Beschrijving
De Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit is een kit die volbloedmonsters direct kan versterken zonder DNA-zuivering of monstervoorbehandeling, en is compatibel met vers bloed, gekoeld (bevroren) bloed en commerciële gedroogde bloedvlekken die conventionele anticoagulantia bevatten zoals EDTA, heparine, citraat, enz. De kit bevat een genetisch gemanipuleerde DNA-polymerasecombinatie met hoge betrouwbaarheid en resistentie tegen PCR-remmers, 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffer met een sterke verlengingsfactor, versterkingsfactor voor versterking en een geoptimaliseerd buffersysteem om 8 kb genomische fragmenten efficiënt te versterken onder snelle verlengingsomstandigheden, en stel een verlengingstijd van 3-5 sec/kb in voor fragmenten onder 2 kb, waardoor de tijd voor identificatie en testen van bloedmonsters aanzienlijk wordt verkort.
Specificaties
| Trouw (vs. Taq) | 1 × |
| Warme start | Ja |
| Overhang | 3'-A |
| Polymerase | Taq DNA-polymerase (Cat: 10726) |
Componenten
| Nee. | Naam | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hoog® Bloed Geavanceerde PCR Buffer | 500 μIk | 2,5 ml |
| 10188-B | Hieff® Geavanceerde, zeer betrouwbare DNA-polymerasemix | 20 μIk | 100 μL |
| 10188-C | Positieve controle primermix (elk 10 μM) | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | 10× DNA-laadbuffer | 1 ml | 1 ml |
Instructies
Aanbevolen PCR-reactiesystemen.
| Componenten | Volume (μL) |
| ddH2O | tot 50 μL |
| 2× Hoog® Bloed Geavanceerde PCR Buffer | 25 μL |
| Voorwaartse primer (10 μM) | 2 μL |
| Omgekeerde primer (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Geavanceerde, zeer betrouwbare DNA-polymerasemix | 1 μL |
| Bloedmonster | X |
2. Een uiteindelijke concentratie van 0,4 μM per primer wordt aanbevolen; een te hoge concentratie resulteert in niet-specifieke amplificatie.
3. De optimale concentratie van het sjabloon van volbloed varieert van 0,5% tot 20% en het aanbevolen gebruik is 10% als initiële proefconditie, dat wil zeggen dat 5 μL volbloed als sjabloon wordt toegevoegd aan het 50 μL-reactiesysteem, waarbij erop wordt gelet dat er geen bloedstolsels worden opgezogen. Voor gedroogde bloedvlekken die zijn opgeslagen op Whatman®-filterkaarten, kunnen ongeveer 1 mm2 ronde stukjes papier met bloedvlekken worden genomen en direct in de PCR-reactie worden versterkt zonder voorbehandeling.
Reactieprogramma
| Cyclus stap | Temperatuur | Tijd | Cycli |
| Initiële denaturatie | 95℃ | 5 minuten | 1 |
| Denaturatie | 95℃ | 15 seconden | 30-35 |
| Gloeien | 60℃ | 15 seconden | |
| Verlenging | 72℃ | 3-10 seconden/kb | |
| Einde verlenging | 72℃ | 5 minuten | 1 |
De annealingtemperatuur is een generieke Tm-waarde of 1-2°C onder de primer Tm-waarde. Als het amplificatieproduct minder specifiek is, kan een annealingtemperatuurgradiënt worden vastgesteld om optimale annealingomstandigheden te vinden.
Verlengingstijd van 10 sec/kb kan de meeste doelfragmenten onder de 8 kb versterken, en 3-5 sec/kb kan de meeste fragmenten onder de 2 kb versterken. Als de versterkingsefficiëntie laag is, kan de tijd op passende wijze worden verlengd tot 20-30 sec/kb, en mag deze niet hoger zijn dan 60 sec/kb.
Verzending en opslag
De producten moeten worden bewaard bij -15℃ ~ -25℃ voor 1 jaar
Cijfers
Notities
1. Het wordt aanbevolen om het bloedsjabloon te gebruiken als 10% van het totale reactievolume, dat wil zeggen dat 5 μL volbloed wordt toegevoegd aan het 50 μL reactiesysteem als sjabloon, waarbij ervoor moet worden gezorgd dat er geen bloedstolsels worden opgezogen.
2. Verlengingstijd van 10 sec/kb kan de meeste doelfragmenten onder de 8 KB versterken, en 3-5 sec/kb kan de meeste fragmenten onder de 2 KB versterken. Als de versterkingsefficiëntie laag is, kan de tijd worden verlengd tot 30 sec/kb.
3. Na de PCR-reactie wordt aanbevolen om het reactieproduct te centrifugeren bij 4000 rpm (1000× g) gedurende 1-3 min om bloedcelfragmenten te laten neerslaan en de supernatant te nemen voor verdere analyse.
4. Dit product kan niet rechtstreeks voor medische diagnose worden gebruikt.
5. Draag voor uw eigen veiligheid en gezondheid een laboratoriumjas en wegwerphandschoenen.
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.