Beschrijving
Plant tissue direct PCR kit is een kit die verschillende soorten plantenbladeren direct kan amplificeren door PCR, met brede aanpasbaarheid en sterke stabiliteit. De kit gebruikt een uniek lysisbuffersysteem, dat snel een verscheidenheid aan plantenmonsters kan lyseren en genomisch DNA kan vrijgeven. Het vrijgekomen genomische DNA kan direct worden gebruikt als een template zonder proteïne, RNA of secundaire metabolieten te verwijderen in de PCR-reactie. Bovendien vereist de kit een kleine hoeveelheid monster, zo laag als 1 mm plantenbladeren kunnen worden gebruikt voor experimenten.
De 2×Plant Master Mix die in deze kit wordt geleverd, heeft een sterke amplificatiecompatibiliteit en kan het lysaat van het monster direct gebruiken als een template voor efficiënte en specifieke amplificatie. Dit reagens is een 2-voudig geconcentreerd PCR-reactiemengsel, dat alle componenten bevat die worden gebruikt voor PCR-amplificatie, behalve de template en primers, wat het operationele proces aanzienlijk vereenvoudigt en de kans op contaminatie verkleint.
De kit kan worden gebruikt voor de identificatie van transgene planten, plantgenotypering, etc.
Verzending
De producten worden geleverd met koelelementen.
Opslag
1. Reagens 10187-A [Buffer P1] kan 1 jaar bewaard worden bij 4℃.
2. Reagens 10187-B [Buffer P2], gebruikt voor het neutraliseren van lysaat, wat gunstig is voor het langer bewaren van het monster en kan gedurende 1 jaar bij 4℃ worden bewaard.
3. Reagens 10187-C [2× Plant Master Mix] kan 1 jaar bewaard worden bij -20℃. Vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien.
Voorzorgsmaatregelen
1. Bij het uitvoeren van bladexperimenten wordt aanbevolen om vers verzameld bladweefsel te gebruiken. Als het een langdurig bevroren weefsel is, moet het worden bewaard bij -80 °C. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien moet zoveel mogelijk worden vermeden om templatedegradatie te voorkomen en de PCR-efficiëntie te beïnvloeden. Het bladweefsel is geschikt voor jonge bladeren. Als het een volwassen blad is, vermijd dan het gebruik van het weefsel van de hoofdnerf van het blad.
2. Voor de beste amplificatie-efficiëntie wordt aanbevolen om het fragment binnen een lengte van 1 kb te amplificeren.
3. Gebruik bij het nemen van monsters een perforator of mes om een monster van geschikte grootte te nemen. Als de monsters verschillend zijn, moet de perforator of het mes elke keer worden schoongemaakt voordat het monster wordt verwerkt.
4. Voor bladweefsel wordt aanbevolen om bladeren van 1-10 mm te nemen, te kleine bladlengtes leiden tot een lage PCR-amplificatieopbrengst, te veel zal de PCR-reactie remmen, gebruik de methode van thermisch kraken, pletten met een pipetpunt en vermalen met een grinder om plantenbladeren te behandelen. Na de behandeling moet het worden geschud en gecentrifugeerd. Zorg ervoor dat u de supernatant meeneemt voor testen. Neerslag zal de PCR-reactie ernstig remmen.
5. Draag voor uw eigen veiligheid en gezondheid een labjas en wegwerphandschoenen tijdens de operatie.
6. Dit product is ALLEEN bedoeld voor onderzoeksdoeleinden!
| Veel voorkomende problemen | Mogelijke oorzaken | Oplossingen |
| Er waren geen banden in de positieve controle en de te testen monsters. | Het PCR-reactiesysteem of de reactieomstandigheden waren niet geschikt. | Gebruik gradiënt-PCR om de optimale reactieomstandigheden voor PCR te onderzoeken. |
| Onjuiste opslag van PCR-reagentia inactiveert deze. | 2×PCR Mix moet worden bewaard bij -20℃, vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien bij gebruik. Bij frequent gebruik kan het kort worden bewaard bij 4°C. | |
| Problemen met het primerontwerp. | Probeer de primers opnieuw te ontwerpen om dit te controleren. | |
| De positieve controle heeft een band van belang, terwijl het te testen monster geen band of een zwakke band heeft. | De verhouding tussen lysisbuffer en neutralisatiebuffer is niet geschikt en het lysismengsel heeft invloed op de pH-waarde van het PCR-systeem. | Onder normale omstandigheden moet de pH van het geneutraliseerde lysismengsel rond de 7-8 liggen (het lysisproduct en Buffer P2 moeten strikt volgens de verhouding 5:1 worden geneutraliseerd). |
| Het lysismengsel is onjuist of te lang bewaard en het DNA-genoom is afgebroken. | De lysaatmix kan 5 dagen bij 4°C bewaard worden. Probeer een vers bereide lysaatmix te gebruiken voor PCR. | |
| De hoeveelheid toegevoegde sjablonen is niet geschikt. | Optimaliseer de hoeveelheid toegevoegde template binnen het bereik van <5% van het reactiesysteem. | |
| Onvoldoende aantal PCR-cycli. | Verhoog het aantal PCR-cycli op de juiste manier, bij voorkeur 35-40 cycli. Vanwege de complexiteit van de template is het over het algemeen beter om 5-10 cycli meer PCR-reactie te gebruiken dan gezuiverde DNA-template. | |
| Niet-specifieke amplificatie | PCR-annealtemperatuur te laag, cyclusnummer, primerconcentratie of templateconcentratie te hoog. | Verhoog de PCR-annealtemperatuur en verlaag het aantal PCR-cycli, de primerconcentratie of de templateconcentratie. |
| PCR-primermismatch. | PCR-primers opnieuw ontwerpen. | |
| De temperatuur is te hoog bij het voorbereiden van het PCR-reactiesysteem of de tijd die na de voorbereiding wordt aangehouden is te lang. | De bereiding van het PCR-reactiesysteem wordt uitgevoerd bij lage temperatuur en de PCR-amplificatiereactie wordt zo snel mogelijk uitgevoerd nadat de bereiding is voltooid. | |
| Doelband verschijnt in negatieve controle | Verontreiniging van bedieningsinstrumenten of reagentia. | Alle reagentia en apparatuur die in het experiment worden gebruikt, moeten worden geautoclaveerd.Ga voorzichtig en voorzichtig te werk bij het hanteren om te voorkomen dat de doelsequentie in het monsterpistool wordt gezogen of uit de centrifugebuis valt. |
| Kruisbesmetting tussen monsters. | Elke monsternemer wordt slechts voor één monster gebruikt. U kunt ook na het nemen van één monster het monsternameblad onderdompelen in een 2% natriumhypochlorietoplossing, herhaaldelijk afspoelen en vervolgens de restanten drogen met een schone papieren handdoek. |
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.