Quick T4 DNA Ligase is een enkelvoudig enzymproduct dat kan worden gebruikt voor de ligatie van DNA-fragmenten en adapters in het proces van NGS-bibliotheekconstructie. Dit product is geverifieerd door high-throughput sequencing en heeft een uitstekende kwaliteit. Voor klanten die geen experimentele systeemaanpassing nodig hebben, wordt aanbevolen om Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607) aan te schaffen.

Productcomponenten

Verzending en opslag

Het product wordt geleverd met koelelementen en kan twee jaar lang bij -20°C bewaard worden.

Eenheid Definitie

In een ligatiereactiesysteem van 20 μL werd, wanneer 6 μg λDNA-Hind Ⅲ gedurende 30 minuten bij 16℃ werd gereageerd, de hoeveelheid enzym die nodig was om meer dan 50% ligatie van de DNA-fragmenten te verkrijgen, gedefinieerd als één eenheid (E).

Voorzorgsmaatregelen

1. Als er een kleine hoeveelheid neerslag ontstaat tijdens het smelten van de buffer, draai de buffer dan om en meng deze goed voor gebruik;

2. Voor uw eigen veiligheid en gezondheid verzoeken wij u om tijdens de operatie een labjas en wegwerphandschoenen te dragen.

3. Dit product is ALLEEN bedoeld voor onderzoeksdoeleinden!

Instructies

1. De huidige mainstream DNA-bibliotheekconstructiekits worden over het algemeen niet gezuiverd na eindreparatie en A-Tailing-behandeling en voeren direct adapterligatie uit. Raadpleeg de volgende voorbereiding voor het reactiesysteem. Vortex grondig, centrifugeer kort en incubeer gedurende 15 min bij 20°C.

[Opmerking]: *50% PEG 6000 wordt niet meegeleverd in de kit, u dient dit zelf te bereiden.

**Raadpleeg de volgende tabel voor het aantal adapters.

***De hoeveelheid Quick T4 DNA Ligase die wordt gebruikt, kan indien nodig worden toegevoegd in de hoeveelheid van 1-5 μL.

2. De kwaliteit en concentratie van de gebruikte adapters hebben direct invloed op de ligatie-efficiëntie en de opbrengst van de bibliotheek. Te veel adaptergebruik kan meer adapterdimeren produceren, terwijl lager gebruik de ligatie-efficiëntie en de opbrengst van de bibliotheek kan beïnvloeden. De volgende tabel geeft de aanbevolen hoeveelheid adapters weer die in verschillende Input DNA-situaties worden gebruikt met behulp van deze kit.

[Opmerking]: Invoer DNA mol (pmol) ≈ Invoer DNA (ng) / [0,66 × Invoer gemiddelde DNA lengte (bp)].

Voorbeeld van berekening van adapterligatie: Hoeveel adapter moet worden toegevoegd als de invoer-DNA 100 ng is en de lengte 300 bp?

Stap 1: Bereken het aantal mol invoer-DNA. Formule: Input-DNA mol (pmol) ≈ Input-DNA (ng) / [0,66 × Input-DNA gemiddelde lengte (bp)]; Input-DNA mol (pmol) = 100 ÷ (0,66 × 300) = 0,5 pmol;

Stap 2: Bereken het aantal toegevoegde mol adapter volgens de bovenstaande tabel. Wanneer de invoer-DNA 100 ng is, is de molaire verhouding van adapters: invoer-DNA 100:1 en het aantal toegevoegde mol adapters = 100 × 0,5 pmol = 50 pmol;

Stap 3: Bereken het volume van de adaptertoevoeging. Adapterconcentratie = 15 μmol/L (als u een adapter van een ander bedrijf gebruikt, moet u de concentratie bepalen volgens de instructies); Volume van de toegevoegde adapter = mol toegevoegde adapter (50 pmol) ÷ concentratie van de adapter (15 μmol/L) = 3,34 μL (Opmerking: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Samengevat is het volume waaraan de adapter kan worden toegevoegd 3,4 μL. (Let op: het maximale toe te voegen volume van de adapter is niet groter dan 5 μL).