LZCap AU (3'Acm) is een cap1-analoog. Het product wordt gebruikt voor transcriptie met de initiële sequentie van 5'AU3', en de natuurlijke cap1-structuur wordt geproduceerd door Cap1-transcriptiecapping. Vergeleken met Cap0 geproduceerd door de traditionele capping-methode, zorgt de cap1-structuur geproduceerd door CapAU (3'Acm) ervoor dat de SaRNA een hogere activiteit en translatie-efficiëntie in vivo heeft.

Amerikaans patent goedgekeurd.

Componenten

Productdetails

LZCap^® DNA-sjabloonontwerp

LZCap^®AU(3'Acm) is geschikt voor AG-geïnitieerde sequenties. Zoals weergegeven in de onderstaande afbeelding, kan de T7-promotor (onderstreept) gevolgd door de AG-sequentie effectief transcriptie initiëren.

Protocol

1． Laat de voor het experiment benodigde componenten op ijs ontdooien.

2． Raadpleeg het volgende reactiesysteem om het transcriptiesysteem bij kamertemperatuur te configureren.

Gemodificeerde N1-Me-pUTP kan worden gebruikt in plaats van wild-type UTP. De gemodificeerde N1-Me-pUTP vermindert de immunogeniciteit van mRNA. Henovcom kan ook gemodificeerde nucleotide N1-Me-pUTP (Cat.nr.: HN1002) leveren.

Opmerkingen:

1)     LZCap^®AU(3'Acm) is geschikt voor een T7-promotortranscriptievector met 5 'AU 3'-geïnitieerde sequenties. Hier moet rekening mee worden gehouden bij de constructie van de vector.

2)     De reagentia, verbruiksartikelen en containers die in het experiment worden gebruikt, zijn vrij van RNase-verontreiniging.

3)     Het wordt aanbevolen om een ​​gelineariseerd DNA-sjabloon te gebruiken voor transcriptie.

4)     Toen gemodificeerde nucleotiden werden gebruikt in plaats van wildtype nucleotiden, bleef de uiteindelijke concentratie van de reactie onveranderd.

5)     Als het PCR-product wordt gebruikt als transcriptie-initiatie-DNA-template, kan de hoeveelheid DNA-template worden gehalveerd.

3． Meng de bereide reactieoplossing, centrifugeer kort en incubeer bij 37°C gedurende 2-3 uur. Als de transcriptlengte minder dan 100nt is, verhoog dan de reactietijd tot 4-8 uur.

Algemeen veiligheidsprofiel

Opslag

Dit product kan twee jaar lang bewaard worden bij een temperatuur van -25 tot -15 ℃.

Voorzorgsmaatregelen

1. Draag voor uw veiligheid en gezondheid persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM), zoals laboratoriumjassen en wegwerphandschoenen, wanneer u met dit product werkt.
2. Alleen voor onderzoeksdoeleinden.
   

Vragen en antwoorden

1. Hoe ontwerp je de LZCap?

Enzymen hebben een relatief "specifieke" herkenning van substraten. Daarom hebben we bij het ontwerpen van een nieuwe cap-structuur enerzijds nieuwe structurele modificaties nodig voor patentdoeleinden, maar streven we er anderzijds naar om zoveel mogelijk gelijkenis te behouden met natuurlijke/bekende structuren. De natuurlijke structuur heeft een ribose 3' OH, die kan worden gemodificeerd (bijv. methylering). Op basis van deze overweging hebben we ervoor gekozen om een ​​koolstof op de 3'-positie toe te voegen voor patentnieuwigheid, gevolgd door een NH om de waterstofbinding van OH na te bootsen, en vervolgens een acetylgroep om de basiciteit van NH te verminderen en zijn waterstofbindingsvermogen te verbeteren. De activiteit van LzCap is beter dan methylated natuurlijke dop, mogelijk door toegenomen waterstofbindingen. Vergeleken met de methyl- en methoxygroepen kan de acetylaminogroep ook de van der Waals-interacties tussen het substraat (cap) en de initiërende factor (enzym) vergroten.

2. Is de acetylaminogroep stabiel?

De acetylaminogroep is al voldoende stabiel. Het is veel stabieler dan de 7-gemethyleerde positie en de fosfodiesterbinding, die de minst stabiele delen van de cap zijn.

Neem contact met ons op voor meer informatie over de LZCap-licentie.