden buffer) naar de DNA-monsters, Meng goed en voeg het monstermengsel langzaam toe aan de suBsamengevoegde gel putten met een pipetpistool, waarbij 5-10 μL monster per putje wordt toegevoegd (niet meer dan 40 μL). Over het algemeen moet het eerste putje worden gevuld met DNA-marker, het tweede met positieve controle (gedefinieerd DNA), En de derde met negatieve controle (reagens of water)), En De volgorde van de monsters moet worden vastgelegd.
Elektroforese
Bedek de elektroforese tank, sluit de draden, schakel de stroom in en stel de elektroforesespanning en -stroom in en tijd parameters. Over het algemeen zijn de spanning mag niet hoger zijn dan 5 V/cm (de lengte heeft betrekking op de afstand tussen de positieve en negatieve polen van de elektroforesetank), En de elektroforesetijd is over het algemeen 15-30 minuten.
Einde van elektroforese
Verwijderen de gel (zonder gellade) en beeld het af onder het UV-beeldvormingssysteem om een duidelijk elektroforetisch beeld te krijgen, bewerk vervolgens het elektroforetische beeld met de software voor beeldbewerking en Voorzie het van een etiket met de monsterinformatie, datum en operator.
2.4 Veelgestelde vragen en oplossingen
| Probleem | Reden | Oplossing |
| Doelband ontbreekt | Klein DNA raakt uit gel | Verkort de elektroforesetijd, verlaag de spanning en verhoog de gelconcentratie. |
| DNA-banden met een vergelijkbaar moleculair gewicht zijn niet gemakkelijk te onderscheiden | Verleng de elektroforesetijd om de optimale gelconcentratie te bereiken. | |
| Het doelfragment is te groot voor conventionele elektroforese. | Geanalyseerd met behulp van gepulste gelelektroforese. | |
| Geen doelclip | Het PCR-proces was gebrekkig en versterkte het doelproduct niet. | |
| Vage DNA-banden | Oude elektroforesebuffer | Wanneer elektroforesebuffer meerdere keren wordt gebruikt, neemt de ionsterkte af, stijgt de pH-waarde langzaam en verzwakt het spoelvermogen, wat van invloed is op het elektroforese-effect. Daarom wordt aanbevolen om de elektroforesebuffer regelmatig te vervangen. |
| DNA-afbraak | Voorkom nuclease-verontreiniging. | |
| De gebruikte elektroforese-omstandigheden zijn niet geschikt voor elektroforese | De elektroforesespanning mag niet hoger zijn dan 20 V/cm en de temperatuur moet < 30 °C zijn. De temperatuur van de elektroforese van grote DNA-strengen moet < 15 °C zijn. Controleer of de gebruikte elektroforesebuffer voldoende buffercapaciteit heeft. | |
| Overmatig DNA-onderzoek | Verminder de hoeveelheid DNA die in de gel wordt opgepikt. | |
| DNA-monsters zijn te zout | Overtollig zout werd verwijderd door middel van ethanolprecipitatie voorafgaand aan elektroforese. | |
| eiwitverontreiniging | Door fenolextractie vóór elektroforese worden eiwitten verwijderd. | |
| Monsterconcentratie te hoog | De concentratie van het bovenste monster moet lager zijn dan 500 ng/putje. Een te hoge concentratie heeft invloed op de snelheid van de elektroforese en het verloop ervan, wat resulteert in slepen en wazigheid. | |
| Zwakke of geen banden | Onvoldoende monstergrootte van DNA | Het vergroten van de hoeveelheid DNA-opname |
| DNA-afbraak | Het vermijden van nuclease-verontreiniging van DNA | |
| Ongeschikte lichtbron voor nucleïnezuurkleurstoffen | Selecteer de lichtbron met de juiste golflengte volgens de instructies voor de nucleïnezuurkleurstof. | |
| Banden niet gescheiden | tijdgebrek | Verleng de elektroforesetijd |
| Onjuiste gelconcentratie | De lijmconcentratie is te hoog, waardoor er te veel weerstand is tegen het loskomen. | |
| De concentratie van zoutionen in het monster is te hoog | Een hoge concentratie zoutionen verhoogt de elektroforetische weerstand en voorkomt de scheiding van banden, bijvoorbeeld bij verteerde monsters die endonucleasebuffer bevatten. | |
| Niet-specifieke banden | RNA-verontreiniging | Herbereiding van monsters |
| Besmetting tussen monsters | Vervangen van de punt tijdens het vullen; voorkomen van morsen van monsters met volumes >40 μl. |
2.5 Polyacrylamidegelelektroforese
Polyacrylamidegels worden gevormd door de chemische reactie tussen acrylamidemonomeer, ketenpolymerisatiekatalysatoren N,N,N',N'-tetramethylethyleendiamine (TEMED) en ammoniumpersulfaat, en crosslinkingmiddel N,N'-methyleenbisacrylamide. Het acrylamidemonomeer polymeriseert in aanwezigheid van een katalysator om lange kettingen, die zijn verknoopt door een vernettingsmiddel om een gel te vormen, waarvan de poriegrootte wordt bepaald door de ketenlengte en de mate van vernetting. De poriegrootte wordt bepaald door de ketenlengte en de mate van cross-linking. De kettinglengte is afhankelijk van de concentratie van acrylamide en de mate van vernetting van het polymeer kunnen worden gewijzigd door de verhouding van acrylamide tot vernettingsmiddel aan te passen.
Polyacrylamidegelelektroforese kan worden gebruikt om verschillend monsters gebaseerd op verschillen in aanval, moleculaire grootte en vorm van de geëlektroforetiseerde monstersHet combineert moleculair zeven en elektrostatisch zeven. , en heeft een hoger oplossend vermogen dan agarosegelelektroforese. DNA-fragmenten slechts verschillend door één nucleotide kan gescheiden worden.
Polyacrylamidegelelektroforese wordt gebruikt om DNA-fragmenten van minder dan 1 kb lang te analyseren en te prepareren. Afhankelijk van de grootte van de te isoleren nucleïnezuurfragmenten, gels van verschillend kan worden voorbereid.
De effectieve scheidingsbereiken voor verschillende concentraties acrylamide en DNA worden in de onderstaande tabel weergegeven:
| Geconc. (%) | Effectief scheidingsbereik (bp) |
| 3.5 | 100 tot 2000 |
| 5 | 80 tot 500 |
| 8 | 60 tot 400 |
| 12 | 40 tot 200 |
| 15 | 25 tot 150 |
| 20 | 10 tot 100 |
2.4 Richtlijnen voor de selectie van verwante producten
Conventionele PCR | ||||
| Specificatie | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Versterkingslengte | ≤10-15 kb | ≤5 kb | ≤5 kb | ≤4 kb |
| Verlengingstijd | 1-10 seconden/kb | 30 seconden/kb | 30 seconden/kb | 30 seconden/kb |
| Product Eindstructuur | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Gloeitemperatuur | 60℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| GC-compatibiliteitsbereik | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| 5'-3' exonuclease-activiteit | Cadeau | Cadeau | Cadeau | Cadeau |
| Kolonie-PCR | Geschikt | Geschikt | Geschikt | Geschikt |
| Genidentificatie | Geschikt | Geschikt | Geschikt | Geschikt |
| Multiplex-PCR | Niet geschikt | Niet geschikt | Niet geschikt | 3-4-plex-PCR |
| Elektroforese-indicator | Paars-rood | Blauw | Kleurloos | Blauw |
| Warme start | Warme start | Geen warme start | Geen warme start | Warme start |
| Vooraf gemengd/Kit | Voorgemixt | Voorgemixt | Voorgemixt | Voorgemixt |
Directe PCR | ||||
| Specificatie | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Producttype | Muis directe versterking | Bloed directe amplificatie | Directe versterking van planten | |
| Versterkingslengte | ≤1 kB | ≤8 kb | ≤1 kB | |
| Verlengingstijd | 30 s/kb | 3-5 s/kb voor ≤2 kb, | 60 s/kb | |
| 10 s/kb voor ≤8 kb | ||||
| Monster lysistijd | 15 minuten | 0-3 minuten | 0-10 minuten | |
| Product Eindstructuur | Stompe punt | Stompe punt | Stompe punt | |
| Gloeitemperatuur | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| GC-compatibiliteitsbereik | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| 5'-3' exonuclease-activiteit | √ | √ | √ | |
| Genidentificatie | √ | √ | √ | |
| Multiplex-PCR | 3-4 panelen | |||
| Directe monsterversterking | √ | √ | √ | |
| Elektroforese-indicator | Blauw | Kleurloos | Blauw | |
| Warme start | √ | √ | √ | |
| Vooraf gemengd/Kit | Kit (met mix) | Kit (met Mix + Buffer) | Kit (met mix) | |
| Geschikte organismen | Muis, Rat | Mens, muis, geit, kip, varken, etc. | Rijst, maïs, tabak, koolzaad, tarwe, sojabonen, enz. | |
| Geschikt weefsel/materiaal | Staart, oor, teen (met spier) en andere organen | Vers bloed met EDTA, Heparine, Citraat, etc., gekoeld (bevroren) bloed, commerciële droge bloedvlekken | Jonge bladeren, oude bladeren, zaailingen, jonge stengels | |
| Voorbeeldinvoer | Weefsel: 5-10 mg; Staart: 1-5 mm | Volbloed: 0,5%-20%, droge bloedvlek: 1 mm² | Blad: 1-10 mm, Zaad: 1-3 mm | |
Hoge betrouwbaarheid PCR | ||||
| Specificatie | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Versterkingslengte | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | |
| Verlengingstijd | 5 seconden/kb | 30 seconden/kb | 30 seconden/kb | |
| Trouw (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Product Eindstructuur | Stompe punt | Stompe punt | Stompe punt | |
| Gloeitemperatuur | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| GC-compatibiliteitsbereik | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| 5'-3' exonuclease-activiteit | Afwezig | Afwezig | Afwezig | |
| Elektroforese-indicator | Blauw | Kleurloos | Blauw | |
| Enkelvoudig enzym/premix | Voorgemixt | Enkelvoudig enzym | Voorgemixt | |
| Tolerantie | / | / | Bloed, muizenweefsellysaat | |
Nucleïnezuurelektroforese | ||||
| Productcategorie | Cat.nr. | Productnaam | Sollicitatie | |
| Agarose | 10208ES | Agarose | Routinematige nucleïnezuurelektroforese | |
| 10221ES | Hoge zeef-agarose (PCR-kwaliteit) | Geschikt voor het scheiden van DNA-fragmenten van 20 bp-800 bp, vergelijkbaar met polyacrylamidegel | ||
| 10226ES | Agarose tabletten (0.5 gram/tablet) | Geschikt voor routinematige agarosetoepassingen | ||
| Nucleïnezuur kleurstof | 10202ES | YeaRed Nucleïnezuur Gelkleuring (10.000× in water) | Wateroplosbaar, met spectrale eigenschappen die vergelijkbaar zijn met EB, exciteerbaar bij 300 nm UV-licht | |
| DNA-marker | 10510ES | GoldBand 1 kb DNA-ladder | 250-12000 bp (13 banden) | |
| 10515ES | GoldBand 50 bp DNA-ladder | 50-1000 bp (14 banden) | ||
| 10507ES | GoldBand 100bp DNA-ladder | 100-1500 bp (12 banden) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp plus DNA-ladder | 100-3000 bp (14 banden) | ||
| 10517ES | GoldBand 200 bp DNA-ladder | 200-5000 bp (12 banden) | ||
| 10518ES | GoldBand 500 bp DNA-ladder | 500-5000 bp (8 banden) | ||
| 10501ES | GoldBand DL2000 DNA-marker | 100-2000 bp (6 banden) | ||
| 10504ES | GoldBand DL5000 DNA-marker | 100-5000 bp (9 banden) | ||
| 10505ES | GoldBand DL10.000 DNA-marker | 100-10000 bp (10 banden) | ||
| 10511ES | GoldBand volledige DNA-ladder | 100-12000 bp (20 banden) | ||
| 10512ES | GoldBand DL15000 DNA-marker | 250-15000 bp (7 banden) |
2.5 Publicaties met behulp van nucleïnezuurelektroforeseproducten (Partiaal)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI is een coloncryptreceptor voor TcdB van hypervirulente clade 2 C. difficile. Cel. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, een nieuw genexpressiesysteem met stress-opgewekte waterstofperoxide ide-eliminatie-eigenschap en anti-verouderingseffect. Signaaltransductie en gerichte therapie. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (IF: 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Remming van micropeptide PACMP veroorzaakt synthetische dodelijke effecten door CtIP te verlagen en poly(ADP-ribosyl) ation. mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:17.970)
[4] Zhu M, DaiX. Groeiremming door veranderde (p)ppGpp-niveaus is het gevolg van niet-optimale toewijzing van middelen in Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, Harsonowati W, et al. Identificatie van schimmelpathogenen ter bestrijding van naoogstziektes Passievrucht (Passiflora edulis) Verval en Multi-Omics Vergelijkende Padanalyse Onthult Paars is meer resistent nt voor pathogenen dan een gele cultivar. j Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Gepubliceerd 2021 okt 19. doi:10.3390/jof 7100879 (INDIEN:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Structurele karakterisering van een Neutraliserend Nanobody met brede activiteit tegen SARS-CoV-2-varianten. Front Microbiol. 2022;13:875840. Gepubliceerd 2022 jun. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (IF:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 is essentieel voor melaninebiosynthese en pathogeniteit van Colletotrichum gloeosporioides. pathogens. 2020;9(2) :141. gepubliceerd 2020 feb. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Gepubliceerd 2020 feb. doi:10.3390/pathogenen9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. CircRNA-expressieprofielen in deltamethrin-gevoelig en -resistent
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp Biochem Fysiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Groeiremming door gewijzigde (p) ppGpp niveaus zijn het resultaat van een niet-optimale toewijzing van hulpbronnen in Escherichia coli[J]. Nucleïnezuuronderzoek, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. Selenocysteïne-specifieke massaspectrometrie onthult weefsel-onderscheidende selenoproteomen en kandidaat-selenoproteïnen[J]. Celchemische biologie, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Publicaties met PCR-producten (gedeeltelijk)
[1] Wang Y, Ja Z, LiX, en al. Cytoplasmatisch DNA-detectie door KU complex in oud CD4+-T cel potentieert T cel activa tie En verouderingsgerelateerd auto-immuun ontsteking. Immuniteit. 2021;54(4):632-647.e9. doi:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W, en al. "Ster" miR-34a En CXCR4 antagonist gebaseerd nanoplex voor binairen coöperatief migratiebehandeling tegenT metastatisch borst kanker. J Controle Uitgave. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] QiaoY, Ik J, Ge R, en al. Een Steekproef En Detectie Micronaald Lapje voor Psoriasis MicroRNA Biomarker
Analyse in Tussentijds Vloeistof. Anaal Chem. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lijn V, Ja X, Huang Z, en al. Grafeen Op oxide gebaseerd Onderdrukking van Niet-specificiteit in Lus-gemedieerd Isother malAmplificatie Het gevoelige mogelijk maken Detectie van Cyclooxygenase-2 mRNA in Colorectaal Kanker. Anaal Chem. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Lijn Q, Huang Z, Ja X, en al. Laboratorium in A buis: Isolatie, extractie, En isanders versterking detectie van exosomaal lang niet-coderend RNA van maag kanker. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu C, Zou G, en al. 5-Formyluracil als A Multifunctioneel Gebouw Blok in Biosensor Ontwerpen[J]. Angew Chem Int Ed Engels: 26 juli 2018;57(31):9689-9693.（ALS 11.992)
[7] Wang M, Zhang S, Zheng G, en al. Winst-van-functie Mutatieion van Kaart14 Leidt tot Spontaan Psoriasis-achtig Huid Ontsteking door Versterkt Keratinocyt Reactie op IL-17A. Immuniteit. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] Zhang Y, Ding H, Wang X, en al. MK2 bevordert Tfcp2l1 degradatie via β-TrCP ubiquitine ikigase naar reguleren muis embryonale stam celzelfvernieuwing. Cel Verslag 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (IF:9.423)
[9] Lijn V,Ye X, Yang B, en al. Realtime fluorescentie lus-gemedieerd isothermisch versterkendatie proef voor snel En gevoelig detectie van Streptokokken gallolyticus subsp. gallolytikus geassocieerd met colorectaal kanker[J].
Analytisch En bioanalytisch scheikunde, 2019, 411(26): 6877-6887. (IF6.35)
[10] Lijn V, Ja X, Huang Z, en al. Grafeen Op oxide gebaseerd Onderdrukking van Niet-specificiteit in Lus-gemedieerd Isother malAmplificatie Gevoelige cookies inschakelen Detectie van Cyclooxygenase-2 mRNA in Kleurcataal Kanker[J]. Analyti kal scheikunde, 2019. (IF6.35)
Bronvermelding:
[1] Loeb LA, Jr R. DNA-polymerasen en menselijke ziekten[J]. Nature Reviews Genetics.