Beschrijving
Deze kit kan direct en snel PCR-amplificatie van muizenweefsel uitvoeren (zoals muizenstaart, muizenoor, muizenteen, spier, enz.) en heeft een sterke monstercompatibiliteit. Uitgerust met een krachtige lysisbuffer kan deze kit snel monsters lyseren en genomisch DNA vrijgeven. Het lysaat kan direct aan het PCR-reactiesysteem worden toegevoegd zonder zuivering en de bediening is handig. Bovendien vereist deze kit een lage monsterinvoer en kan 5 mg muizenweefsel of 1-5 mm muizenstaart worden gebruikt voor experimenten.
De 2× Mouse Direct PCR Mix die door deze kit wordt geleverd, is een hot-start PCR-reactieoplossing met een 2-voudige concentratie. Het bevat alle componenten die worden gebruikt voor PCR-amplificatie, behalve de template en primers, wat het operationele proces aanzienlijk vereenvoudigt en de kans op contaminatie verkleint. De kit kan worden gebruikt voor transgeenidentificatie, muisgenotypering, enz.
Functies
- Minder monster nodig: 5 mg muizenweefsel of 1-5 mm muizenstaart
- Gemakkelijke templatevoorbereiding: geen noodzaak om te malen, geen noodzaak om DNA te verfijnen en te zuiveren, hogere flux, tijd- en geldbesparing
- Geoptimaliseerd PCR-systeem: met hogere specificiteit en sterkere tolerantie voor PCR-reactie-inhibitor
Toepassingen
- Identificatie van transgene muizen
- Genotypering van muizen
- Knockoutanalyse van muizengenen
Specificaties
| Productspecificatie | Uitrusting |
| Warme start | Ingebouwde Hot Start |
| Voorwaarden voor vervoer | IJspakkingen |
| Producttype | Directe PCR-kit |
| Toepassen naar (sollicitatie) | Muizenstaart, Muizenoor, Rattenen, Ingewanden, Huid, etc. |
Componenten
| Componenten nr. | Naam | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Buffer ML | 5×1 ml | 20×1 ml |
| 10185-B | Buffer MT | 0,6 ml | 2×1,25 ml |
| 10185-C | 2× Muis Direct PCR Mix | 500 μL | 2×1 ml |
- a) Buffer ML is een lysisbuffer die sterke proteïne-denatureringsmiddelen bevat. Draag handschoenen.
- b) Buffer MT is een stopbuffer die wordt gebruikt om de lysisfunctie van Buffer ML te stoppen.
- c) 2× Muis Direct PCR Mix: Bevat hot-start Taq DNA-polymerase, dNTP-mix, MgCl2, reactiebuffer, PCR-reactieverbeteraar, optimizer, stabilisator, elektroforese-indicatorkleurstof, enz.
Opslag
- Component A: Het product moet worden bewaard bij 2°C~8°C gedurende één jaar. Voor meervoudig gebruik gedurende een lange tijd, vermijd kruisbesmetting.
- Component B/C: Het product moet worden opgeslagen bij-25℃ ~ -15℃ voor een jaar. Vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien.
Cijfers
1. Resultaat van amplificatie van het doelgen (binnen 1 kb)
Figuur 1.Geschikt voor doelgenamplificatie binnen 1 kb.
2. Demonstratie van de verlengingssnelheid
Figuur 2. 500bp-gen, de extensiesnelheid kan oplopen tot 1 sec/kb.
Geciteerd uit "TFPI is een coloncryptreceptor voor TcdB van hypervirulente clade 2 C. difficile. Cell . 2022 17 mrt;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010."
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI is een coloncryptreceptor voor TcdB van hypervirulente clade 2 C. moeilijk. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Bruton's tyrosinekinase reguleert macrofaag-geïnduceerde ontsteking in de diabetische nier via NLRP3-inflammasome-activering. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Veelvoorkomend probleem | Mogelijke reden | Oplossing |
| Er waren geen banden in de positieve controle en de te testen monsters. | Het PCR-reactiesysteem of de reactieomstandigheden waren niet geschikt. | Gebruik gradiënt-PCR om de optimale reactieomstandigheden voor PCR te onderzoeken. |
| Onjuiste opslag van PCR-reagentia leidt tot verlies van activiteit. | 2× Mouse Direct PCR Mix moet worden bewaard bij -20°C en vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien tijdens gebruik. Bij frequent gebruik kan het kort worden bewaard bij 4°C. | |
| Problemen met het primerontwerp. | Probeer de primers opnieuw te ontwerpen om dit te controleren. | |
| De positieve controle heeft een band van belang, terwijl het te testen monster geen band of een zwakke band heeft. | Onjuiste opslag of langdurige opslag kan leiden tot verlies van reagensactiviteit. | Gebruik verse reagentia. |
| Voeg overtollig weefsellysaat toe. | Vergroot het reactiesysteem of verminder de hoeveelheid lysaat. | |
| Het lysismengsel is niet goed of te lang bewaard en het DNA-genoom is afgebroken. | Het lysaatmengsel kan 2-3 dagen bij 4°C bewaard worden.Probeer een vers bereid lysaatmengsel te gebruiken voor PCR. | |
| De hoeveelheid toegevoegde sjablonen is niet geschikt. | De hoeveelheid toegevoegde template werd geoptimaliseerd binnen het bereik van 1-10% van het reactiesysteem. | |
| Onvoldoende aantal PCR-cycli. | Verhoog het aantal PCR-cycli, bij voorkeur 35-40 cycli. Vanwege de complexiteit van de template, moeten PCR-reacties worden uitgevoerd met 5-10 cycli meer dan met gezuiverde DNA-template. | |
| Niet-specifieke amplificatie | PCR-annealtemperatuur te laag, cyclusnummer, primerconcentratie of templateconcentratie te hoog. | Verhoog de PCR-annealtemperatuur en verlaag het aantal PCR-cycli, de primerconcentratie of de templateconcentratie. |
| PCR-primermismatches. | PCR-primers opnieuw ontwerpen. | |
| De temperatuur is te hoog tijdens het voorbereiden van het PCR-reactiesysteem of de tijd nadat de voorbereiding is voltooid, duurt te lang. | De bereiding van het PCR-reactiesysteem wordt uitgevoerd bij lage temperatuur en de PCR-amplificatiereactie wordt zo snel mogelijk uitgevoerd nadat de bereiding is voltooid. | |
| Doelband verschijnt in negatieve controle | Verontreiniging van bedieningsinstrumenten of reagentia. | Alle reagentia of apparatuur in het experiment moeten worden geautoclaveerd. Wees voorzichtig en voorzichtig bij het hanteren om te voorkomen dat de doelsequentie in het monsterpistool wordt gezogen of uit de centrifugebuis wordt gemorst. |
| Kruisbesmetting tussen monsters. | Elke sampler wordt slechts voor één monster gebruikt. U kunt ook na het nemen van één monster de rand van de sampler onderdompelen in een 2% natriumhypochlorietoplossing, herhaaldelijk afspoelen en de resten vervolgens drogen met een schone papieren handdoek. |
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.