Achtergrondbeschrijving

Eiwitzuivering is het proces van het isoleren van het doeleiwit uit de totale eiwitten in het experimentele monster, terwijl de biologische activiteit en chemische integriteit van het doeleiwit behouden blijven. Tijdens de constructie van vectoren is het, naast enkele noodzakelijke expressie-elementen, ook noodzakelijk om rekening te houden met codonoptimalisatie en de keuze van tags. Het kiezen van de juiste tag is niet alleen gunstig voor eiwitzuivering en het bevorderen van de oplosbaarheid van eiwitten, maar mag ook geen invloed hebben op de structuur en functie van het eiwit en downstream-toepassingen. Deze sectie richt zich op het introduceren van His- en GST-tags.

Tabel 1. Zijn en GST Tag Inleiding

Label	Grootte kDa	Reeks	Zuiverheid	Oplosbaarheid	Tag verwijderen	Tag-klieving-enzym
Zijn	~0,84	HHHHHH	+	+	Niet vereist	TEV-protease
BTW	26	Bestaat uit 211 aminozuren	++	++	Vereist	3C-protease/PSP

Zijn tag-eiwitaffiniteitszuivering

HisSep Ni-NTA Agarose Resin is gebaseerd op sterk vernetwerkte agarosegel als matrix, chemisch gekoppeld aan tetra-gecoördineerd nitrilotriazijnzuur (NTA) als ligand, en na chelatie van nikkelionen (Ni²⁺), vormt het een zeer stabiele octaëdrische structuur met nikkelionen in het midden van het octaëder. Deze structuur kan nikkelionen beschermen tegen aanvallen van kleine moleculen. Vergeleken met Ni-IDA-hars is het stabieler en kan het bepaalde concentraties reductiemiddelen, denaturerende middelen of koppelingsmiddelen weerstaan ​​onder zware omstandigheden. Vergeleken met Ni-TED-hars heeft het een grotere adsorptiecapaciteit voor doelproteïnen. Het is een van de onmisbare harsen geworden voor het zuiveren van His-getagde proteïnen in laboratoria.

Figuur 1. Het productprincipediagram van His-hars.

Tabel 2. Yeasen Zijn selectiegids voor zuiveringsproducten

Productnummer	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Productnaam	HisSep Ni-NTA Agarose Hars	HisSep Ni-NTA Agarosehars 6FF	HisSep Ni-NTA 6FF-chromatografiekolom, 5 ml / 1 ml	ZijnSep Ni-NTA MagBeads
Matrix	Vernetwerkte 6% Agarose Gel	Sterk vernetwerkte 6% Agarose Gel	Sterk vernetwerkte 6% Agarose Gel	Magnetische Agarose Microbolletjes
Drukweerstand	0.1 MPa, 1 bar	0,3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar	n.v.t.
Capaciteit	＞40 mg 6×His-gelabeld eiwit/mL matrix	＞40 mg 6×His-gelabeld eiwit/mL matrix		> 40 mg 6×His-gelabeld eiwit/mL magnetische kralen
Suggestie voor zuivering	Matrix met gemiddelde drukweerstand, geschikt voor incubatiemethode, zwaartekrachtkolom kleinschalige zuivering	Matrix met hoge drukbestendigheid, kan worden gebruikt voor industriële grootschalige eiwitzuivering met eiwitzuiveringsinstrument		Snelle en gemakkelijke eiwitzuivering door magnetische scheiding
Tolerantie	8 M ureum, 6 M zoutzuur, 0,5-1 mM DTT, 1 mM EDTA, enz.
Sollicitatie	His-getagde eiwitzuivering is de eerste keuze, hoge belasting, gemiddelde tolerantie, vooral geschikt voor prokaryotische expressiezuiveringssysteem

Bijlage: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) Productkenmerken

1. Vergeleken met traditionele voorgepakte kolommen en harsen is het niet nodig om monsters meerdere keren te centrifugeren en de stroomsnelheid van het monster te regelen, waardoor de zuiveringstijd aanzienlijk wordt verkort.
2. Met zuivering in één stap kan een zuiverheid van meer dan 95% van het doeleiwit worden bereikt.
3. Hoge beoogde eiwitopbrengst: de opbrengst kan 70-80% bedragen.
4. Kan tot 5 keer hergebruikt worden.
5. Eenvoudig aanpassen van de concentratie en het volume van het doeleiwit.
6. Klein eiwitverlies en geen risico op eiwitdenaturatie of -neerslag.

GST Tag Proteïne Affiniteit Zuiveringsmedia

GST tag-eiwitaffiniteitschromatografie maakt gebruik van de covalente affiniteit tussen GST-fusie-eiwit en gefixeerd glutathion (GSH) via zwavelbindingen en zuivert op basis van het principe van GSH-uitwisselingselutie. Bij deze zuivering wordt een glutathion gecombineerd met de arm van de gel via een zwavelbinding en vervolgens wordt de specifieke actiekracht tussen glutathion en glutathion-S-transferase (d.w.z. GST-tag) gebruikt om het GST-gelabelde fusie-eiwit te laten combineren met de arm glutathion op de gel, waardoor het gelabelde eiwit van andere eiwitten wordt gescheiden. Glutathion heeft gewoonlijk een geoxideerde vorm GSSG en een gereduceerde vorm GSH. Wanneer we GSH-elutie gebruiken, zal GSH concurreren met het glutathion van de gel om te combineren met het fusie-eiwit, waardoor het doeleiwit wordt geëlueerd.

GSTSep Glutathione Agarose Resin is een GST tag proteïne zuiveringshars, structureel gemaakt door chemisch covalente combinatie van gereduceerd glutathion met 6% agarosegel als matrix door een 12-atomige arm. Dit ontwerp heeft de zuiveringsefficiëntie van de hars aanzienlijk verbeterd, waardoor deze meer dan 20 mg GST-fusieproteïne per milliliter medium kan dragen. Het product heeft een goede specificiteit en kostenprestatie en kan worden gebruikt om verschillende glutathione S-transferase, glutathione-afhankelijke eiwitten en glutathione recombinante derivaten in één stap te zuiveren.

Tabel 3. Yeasen Selectiegids voor GST-zuiveringsproducten

Productnummer	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Productnaam	GSTSep Glutathion Agarose Hars	GSTSep Glutathion Agarose Hars 4FF	GSTSep Glutathione 4FF Chromatografiekolom, 1 ml / 5 ml	GST-sep Glutathion MagBeads
Matrix	Vernetwerkte 6% Agarose Gel	Sterk vernetwerkte 4% Agarose Gel	Sterk vernetwerkte 4% Agarose Gel	Magnetische Agarose Microbolletjes
Drukweerstand	0.1 MPa, 1 bar	0,3 MPa, 3 bar	0,3 MPa, 3 bar	n.v.t.
Capaciteit	>20 mg GST-eiwit (40 kDa)/ml matrix	>10 mg GST-eiwit (40 kDa)/ml matrix		5-10 mg GST tag fusie-eiwit/mL magnetische kralen
Sollicitatie	Hoge belasting, Matrix met gemiddelde drukweerstand, geschikt voor incubatiemethode, zwaartekrachtkolom-kleinschalige zuivering, aanbevolen voor klanten op laboratoriumschaal	Toepassing Lage belasting, hoge matrixdrukweerstand, kan worden gebruikt voor industriële grootschalige eiwitzuivering met eiwitzuiveringsinstrument, gemakkelijker op te schalen		Laagste belasting, snelle en gemakkelijke eiwitzuivering door magnetische scheiding

Bijlage: GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES) Producteigenschappen

1. Zuiver direct zeer zuivere doelproteïnen uit biologische monsters door middel van magnetische scheiding in één stap, waardoor het zuiveringsproces aanzienlijk wordt vereenvoudigd en de zuiveringsefficiëntie wordt verbeterd. Geschikt voor handige GST-fusie-eiwitzuivering in wetenschappelijk onderzoek en industriële sectoren.
2. Bij het gebruik van deze magnetische kraal voor GST Pull-down experimenten is de procedure eenvoudiger, sneller en meer geautomatiseerd vergeleken met traditionele chromatografiemethoden, omdat magnetische scheiding geen herhaalde centrifugatie en lange incubatietijden vereist.

Productinformatie

Productpositionering	Productnaam	Productnummer	Specificatie
Zijn Tag Proteïne Zuivering	ZijnSep Ni-NTA Agarose Hars	20502ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	ZijnSep Ni-NTA Agarose Hars 6FF	20503ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	HisSep Ni-NTA 6FF-chromatografiekolom, 5 ml	20504ES08/25	5 ml/5x5 ml
	HisSep Ni-NTA 6FF-chromatografiekolom, 1 ml	20505ES03/08	1 ml/5x1 ml
	ZijnSep Ni-NTA MagBeads	20561ES08/25	5 ml/25 ml
GST Tag Proteïne Zuivering	GSTSep Glutathion Agarose Hars	20507ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	GSTSep Glutathion Agarose Hars 4FF	20508ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	GSTSep Glutathione 4FF Chromatografiekolom, 1 ml	20509ES03/08	1 ml/5x1 ml
	GSTSep Glutathione 4FF Chromatografiekolom, 5 ml	20510ES08/25	5 ml/5x5 ml
	GTSep Glutathion MagBeads	20561ES08/25	5 ml/25 ml