Met de snelle ontwikkeling van glycoproteomics en antilichaamgeneesmiddelenonderzoek heeft glycosyleringsmodificatie ook veel aandacht getrokken. Het contact tussen cellen en cellen, en tussen cellen en pathogenen, wordt voornamelijk voltooid door de interactie van suikers en eiwitten, en glycosylering bepaalt de adhesie-eigenschappen van glycoconjugaten. In IgG is de geconserveerde N-gekoppelde glycosylering bij Asn297 in de Fc-regio ook cruciaal voor zijn activiteit. Bovendien hebben sommige antilichamen ook extra N-glycanen, die samen met de geconserveerde site bij Asn297 in de Fc-regio de herkenning, halfwaardetijd en immuunrespons van het antilichaam beïnvloeden.
Proteïneglycosylering is een complexe post-translationele modificatie die de verbinding van glycaanketens op specifieke plaatsen op eiwitten omvat. Afhankelijk van het type glycaanketen worden glycoproteïnen verdeeld in N-gekoppelde glycoproteïnen, O-gekoppelde glycoproteïnen, enz.; bovendien wordt proteïneglycosylering ook beïnvloed door het type gastheercel en fermentatieomstandigheden (zoals kweekmedium, pH-waarde, temperatuur, enz.). Daarom hebben glycoproteïnen meestal heterogeniteit in glycosyleringspatronen, inclusief glycosyleringsplaatsen, glycosyleringsniveaus en de specifieke structuur van glycaanketens, waardoor glycaanketenanalyse en structurele karakterisering extreem uitdagend werk zijn. Om de maximale hoeveelheid structurele informatie over glycaanketens te verkrijgen, is de belangrijkste strategie van glycaanketenanalyse om eerst de glycaanketens van de eiwitten los te maken en vervolgens gedetailleerde analyse en karakterisering uit te voeren. Bij deze strategie is een efficiënte, nauwkeurige en stabiele deglycosyleringsmethode cruciaal.
Enzymatische methoden worden momenteel op grote schaal gebruikt voor deglycosylering. Voor N-gebonden glycanen zijn de meest gebruikte enzymen PNGase F, Endo H en Endo S.
Productintroductie
PNGase F is de meest effectieve enzymatische methode voor het verwijderen van bijna alle N-gebonden oligosacchariden in glycoproteïnen, die high-mannose, hybride en complexe oligosaccharide glycoproteïnen kunnen splitsen die verbonden zijn door asparagine, waarbij specifiek N-gebonden glycanen worden verwijderd. De splitsingsplaats is: de amidebinding tussen de binnenste N-acetylglucosamine (GlcNAc) en het asparagineresidu, terwijl de asparagine op het eiwit na enzymatische hydrolyse wordt omgezet in asparaginezuur.
Wanneer α1-6-fucose zich in de GlcNAc-kern bevindt, kan PNGase F ook knippen. Alleen wanneer α1-3-fucose zich in de GlcNAc-kern bevindt (veelvoorkomend in glycoproteïnen van planten en insecten), kan PNGase F niet knippen.
Ons bedrijf biedt conventioneel PNGase F (Cat#20407ES)，De conventionele PNGase F enzymatische reactie heeft echter meerdere uren nodig om antilichaam N-glycanen vrij te maken, en vanwege de voorkeur voor glycan-vrijgave kan onvolledige deglycosylering leiden tot bevooroordeelde resultaten, en de verkregen glycan-distributie vertegenwoordigt mogelijk niet de juiste samenstelling van therapeutische antilichamen. Daarom is het verkrijgen van een nauwkeurig N-glycan-profiel zo snel mogelijk cruciaal voor glycosyleringscontrole tijdens het productieproces van antilichamen en antilichaamfusie-eiwitten en andere biotherapeutische middelen.
Snelle PNGase F (Cat.nr. 20406ES) is een geoptimaliseerd recombinant reagens dat snel en volledig antilichamen, immunoglobulinen, fusie-eiwitten en andere glycoproteïnen in een paar minuten kan deglycosyleren. Dit enzym kan snel en zonder voorkeur alle N-glycanen verwijderen en kan direct worden gebruikt voor downstream chromatografie of massaspectrometrie-analyse.
Producteigenschappen:
Snel: Volledige en snelle deglycosylering in enkele minuten.
Hoge zuiverheid: Geen protease- of glycosidaseverontreiniging, zuiverheid ≥95%.
Niet-selectief: Verwijder snel en zonder voorkeur alle N-glycanen.
Goede compatibiliteit: Direct gebruikt voor downstream chromatografie of massaspectrometrie-analyse.
Endo-H is een recombinante glycosidase die de chitobiosekernstructuur van oligosachariden met een hoog mannosegehalte en sommige hybride oligosachariden in N-glycoproteïnen kan splitsen, waardoor het N-gebonden mannosegehalte van glycoproteïnen wordt verwijderd.
Ons bedrijf biedt momenteel gistrecombinant tot expressie gebrachte Endo H (Cat#20414ES) aan.
Endo S is een zeer specifieke glycosidase die N-gebonden suikers kan splitsen tussen de chitobiose kernstructuren van wilde-type IgG zware ketens. De activiteit van glycosidase S is niet strikt afhankelijk van het peptide, dus X kan een proteïne, peptide, asparagine of vrije oligosaccharide zijn. Glycosidase S is actief ongeacht de aanwezigheid van kern alfa1-6 fucose of bisecting N-acetylglucosamine op het substraat. Het is echter inactief tegen oligosacchariden die tri- of tetra-antennair gesialyleerd en gedesialyleerd zijn.
Ons bedrijf biedt momenteel E. coli recombinant tot expressie gebrachte Endo S (Cat#20413ES) aan.
Aankoopgids
| Productnummer | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Productnaam | ||||
| Bron | Gist recombinante expressie | Gist recombinante expressie | Gist recombinante expressie | E.coli recombinante expressie |
| Specifieke activiteit | Niet van toepassing | 100000 U/ml | 1000000E/ml | 8000 eenheden/mg |
| Kloofplaats | Bijna alle N-gebonden glycanen | Bijna alle N-gebonden glycanen | N-gebonden hoge mannose glycanen | Splitst binnen de kerndisacharidestructuur van de zware keten van IgG |
| Spijsverteringstijd | 10 minuten | 1-3 uur | 1-3 uur | 1 uur |
| Glycosylering | Geschikt | Geschikt | Geschikt | Geschikt |
| Eiwitstructuur | Geschikt | Geschikt | Geschikt | Geschikt |
Testgegevens
1.Snelle PNGase F Test
1: ProteïnemarkerCat#20350ES) 2: Concurrent + substraat of antilichaam 3: Concurrent + substraat of antilichaam
4:
2. Endo H-test
Figuur 2. Endo H enzymatisch splitsingseffect (substraat)
3. Endo S-test
Productinformatie
| Productnaam | Productnummer | Specificatie |
| 20406ES20/50 | 20 Ton/50 Ton | |
| 20407ES01/02 | 15000 U /75000 U | |
| 20414ES92/97 | 10000 U /50000 U | |
| 20413ES80/90 | 1000 eenheden/5 x 1000 eenheden |