Om meer behandelingsopties te bieden aan diabetespatiënten, kwamen er begin 21e eeuw enkele nieuwe diabetesmedicijnen op de markt, zoals glucagon-achtige peptide-1 (GLP-1)-analogen. Semaglutide, als een van de representatieve medicijnen van GLP-1-analogen, heeft in meerdere klinische onderzoeken bewezen effectief de bloedsuikerspiegel te reguleren in combinatie met verschillende orale hypoglycemische medicijnen, en kan patiënten helpen af te vallen, de systolische druk te verlagen en de functie van de β-cellen in de pancreas te verbeteren. De drie formuleringen (hypoglycemische injectie Ozempic, oraal hypoglycemisch medicijn Rybelsus en gewichtsverliesinjectie Wegovy) overschreden in 2023 de omzet van $ 20 miljard. Vanwege de uitstekende prestaties in bloedsuikerspiegel verlagen en afvallenDe industrie verwacht dat de verkoop van Semaglutide nog enige tijd sterk zal blijven, waardoor veel bedrijven zullen concurreren om de marktpositie!
De belangrijkste ketenstructuur van Semaglutide is een 29-aminozuur intermediair polypeptide Arg34GLP-1(9-37) of een 27-aminozuur intermediair polypeptide Arg34GLP-1(11-37). De productie en vervaardiging van dit intermediaire polypeptide omvatten voornamelijk chemische synthese en biopreparatiemethoden. Vergeleken met chemische synthese heeft biopreparatie de capaciteitsknelpunten doorbroken en is geschikter voor grootschalige continue productie, wat de productiekosten verder kan verlagen en meer significante economische voordelen kan opleveren.
Tabel 1. Voorbeelden van biopreparatiemethoden voor semaglutide-intermediaire polypeptiden
| Biopreparatiemethode (Voorbeeld 1)
| Biopreparatiemethode (Voorbeeld 2)
| |
| Gensynthese | Synthetiseer een fusie-eiwitsequentie, inclusief een fusiepeptide, enterokinase-splitsingsplaats en de belangrijkste doelmolecuulsequentie | Synthetiseer een tandem-expressiesequentie met de GLP-1(9-37)-gensequentie |
| Engineering Bacteriën Constructie | Introduceer in E. coli om recombinante, gemanipuleerde bacteriën te construeren | Introduceer in E. coli om recombinante, gemanipuleerde bacteriën te construeren |
| Fusie-eiwitexpressie | Door de fusiepeptidesequentie te optimaliseren, het isoelektrische punt en de hydrofiliteit van het eiwit te veranderen, enz., wordt de expressie van het fusie-eiwit effectief verhoogd
| Na inductie van fermentatie met hoge dichtheid wordt een tandem-expressie-insluitingslichaamproteïne verkregen dat GLP-1(9-37) tot expressie brengt, en de hervouwing levert een oplosbaar proteïne op |
| Intermediaire peptide-acquisitie | Nadat het fusie-eiwit enterokinase-splitsing, zuivering en andere stappen heeft ondergaan, kan het semaglutide-intermediair polypeptide Arg34GLP-1(9-37) worden verkregen | Het oplosbare eiwit kan worden verkregen na het ondergaan van een tweestaps enzymsplitsing met Kex2-enzym en carboxypeptidase B, en zuiveringsstappen, om het semaglutide intermediaire polypeptide GLP-1(9-37) te verkrijgen |
Enterokinase of Kex2-enzym gecombineerd met carboxypeptidase B is een belangrijk enzym voor de hoofdpeptideketen van semaglutide (biopreparatiemethode). Het enzymversnijdende effect en de kosten zijn cruciaal voor de productie.Yisheng Biology streeft ernaar om stabiele enzymgrondstoffen te leveren aan farmaceutische bedrijven, door enzymen van hoge kwaliteit en volledige kwaliteitscontrolenormen te bieden om klanten te helpen de productiecapaciteit en batchstabiliteit te verbeteren, kosten te verlagen en snel in te stappen de markt.
1.Recombinante enterokinase
Recombinante enterokinase (rEK) is een zeer zuivere runder-intestinale enterokinase lichte keten subeenheid, die dezelfde specifieke knipenzymactiviteit heeft als natuurlijk geëxtraheerde enterokinase, met een knipplaats van Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, die in staat is het fusie-eiwit te verwijderen dat zich aan de N-terminus van het eiwit bevindt om onnodige fusie-tags te verwijderen, en is een veelgekozen protease voor N-terminale fusie. Het heeft een laag niveau van onregelmatig knippen op andere residuen.
Yisheng biedt momenteel recombinante enterokinases aan van verschillende bronnen, verschillende kwaliteiten en al dan niet met His-tags, waaruit klanten kunnen kiezen.
Functies
Hoge specificiteit: Een specifieke protease die knipt aan het carboxyluiteinde van lysine dat vier asparaginezuren bevat: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;
Hoge zuiverheid: Geen andere proteasen, geen niet-specifieke knipsels;
Geen dierlijke oorsprong: Recombinante productie, geen exogene virale contaminatie, geen gebruik van dierlijke grondstoffen in het productieproces;
Stabiele kwaliteit: Batchproductie kan een stabiele en continue batchproductie garanderen; geen verschillen tussen batches, stabiele kwaliteit;
Voldoende capaciteit: 500L fermentor kan ~50 MU enterokinase verkrijgen,
Levering van verschillende productkwaliteiten: Producten van R&D-klasse (20395ES), GMP-klasse (20396ES) en GMP-klasse voldoen aan het kwaliteitsmanagementsysteem ISO 13485.
Testgegevens
Enterokinase-activiteitstest:
Figuur 1. Het enzym-snijdende effect van
Opmerking: Het positieve substraat (20391ES) is een fusie-eiwit dat is samengesteld uit twee specifieke eiwitsequenties die zijn verbonden door DDDDK (enterokinase recognition and cutting site), met een totaal moleculair gewicht van ongeveer 64,6 kDa, dat specifiek kan worden geknipt in twee onafhankelijke eiwitfragmenten door enterokinase, met moleculair gewichten van respectievelijk ongeveer 27,9 kDa en 36,6 kDa. Dit product, als enterokinasesubstraat, kan worden gebruikt voor semi-kwantitatieve of kwalitatieve enzymactiviteitsdetectie van recombinante of natuurlijke enterokinase.
Enterokinase zuiverheidstest:
Opmerking: De theoretische waarde van enterokinase is 22,7 kDa. Vanwege het glycosyleringseffect na expressie in Pichia pastoris, toont de SDS-PAGE aan dat het molecuulgewicht van het doeleiwit ongeveer 40 kDa is. Over het algemeen hebben de geglycosyleerde banden een licht diffuse band die omhoog loopt (zoals weergegeven in de rechter afbeelding). Ons bedrijf kan ook deglycosyleringsenzym Endo H (Cat#20414) leveren aan klanten om te deglycosyleren en gel te laten lopen om de zuiverheid te meten (zoals weergegeven in de linker afbeelding).
Enterokinase-snijspecificiteitstest:
Figuur 3.
Let op: Onder dezelfde omstandigheden,
Enterokinase herhaalde vries-dooi, versnelde stabiliteitstest:
Figuur 4.
Opmerking:
Bij opslag bij 25°C gedurende 7, 16, 32 dagen, en bij 37°C gedurende 7, 14 dagen, veranderde de enzymactiviteit niet significant ten opzichte van de oorspronkelijke enzymactiviteit.
2.Recombinant Kex2-enzym, carboxypeptidase B
Tabel 2.
| Productnummer | 20418ES | 20417ES |
| Product Naam | Recombinant Kex2-protease, tot expressie gebracht in gist
| Recombinant CPB, tot expressie gebracht in E. coli
|
| Productkwaliteit | GMP-klasse | GMP-klasse |
| Bron | Recombinante expressie van Pichia pastoris | Recombinante expressie van E. coli |
| Activiteit | ≥10,0 eenheden/mg pro
| ≥170 USP-eenheden/mg per dag
|
| Kloofplaats | Herkent en splitst specifiek peptidebindingen aan het carbonzuuruiteinde van dibasische aminozuren zoals Arg-Arg, Lys-Arg | Hydrolyseert specifiek eiwitten aan de amino-terminale zijde van basische aminozuren (lysine, arginine, histidine) aan de C-terminus |
| Producttoepassing | 1. Procesenzymsplitsing bij de productie van peptidegeneesmiddelen. 2. Enzymatische vertering van eiwitten en peptide mapping, sequentiebepaling, etc. | 1. Productie van recombinante insuline en analogen daarvan. 2.Bepaling van aminozuren aan de C-terminus van eiwitten. 3. Verwijdering van histidine-tags aan de C-terminus van eiwitten. 4. Productie van andere recombinante peptidestoffen. 5. Enzymatische synthese van bepaalde speciale verbindingen. |
Kex2-enzym gecombineerd met carboxypeptidase B: vereisten voor tandem-expressieproces, hoge opbrengst van semaglutide-intermediair na enzymknippen
Ikverlichten GMP-kwaliteit enzymproductiebasis
ISO-gecertificeerde ultra-schone moleculaire enzymproductiebasis - UCF.ME, uitgerust met industriële AKTA-zuiverings- en fysicochemische analyseapparatuur, honderd-liter hogedichtheidsfermentatie-eenheden, tienduizend-klasse standaard schone werkplaatsen en geautomatiseerde productielijnen. Het beschikt over fermentatie- en zuiveringssystemen van verschillende specificaties, waaronder 5L, 10L, 30L, 100L, 500L en 1.500L, met de mogelijkheid om de productie op te schalen van 5L tot 1.500L op het gebied van moleculaire enzymindustrialisatie, waarbij volledig wordt voldaan aan de kernbehoeften van enzymgrondstoffen van downstreamklanten in verschillende stadia, zoals onderzoek en ontwikkeling, pilotschaal en grootschalige productie.
Informatie over promotionele producten
| Productnaam | Productnummer | Specificatie | Lijstprijs ($) | Promotie Prijs ($) |
| Recombinant runderenterokinase, His, tot expressie gebracht in gist | 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 U/500U/ 5000 Ik/ 100 KU/ 1 miljoen (1000 miljoen) | 45/115/ 825/ 12000/ 360000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
Gerelateerde productinformatie
| Productnaam | Productnummer | Specificatie |
| 20391ES03/11 | 1mg/4 mg | |
| Recombinant Kex2-protease, tot expressie gebracht in gist | 20418ES60 | 100 μg |
| 20417ES03/10 | 1mg/10mg | |
| 20414ES92/97 | 10000 U/50000 U |