Beschrijving
Productbeschrijving
2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (met kleurstof) is een kant-en-klare 2× voorgemengde oplossing die Hieff Canace bevat™ Plus High-Fidelity DNA Polymerase, dNTP's en een geoptimaliseerd buffersysteem. De mix bevat twee monoklonale antilichamen die polymerase-activiteit en 3'→5'-exonuclease-activiteit bij kamertemperatuur remmen, wat zeer specifieke Hot Start PCR mogelijk maakt. De toevoeging van elongatiefactoren maakt amplificatie van lange fragmenten mogelijk, met doelfragmenten tot 13 kb. Dit enzym vertoont 5'→3' DNA-polymerase-activiteit en 3'→5'-exonuclease-activiteit, met een getrouwheid die 83 keer zo hoog is als die van Taq DNA-polymerase en 9 keer zo hoog als die van gewone Pfu DNA-polymerase. Het is geschikt voor het amplificeren van complexe templates, waardoor blunt-end PCR-producten worden geproduceerd.
2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (met kleurstof) biedt voordelen zoals eenvoud, hoge gevoeligheid, sterke specificiteit en uitstekende stabiliteit. Het reactiesysteem vereist alleen de toevoeging van primers en templates, en een tweestaps PCR-protocol kan worden gebruikt om de procedure te vereenvoudigen en tijd te besparen. Het product bevat elektroforese-trackingkleurstof, waardoor PCR-producten direct kunnen worden geladen voor gelanalyse. Bovendien bevat het een speciaal beschermend middel dat stabiele activiteit garandeert, zelfs na herhaalde vries-dooicycli.
Specificaties
Kat.NO. | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
Maat | 100 μL / 1 ml / 5×1 ml / 100×1 ml |
Opslag
Dit product moet worden bewaard bij -25~-15℃ gedurende 1 jaren.
Instructies
1. Aanbevolen PCR-reactiesystemen.
Componenten | Volume(μL) | Einde concentratie |
2× Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (met kleurstof)* | 25 | 1× |
Sjabloon*** | X | - |
Vooruit Prijm(10 μmol/L)** | 2 | 0.4 μmol/L |
Rkeerzijde Prijm(10 μmol/L)** | 2 | 0,4 μmol/L |
ddH2O | Tot 50 | - |
*De 1× eindconcentratie van de mix bevat 1 U/50 μL polymerase, 2 mmol/L Mg2+, en 200 μmol/L dNTP's.
**De aanbevolen uiteindelijke concentratie van primers in de PCR-reactie is 0,2-1 μmol/L, waarbij 0,4 μmol/L de voorkeur heeft.
***Aanbevolen templatehoeveelheden voor een 25 μL-reactiesysteem:
Sjabloontype | Fragmentgrootte (1 kb-10 kb) |
Genomisch DNA | 50 ng-200 ng |
Plasmide of viraal DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2,5 μL (niet meer dan 1/10 van het totale PCR-volume) |
2. Reactieprogramma.
1)Twee-stappenprotocol (bij voorkeur):
Cyclus stap | Twerkw. | Tijd | Cycli |
Initiële denaturatie | 98℃ | 3 mijn | 1 |
Denaturatie | 98℃ | 10 seconden | 30-35 |
Verlenging | 68℃ | 30 seconden/kb | |
Feindig enuitbreiding | 72℃ | 5 mijn | 1 |
2)Drie-stappenprotocol (conventioneel):
Cyclus stap | Twerkw. | Tijd | Cycli |
Initiële denaturatie* | 98℃ | 3 mijn | 1 |
Denaturatie | 98℃ | 10 seconden | 30-35 |
Gloeien** | 60℃ | 20 sec | |
Verlenging*** | 72℃ | 30 seconden/kb | |
Feindig enuitbreiding | 72℃ | 5 mijn | 1 |
*Initiële denaturatie: aanbevolen bij 98°C gedurende 3 min (5-10 min voor sjablonen met een hoge GC).
**Annealing: Aanbevolen bij 60°C gedurende 20 sec (instelbaar tussen 10-30 sec). Langdurig annealing kan vlekken op gels veroorzaken.
***Verlenging: aanbevolen bij 72°C gedurende 30 sec/kb (tot 60 sec/kb voor complexe sjablonen).
3)Gradient Annealing Protocol (aanbevolen voor moeilijke doelen):
Cyclus stap | Twerkw. | Tijd | Cycli |
Initiële denaturatie | 98℃ | 3 mijn | 1 |
Denaturatie | 98℃ | 10 seconden | 15 (afname met 1°C per cyclus) |
Gradiënt gloeien | 70-55°C | 20 sec | |
Verlenging | 72℃ | 30 seconden/kb | |
Denaturatie | 98°C | 10 seconden | 20 |
Gloeien | 55°C | 20 seconden | |
Verlenging | 72°C | 30 seconden/kb | |
Feindig enuitbreiding | 72℃ | 5 mijn | 1 |
4)Kenmerken van verschillende PCR-protocollen:
Protocoltype | Snelheid | Specificiteit | PCR-opbrengst | Detectiepercentage |
Twee-staps | Snelste | Hoog | Medium | Hoog |
Drie-stappen | Medium | Medium | Hoogste | Medium |
Gradiënt gloeien | Langzaam | Hoog | Medium | Hoog |
Notities
1.Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
2. Werk met labjassen en wegwerphandschoenen,voor uw veiligheid.
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.