Tag Antilichamen Inleiding
Tag-antilichamen worden gebruikt voor de detectie en zuivering van tag-sequenties op verschillende commerciële expressievectoren om de expressieniveaus en functies van de doelproteïnen te analyseren en te bepalen. Het principe achter hun gebruik is de antigeen-antilichaamreactie, waarbij deze tag-antilichamen specifiek kunnen binden aan de overeenkomstige tag-gefuseerde proteïnen. Hier is een korte lijst met enkele veelvoorkomende proteïnetags die geschikt zijn voor gebruik met tag-antilichamen:
Tabel 1. Inleiding tot verschillende eiwittags
| Label | Reeks | Functies | Toepasselijke scenario's |
| Vlag | VERDOMME | 1. Klein moleculair gewicht, verandert de functie van het fusie-eiwit niet, hydrofieler dan vergelijkbare tags; 2. Bevat enterokinase-herkenningsplaats (DDDDK), wat handig is voor het verwijderen van tags wanneer deze aan de N-terminus van het doeleiwit worden gefuseerd. | Geschikt voor de zuivering en detectie van fusie-eiwitten met een lage expressie in eukaryotische expressiesystemen. |
| HA | YPYDVPDYA | Afgeleid van het hemagglutinine-oppervlakteantigeen dat bepalend is voor het influenzavirus; vermijd gebruik in experimenten met apoptotische cellen. | Geschikt voor eiwitzuivering en -detectie. |
| Mijnc | Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu | Afgeleid van het menselijke proto-oncogen Myc; niet gebruiken in experimenten met menselijke cellen. | Over het algemeen niet gebruikt voor eiwitzuivering, geschikt voor detectie. |
| Productserie | Zuiveringshars-serie | ImmunoMagnetische Bead-serie | |||||
| Productnummer | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| Productnaam | Anti-HA MagBeads | Anti-MycMagBeads | |||||
| Liganden | Hoogwaardige muis IgG monoklonale antilichamen | Hoogwaardige muis anti-GFP/Flag/HA/Myc monoklonale antilichamen | |||||
| Eiwitbindend vermogen | ≥1,1 mg Flag-gelabelde fusie-eiwit/ml gel ≥1,5 mg HA-gelabeld fusie-eiwit/ml gel ≥0,9 mg Myc-gelabeld fusie-eiwit/ml gel | ≥0,8 mg GFP-gelabeld fusie-eiwit/mg kralen ≥0,6 mg Flag-gelabelde fusie-eiwit/mg kralen ≥0,4 mg HA-gelabeld fusie-eiwit/mg kralen ≥0,5 mg Myc-getagd fusie-eiwit/mg kralen
| |||||
| Matrix | 4% vernetwerkte agarosegel | Magnetische kralen op basis van siliciumdioxide | |||||
| Deeltjesgrootte | 45-165 µm | 200nm | |||||
| Voordelen | Lage niet-specifieke binding, hoge capaciteit | Hoge zuiverheid, hoge capaciteit, hoge specificiteit, handig gebruik met magnetisch rek | |||||
| Aanbevolen toepassingen | Affiniteitszuivering van gelabelde fusie-eiwitten op elke schaal, immunoprecipitatie (IP) | Immunoprecipitatie (IP), Co-immunoprecipitatie (COIP) | |||||
Testgegevens
1.
Figuur 1.
M: Proteïnemarker; 1: Pre-kolomlysaat van Flag-N, M, C-eiwitten; 2: Post-kolompermeaat van Flag-N, M, C-eiwitten; 3: Elutie (pH 2,7-elutie); 4: Elutie (pH 12-elutie)
2. De pijlen in de onderstaande afbeelding geven de doelwit-gelabelde eiwitten aan. De drie banden van boven naar beneden na het direct koken van de magnetische kralen zijn BSA, zware keten van antilichaam en lichte keten van antilichaam.
Figuur 2. Anti-Flag MagBeads zuivering van Flag-gelabelde eiwitten
1: E. coli lysaat met Flag-gelabeld eiwit 10 μL; 2: Supernatant na incubatie van E. coli lysaat met Flag-gelabeld eiwit met magnetische kralen 10 μL; 3: Direct koken van Flag-gelabeld eiwit met Anti-Flag MagBeads 10 μL; 4: Direct koken van Anti-Flag MagBeads; 5: Marker
3.
Figuur 3. Anti-GFP MagBeads-zuivering van GFP-gelabelde eiwitten
1: E. coli lysaat met GFP-gelabeld eiwit 10 μL; 2: Supernatant na incubatie van E. coli lysaat met GFP-gelabeld eiwit met magnetische kralen 10 μL; 3: Direct koken van GFP-gelabeld eiwit met Anti-GFP MagBeads 10 μL; 4: Direct koken van Anti-GFP MagBeads; 5: Marker
Productinformatie
| Productnaam | Productnummer | Specificatie |
| 20584ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20586ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20587ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20565ES03/08 | 1 ml/5 ml | |
| Anti-HA MagBeads | 20566ES03/08 | 1 ml/5 ml |
| Anti-Myc MagBeads | 20567ES03/08 | 1 ml/5 ml |
| 20564ES03/08 | 1 ml/5 ml |