Hoog Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymerase is een nieuwe generatie DNA met hoge betrouwbaarheid Polymerase gebaseerd op Pfu DNA Polymerase. De Hieff Canace^TM Uracil+ high-fidelity DNA Polymerase maakt snelle en nauwkeurige PCR-reacties mogelijk voor complexe templates. De betrouwbaarheid is aanzienlijk verbeterd en het vermijdt volledig het amplificatiefalen dat wordt veroorzaakt door het gebruik van dUTP-bevattende primers/templates/dNTP's. Het product is uitgerust met een geoptimaliseerde enzymbuffer en de toevoeging van PCR-verbeterende componenten, waardoor het enzym zeer efficiënt is en aanpasbaar aan een breed scala aan templates, geschikt voor amplificatie van complexe templates.

Productcomponenten

Verzending en opslag

De componenten worden geleverd met koelelementen en kunnen 1 jaar bij -20°C worden bewaard.

Producttoepassing

High-fidelity bibliotheekamplificatie met behulp van dUTP-bevattende primers/templates/dNTP's.

Voorzorgsmaatregelen

1. Voor uw eigen veiligheid en gezondheid verzoeken wij u om tijdens de operatie een labjas en wegwerphandschoenen te dragen.

2. Alleen voor onderzoeksdoeleinden!

Instructies

Hoog Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymerase wordt op een iets andere manier gebruikt dan conventionele high-fidelity enzymen. Lees de instructies zorgvuldig door voor gebruik.

1. Aanbevolen reactiesysteem

Alle handelingen dienen op ijs te worden uitgevoerd. 2×Canace^TM Uracil+ PCR-buffer moet na ontdooien goed gemengd zijn. Verwarm het PCR-instrument voor de systeemconfiguratie. Meng het monster na het toevoegen van de componenten goed met een pipet en draai het naar de bodem van de buis, plaats het vervolgens in het voorverwarmde PCR-instrument voor amplificatie. Zet na gebruik alle componenten terug op -20 °C voor opslag.

Tabel 1. PCR-amplificatiereactie

[Notities]:

1) Reagentia: Laat elk onderdeel voldoende ontdooien voor gebruik;

2) Sjablonen: Het gebruik van gezuiverde DNA-sjablonen van hoge kwaliteit kan de efficiëntie en het succespercentage van amplificatie aanzienlijk verbeteren;

3)dNTPs: De aanbevolen uiteindelijke dNTPs-concentratie is 200 μM. De dNTPs die in de kit worden geleverd, bevatten geen dUTP. Als speciale omstandigheden de voorbereiding van dUTP-bevattende templates vereisen, kan extra dUTP worden toegevoegd tot een uiteindelijke concentratie van 400 μM.

4)Polymeraseconcentratie: 1 U/50 μL wordt aanbevolen. Het kan worden geoptimaliseerd tussen 0,5-2 U/50 μL, overschrijd 2 U/50 μL niet. Om te voorkomen dat polymerase primers afbreekt vanwege 3 '→5' exonuclide-activiteit, wordt voorgesteld om polymerase in de laatste stap aan het reactiesysteem toe te voegen.

5) Mg2+ eindconcentratie: De eindconcentratie van het systeem is 2 mM. Vraag ons bedrijf om buffer met een lage Mg2+ concentratie of zonder Mg2+ als u speciale behoeften heeft.

2. Aanbevolen reactieprocedure

Tabel 2. PCR-amplificatiereactieprocedure

[Notities]：

1) Initiële denaturatietemperatuur en -tijd: 98℃ wordt aanbevolen. De aanbevolen tijd is 30 sec voor eenvoudige templates zoals plasmide-DNA, 1 min voor bibliotheken, 3 min voor complexe templates zoals cDNA en genomisch DNA, en 5-10 min voor templates met een hoog GC-gehalte.

2) Gloeitemperatuur en -tijd: 60℃ wordt aanbevolen, of de temperatuurgradiënt kan worden ingesteld om de optimale temperatuur voor primer-gloeiing te vinden, afhankelijk van de behoeften. De aanbevolen gloeitijd is 20 sec en kan worden aangepast binnen 10-30 sec. Een te lange gloeitijd kan leiden tot verspreiding van de versterkte producten op de gel.

3) Verlengingstemperatuur en -tijd: 72℃ wordt aanbevolen. De verlengingstijd wordt aangepast aan de werkelijke behoeften.