UCF.ME™ UltraNuclease, ook wel bekend als Totipotent nuclease, breedspectrum nuclease en niet-beperkende remmende endonuclease, is afkomstig van Serratia Marcescen, maar werd later opnieuw ontworpen en geproduceerd door de
1. Wat is totipotente nuclease?
2. Wat zijn de toepassingsscenario's van totipotente nuclease?
3. Welke voordelen moet totipotente nuclease hebben?
4. Veelgestelde vragen
5. Gerelateerde producten
1. Wat is totipotente nuclease?
Totipotente nucleasen zijn genetisch gemodificeerde endonucleasen met het vermogen om een breed scala aan nucleïnezuurvormen af te breken, waaronder enkelstrengs, dubbelstrengs, lineaire, natieve en gedenatureerde nucleïnezuren. Ze genereren 5'-monofosfaat-oligonucleotiden met lengtes variërend van 3 tot 5 basen en vertonen geen specifieke baseherkenning. Deze veelzijdige nucleasen vertonen robuuste stabiliteit en verteringsactiviteit onder verschillende omstandigheden, waardoor ze zeer efficiënt zijn voor het elimineren van nucleïnezuurresiduen in monsters of producten. Dit verbetert de zuiverheid van het monster en de biologische effectiviteit van producten, waardoor totipotente nucleasen de voorkeursenzymbereiding zijn voor wetenschappelijk onderzoek, vaccins en industrieën zoals eiwit- en polysaccharidefarmaceutica.
Bovendien spelen totipotente nucleasen een cruciale rol bij het verwijderen van nucleïnezuren tijdens de bereiding van vaccins, antilichamen, celtherapie en andere biologische producten, en zorgen ze voor naleving van FDA-regelgeving die voorschrijft dat resterend nucleïnezuur in het eindproduct voor therapeutisch gebruik niet meer dan 10 pg/dosis mag bedragen. Door nucleïnezuren af te breken, verlagen totipotente nucleasen de viscositeit van cellysaten, waardoor het oplossingsfiltratie-/ultrafiltratieproces tijdens de zuivering van celafgeleide deeltjes zoals virussen, AAV-vectoren en insluitlichamen wordt vergemakkelijkt. Dit stroomlijnt de verwerking, verbetert de centrifugatie, verbetert de scheidingsefficiëntie van neerslag en supernatant en verhoogt de effectiviteit van chromatografische zuivering, wat uiteindelijk de opbrengst en productzuiverheid verhoogt.
2. Wat zijn de toepassingsscenario's van totipotente nuclease?
UltraNuclease kent een breed scala aan toepassingen. Hieronder vindt u de specifieke gebruiksscenario's.
2.1 Viruszuivering (lentivirus, AAV, recombinant adenovirusvaccin, geïnactiveerd virus, oncolytisch virus, enz.)
Het gebruik van virussen binnen de biomedische sector neemt aanzienlijk toe, met toepassingen zoals vaccins, celtherapie, gentherapie en verschillende andere gebieden. Gastheercellen die verantwoordelijk zijn voor de productie van virussen zijn voornamelijk continuous passage cells (CCL's). CCL's vertonen een genetische aanleg voor ongereguleerde groei, waardoor ze de mogelijkheid hebben om oneindig te prolifereren. De aanwezigheid van rest-DNA van CCL's kan echter potentiële risico's opleveren, zoals ongecontroleerde proliferatie van menselijke cellen die leidt tot tumorvorming. Bovendien kunnen deze rest-DNA-fragmenten infectieuze virale genomen bevatten, wat zorgen oproept over infectierisico naast tumorigenese. Bijgevolg zijn strenge controlemaatregelen noodzakelijk voor het beheer van het rest-DNA in biologische producten, om hun veiligheid te waarborgen. In dit opzicht, onze UCF.ME™ UltraNuclease biedt een veilige oplossing voor viruszuivering.
Zout speelt een cruciale rol bij het verminderen van eiwit- of virusaggregatie, en vergemakkelijkt de scheiding van DNA en RNA van eiwitten en andere cellulaire componenten. Salt Active UltraNuclease, een niet-specifieke endonuclease, vertoont optimale activiteit bij hoge zoutconcentraties. In omstandigheden met veel zout krijgen enzymen betere toegang tot vrijgekomen DNA en RNA, waardoor hun afbraak wordt verbeterd. Nucleasen met verhoogde activiteit in omgevingen met veel zout blijken effectiever in het verbeteren van zuiveringsprocessen. Salt Active UltraNuclease kan worden gebruikt om de viscositeit in celsupernatanten en lysaten te verlagen, waardoor de zuiveringsefficiëntie onder omstandigheden met veel zout wordt verbeterd. Dit enzym reduceert ook nucleïnezuurresiduen van de gastheer tot het picogramniveau, waardoor de prestaties en veiligheid van verschillende biologische producttoepassingen worden verbeterd, waaronder viruszuivering, vaccinproductie en de productie van eiwit- en polysaccharidefarmaceutica.
2.2 Zuivering van het recombinante eiwit dat tot expressie komt in E. coli
Bepaalde eiwitten die tot expressie komen in E. coli hebben de neiging om te aggregeren tot insluitlichaampjes, wat het zuiveringsproces compliceert omdat ze vaak verweven raken met het gastheer-DNA. De resulterende gescheurde bacteriële cellen kunnen een hoge viscositeit vertonen, wat de efficiëntie van de eiwitzuivering aanzienlijk vermindert. Door echter 10-50 U/mL UCF.ME™UltraNuclease toe te voegen aan de bacteriële oplossing tijdens ultrasone verstoring en het monster te incuberen bij 37°C gedurende 30 minuten of 4°C gedurende de nacht na voltooiing van de verstoring, kan de viscositeit in de bacteriële oplossing effectief worden verlaagd. Dit verbetert op zijn beurt de efficiëntie van het zuiveringsproces aanzienlijk. Samenvattend, u kunt vertrouwen op onze UCF.ME™ UltraNuclease om de effectieve zuivering van het eiwit te vergemakkelijken.
2.3 Voorkom celklontering
De laatste jaren is het gebruik van cryopreserveerde perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) in immunoassays dramatisch toegenomen. Het grootste kenmerk van PBMC-cellen is dat ze na reanimatie heel gemakkelijk klonteren, wat gemakkelijk kan leiden tot een lage celkwaliteit en onbetrouwbare testresultaten. Wanneer de cellen worden gereanimeerd, wordt de juiste concentratie (25-50 U/mL) UCF.ME™UltraNuclease toegevoegd aan het kweekmedium en worden de cellen gecokweekt, wat celklontering effectief kan voorkomen. Daarom kunt u optimaal gebruikmaken van onze UCF.ME™ UltraNuclease om de kans op een succesvolle uitkomst te vergroten.
3. Welke voordelen moet totipotente nuclease hebben?
3.1 Breed scala aan toepassingen
UCF.ME™ UltraNuclease kan verschillende vormen van DNA en RNA knippen en afbreken onder uiteenlopende experimentele omstandigheden en kan worden toegepast om restanten nucleïnezuur in diverse biologische producten te verwijderen.
3.2 Hoge zuiverheid, hoge enzymactiviteit
Voor onze UCF.ME™ UltraNuclease is de enzymzuiverheid groter of gelijk aan 99% (HPLC) en de enzymactiviteit is groter of gelijk aan 1,5*106 U/mg (met behulp van een absolute kwantitatieve methode voor algemene substraten).
3.3 Sterk aanpassingsvermogen
UCF.ME™ UltraNuclease heeft een hoge stabiliteit bij opslag en invriezen-ontdooien. We bewaren UCF.ME™ UltraNuclease bij -20 °C, 4 °C en 37 °C om de trend van enzymactiviteit te detecteren. Bij plaatsing bij 37 °C gedurende 2 weken was er geen significante verandering in enzymactiviteit.Om de stabiliteit van het enzym te garanderen, gebruiken we een combinatie van droogijs en een ijspakking om vervoer UCF.ME™ UltraNuclease naar uw plaats. Het heeft ook een sterke tolerantie en kan zich aanpassen aan verschillende bedrijfsomstandigheden.
3.4 Voldoen aan de farmacopee
UCF.ME™ UltraNuclease wordt geproduceerd in UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) en is een soort Ultra-clean enzyme. Wat is een Ultra-clean enzyme? Het is een moleculair enzym dat voldoet aan de kwaliteitsnormen van geen HCD, HCR, HCP, DNASE VRIJ, RNASE VRIJ, geen protease residuen, geen microbiële residuen, geen pathogenen, dierlijke oorsprong, antibioticavervuiling, ultra-lage endotoxine residuen, hoge enzymactiviteit en hoge zuiverheid, enz. Daarom kunt u op onze producten vertrouwen, veilig en betrouwbaar.
3.5 GMP-productie
Het hele proces van UltraNuclease-productie wordt voltooid in de GMP-productiewerkplaats en het kwaliteitscontroleplan wordt strikt door de farmacopee methode, die voldoet aan de grootschalige vraag van onderzoek en ontwikkeling tot productie.
UCF.ME™ Partner van UltraNuclease —— UltraNuclease ELISA-kit
In normale zuiveringsstappen, UCF.ME™ UltraNuclease wordt gemakkelijk verwijderd als onzuiverheid. Om het residu van UCF.ME™ te detecteren UltraNuclease,
UltraNuclease ELISA-kit
Het lineaire bereik ligt tussen 0,047 en 3 ng/mL en R2 is groter dan 0,99. Met goede inter-batch reproduceerbaarheid voegen we een vaste concentratie UltraNuclease toe aan het monster en gebruiken we 3 verschillende batches ELISA-kits voor detectie. De detectieherstelsnelheid ligt tussen 70% en 110% wanneer de nucleaseconcentratie tussen 3 en 0,186 ng/mL ligt en de CV minder is dan 10%. Bovendien liggen de gesimuleerde monsterherstelsnelheden van UltraNuclease met verschillende concentraties allemaal tussen 70% en 130% en zijn ze beter dan andere merken. Het heeft ook een sterke specificiteit dat we de niet-specifieke binding van het UltraNuclease-antilichaam aan 8 gemeenschappelijke monsters hebben geëvalueerd. De resultaten van de interferentiegroep en de controlegroep overlappten elkaar en er werd geen interferentie gezien.
Naar aanleiding van de DMF-aanvraag van UltraNuclease,
Het dossiernummer is:
| Nummer | Productnaam | Aanvraagnummer |
| 1 | UltraNuclease | MF037298 |
| 2 | Zout Actieve UltraNuclease | MF037815 |
4. Veelgestelde vragen
V1: In welke stap moet UltraNuclease worden toegevoegd?
A: Het hangt af van de monsters waarmee u te maken hebt. Bij viruszuivering wordt het over het algemeen toegevoegd na virusverheldering; bij E. coli-eiwitzuivering kan het worden toegevoegd wanneer de cellen zijn gelyseerd; bij het omgaan met celklontering kan het direct aan het medium worden toegevoegd voor co-cultivatie met cellen.
Vraag 2: Als de reactietemperatuur niet 37°C kan bereiken, hoe moet het dan worden gebruikt?
A: De enzymactiviteit van UltraNuclease wordt beïnvloed door temperatuur, behandelingstijd en enzymactiviteitseenheden. Als de temperatuur niet 37°C kan bereiken, kan de hoeveelheid enzym op de juiste manier worden toegevoegd of kan de incubatietijd worden verlengd.
V3: Is UltraNuclease compatibel met proteaseremmers?
A: Compatibel, maar wees u ervan bewust dat veel proteaseremmers EDTA bevatten. Wanneer EDTA hoger wordt dan 1 mM, zal EDTA de activiteit van sommige nucleasen remmen.
Vraag 4: Hoe verwijder ik UltraNuclease?
A: Het kan worden verwijderd met behulp van methoden zoals TFF, dialyse en chromatografische kolommen.
Vraag 5: Kan de UltraNuclease ELISA-kit worden gebruikt voor de detectie van andere merken totipotente nucleaseresiduen?
A: Wij raden dit af. De ELISA-kit is volledig ontwikkeld op basis van UltraNuclease en kan UltraNuclease nauwkeurig kwantificeren. Altipotente nucleasen van andere merken kunnen verschillen van UltraNuclease in termen van sequentie en productieproces, en de testresultaten kunnen onnauwkeurig zijn.
5. Gerelateerde producten
De producten die door
Tabel 1 Verwante producten
| Productnaam | SKU | Specificaties |
| 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Zout Actief UltraNuclease ELISA-kit | 36703ES96 | 96T |