Ribonuclease A (RNase A) is een enkelstrengs polypeptide met 4 disulfidebindingen met een moleculair gewicht van ongeveer 13,7 kDa. RNase A is een endoribonuclease die specifiek enkelstrengs RNA afbreekt op C- en U-residuen. Specifiek herkent de splitsing de fosfodiesterbinding gevormd door de 5'-ribose van een nucleotide en de fosfaatgroep op de 3'-ribose van de aangrenzende pyrimidinenucleotide, zodat de 2', 3' - cyclische fosfaten worden gehydrolyseerd tot de overeenkomstige 3'-nucleosidefosfaten (bijv. pG-pG-pC-pA-pG wordt gesplitst door RNase A om pG-pG-pCp en A-PG te genereren). RNase A is het meest actief bij het splitsen van enkelstrengs RNA. De aanbevolen werkconcentratie is 1-100 μ G/mL, compatibel met verschillende reactiesystemen. Een lage zoutconcentratie (0-100 mM NaCl) kan worden gebruikt om enkelstrengs RNA, dubbelstrengs RNA en RNA-ketens gevormd door RNA-DNA-hybridisatie te knippen. Bij een hoge zoutconcentratie (≥ 0,3 M) knipt RNase A echter alleen specifiek enkelstrengs RNA.

RNase A wordt het meest gebruikt om RNA te verwijderen tijdens de bereiding van plasmide-DNA of genomisch DNA. Of DNase wel of niet actief is tijdens het bereidingsproces kan de reactie gemakkelijk beïnvloeden. De traditionele methode van koken in een waterbad kan worden gebruikt om DNase-activiteit te inactiveren. Dit product bevat geen DNase en protease en vereist geen hittebehandeling voor gebruik. Daarnaast kan dit product ook worden gebruikt in moleculair-biologische experimenten zoals RNase-beschermingsanalyse en RNA-sequentieanalyse.

Dit product wordt geleverd als een oplossing met een concentratie van 100 mg/ml. De aanbevolen werkconcentratie is 1-100 μg/ml, afhankelijk van het type toepassing.

Functies

Ribonuclease A (RNase A), uit runderalvleesklier

Activiteit ≥80 Kunitz-U/mg

Nee DNase-residu

Toepassingen

RNasen

Epitranscriptoomanalyse

Genomische DNA-extractie en -zuivering

Specificaties

Verzending en opslag

Het product moet gedurende 2 jaar bij -25°C ~ -15℃ worden bewaard.

De conserveringsbuffer bestond uit 50 mM Tris-HCl (pH 7,4) en 50% (V/V) glycerol.

Cijfers

Steekproef 1 heeft geen RNase A,Steekproef 2-4 hebben toegevoegd 1 μl van de 100 mg/ml RNase A. Dan eendd 500 ng RNA. Voeg na 5 minuten incubatie bij kamertemperatuur 1 μl 10X RNA-laadbuffer toe. Laad vervolgens alle monsters op een 0,8% medium-porie-agarosegel voor elektroforese bij 160 V gedurende 10 minuten.

Documenten:

Veiligheidsinformatieblad

10406ES-MSDS-HB240223.PDF

Handleidingen

10406_Handleiding_Ver. HB240703_NL.pdf

Citaten en referenties:

[1] Chen Q, Xin M, Wang L, et al. Remming van LDHA om eEF2-afgifte te induceren verbetert trombocytopoëse. Blood. 2022;139(19):2958-2971. doi:10.1182/blood.2022015620(IF:23.629)

[2] Chen K, Guo T, Li XM, et al. Translationele regulatie van de reactie van planten op hoge temperaturen door een dubbelfunctie tRNAHis Guanylyltransferase in rijst. Mol Plant. 2019;12(8):1123-1142. doi:10.1016/j.molp.2019.04.012(IF:10.812)