UltraNuclease, ook bekend als een niet-restrictieve endonuclease, breedspectrum nuclease, is een niet-specifieke endonuclease afgeleid van Serratia Marcescen, die interne fosfodiësterbindingen hydrolyseert tussen nucleotiden in nucleïnezuren om 5'-monofosfaat oligonucleotiden van 2-5 basen lang te produceren. Het kan DNA en RNA in verschillende vormen (dubbelstrengs, enkelstrengs, lineair, circulair, natuurlijk of gedenatureerd) afbreken onder een zeer breed scala aan omstandigheden (6 M Ureum, 0,1 M Guanidine HCl, 0,4% Triton X-100, 0,1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF) en wordt veel gebruikt om nucleïnezuren uit biologische producten te verwijderen. UltraNuclease kan ook worden verwijderd door overeenkomstige methoden.

Deze kit maakt gebruik van het principe van de double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (sandwich ELISA) om de residuen van gedenatureerde en niet-gedenatureerde UltraNuclease te detecteren. Coat eerst de microtiterplaat met een anti-UltraNuclease konijn polyklonaal antilichaam om een ​​vaste-fase antilichaam te vormen. Voeg vervolgens de UltraNuclease standaard en het testmonster toe aan de vaste-fase antilichaam microtiterplaat, voeg vervolgens biotine gelabeld Anti-UltraNuclease polyklonaal antilichaam toe en voeg ten slotte mierikswortelperoxidase-gelabeld streptavidine (SA-HRP) toe om een ​​antilichaam + antigeen + antilichaam-Biotine + SA-HRP complex te vormen. Vervolgens werd TMB substraat toegevoegd aan het complex om de kleurreactie te observeren na het wassen van het complex. TMB wordt omgezet in blauw onder de katalyse van HRP enzym en uiteindelijk omgezet in geel in de aanwezigheid van zuur, en de kleurschakering is positief gecorreleerd met de hoeveelheid UltraNuclease in het monster.

Het detectiebereik van deze kit is 0,047-3 ng/ml; de onderste detectielimiet is 23,5 pg/ml.

Functie

• Zeer gevoelig: Detectie van slechts 23 pg/ml UltraNuclease-resten in biologische monsters tijdens het proces en in de uiteindelijke biologische monsters.
• Zorgt voor nauwkeurigheid: de UltraNuclease-restanten kunnen nauwkeurig worden gedetecteerd met een herstel van 80%-110%.
• Specificiteit: Samenwerken met gebruik Yeasen UltraNuclease kan de residuen nauwkeurig detecteren.
• Stabiel: Het verschil tussen partijen is klein, de kiteigenschappen worden niet beïnvloed bij temperaturen onder 37℃ gedurende 6 dagen.
• Eenvoudige signaalverzameling: Met behulp van het Biotine-Streptavidine-systeem kan het signaal stabiel worden vergroot.
• Complete set: Alle belangrijke onderdelen zijn in de set aanwezig, waardoor deze kosteneffectief is in gebruik.

Sollicitatie

• Residu UltraNuclease-test in biologische producten

Specificatie

Componenten

Verzending en opslag

De UltraNuclease ELISA-kit wordt geleverd met een ijspakket en kan worden bewaard bij 2°C ~8°C. Ongeopend product is een jaar geldig. Nadat het reagens is geopend, is het een half jaar geldig. Vries dit product nooit in.

Opslag van de bereide reagentia:

1. De verdunde wasbuffer en verdunningsbuffer kunnen gedurende 1 week bij 2°C ~8°C worden bewaard

2. Standaard 36701-C is vloeibaar en wordt gedurende 1 jaar bewaard bij 2°C ~8°C

3. De bereide detectie-antilichamen en stopbuffer kunnen gedurende 1 maand bij 2°C ~8°C worden bewaard

Cijfers

• Specificiteitsdemonstratie

Figuur 1. De specificiteit van de UltraNuclease ELISA-kit wordt weergegeven in de bovenstaande figuur.

8 mimische monsters werden geschat voor de niet-specifieke reactie met de antilichamen in de kit. Er was geen significant verschil tussen de 8 monsters en het negatieve monster. （*: Significant verschil met negatief monster；NS: Geen significant verschil met negatief monster）

• Precisieweergave

A)

B)

Figuur 2. De precisie van UCF.ME™ UltraNuclease ELISA werd zoals hierboven getest regeling.

Er werden 6 duplicaten getest bij elke concentratie op de standaardcurve, en alle CV% waren lager dan 5% (Figuur 2A). 3 analisten voerden het UCF.ME™ UltraNuclease ELISA-experiment uit en de CV% waren lager dan 15% (Figuur 2B).

• Nauwkeurigheidsvalidatie

A)

B)

Figuur 3. De nauwkeurigheid van UCF.ME™ UltraNuclease ELISA werd getest als het volgende schema.

UltraNuclease werd onafhankelijk toegevoegd aan 5 μg/ml cellyse-oplossingen (HEK293, E. coli, CHO en Vero) met een uiteindelijke toegevoegde concentratie van 1,5 ng/ml. De nauwkeurigheid in verschillende celmonsters was uitstekend dan bij andere leveranciers (Figuur 3A). UltraNuclease werd toegevoegd aan een echt monster (geleverd door de klant) en is serieel 2-voudig verdund van 3 ng/ml tot 0,093 ng/ml. De spike recovery was allemaal tussen 80%~110% (Figuur 3B).