Beschrijving
LZCap GG (3'Acm) is een cap1 analoog. Het product wordt gebruikt voor transcriptie met de beginsequentie van 5'GG3', en de natuurlijke cap1-structuur wordt geproduceerd door Cap1-transcriptiecapping.
Amerikaans patent goedgekeurd.
Componenten
| Cat.nr. | Naam | Maat |
| 10686 | LZCap GG (3'Acm) (50mM) | 100 μL |
| 1 ml |
Productdetails
| Moleculaire formule | C35H48N16O25P4 (Vrij zuur) |
| Moleculair gewicht | 1216.19 (Vrij zuur) |
| Concentratie | 50± 3 mM |
| Zuiverheid | HPLC-waarde ≥95% |
LZCap DNA-sjabloon Design
LZCap GG(3'Acm) is geschikt voor GG-geïnitieerd sequenties. Als getoond in de figuur hieronder, de SP6 promotor (onderstreept) gevolgd door de GG-sequentie kan efeffectief initiëren transcriptie.
Protocol
1． Ontdooi componenten vereist voor het experimentent op ijs.
2． Toevoegen RNase-vrij water en NTP's naar reageerbuis.
3． Warmte LZCap GG(3'Acm) aliquot voor 15 min bij 60°C. Koel bij kamertemperatuur voor 5 minuten
4． Voeg onmiddellijk toe LZCap GG(3'Acm) naar buis en vortex naar mengen. Spinnen kort naar verzamelen vloeistof.
5． Toevoegen 10x transcriptie Buffer en vortex.
6． Toevoegen DNA-sjabloon and SP6 Enzym Mengen.
7． Meng de voorbereid reactieoplossing, spin kort en uitbroeden bij 37°C voor 2-3 uren. Als het transcript lengte is minder dan 100nt, verhoog de reactietijd tot 4-8 H.
| Onderdeel | Volume (μL) | Eindconcentratie |
| RNase Gratis water | Tot 20 μL | / |
| ATP (100 mM) | 1 | 5mM |
| UTP(100mM) | 1 | 5mM |
| CTP (100 mM) | 1 | 5mM |
| GTP (100 mM) | 0,2 | 1mM |
| LZCap GG(3'Acm) (50mM) | 1.6 | 4mM |
| 10×Transcriptie Buffer | 2 | 1 × |
| Lineair DNA | 1μg | 50 ng/μL |
| SP6 Enzym Mengen | 2 | / |
| Eindvolume | 20 μL | |
Notities:
1) De SP6 enzym mixen wij aanbevolen naar gebruikt is MEGAscridt® Set (AM1330).
2) LZCap GG(3'Acm) is geschikt voor SP6-promotortranscriptievector met 5 'GG 3'-geïnitieerde sequenties, welke moet bij het construeren van de vector in acht worden genomen.
3) De reagentia, verbruiksartikelen En containers gebruikt in de experiment Zijn vrij OF RNase besmetting.
4) Het is aanbevolen aan gebruik een gelineariseerd DNA-temperatuurte laat voor transcriptie.
5) Wanneer gewijzigd nucleotiden waren gebruikt in plaats van wildtype nucleotiden, de laatste concentrerentie van de reactie was onveranderd.
6) Gewijzigd N1-Me-pUTP kan zijn gebruikt in plaats van wildtype UTP. De modegeïmiteerd N1-Me-pUTP vermindert de immunogeniciteit van mRNA-cellen. Henovcom kan Ook voorzien gewijzigd nucleotide N1-Me-pUTP (Kat. Nee.: (HN1002).
7) Als de PCR prokanaal is gebruikt als de transcriptie initiatie DNA sjabloon, de hoeveelheid van DNA sjabloon kan zijn verminderd door half.
Opslag
Dit product kan twee jaar lang bewaard worden bij een temperatuur van -25 tot -15 ℃.
Voorzorgsmaatregelen
- Draag voor uw veiligheid en gezondheid persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM), zoals laboratoriumjassen en wegwerphandschoenen, wanneer u met dit product werkt.
- Alleen voor onderzoeksdoeleinden.
Vragen en antwoorden
1. Hoe ontwerp je de LZCap?
Enzymen hebben een relatief "specifieke" herkenning van substraten. Daarom hebben we bij het ontwerpen van een nieuwe cap-structuur enerzijds nieuwe structurele modificaties nodig voor patentdoeleinden, maar streven we er anderzijds naar om zoveel mogelijk gelijkenis te behouden met natuurlijke/bekende structuren. De natuurlijke structuur heeft een ribose 3' OH, die kan worden gemodificeerd (bijv. methylering). Op basis van deze overweging hebben we ervoor gekozen om een koolstof op de 3'-positie toe te voegen voor patentnieuwigheid, gevolgd door een NH om de waterstofbinding van OH na te bootsen, en vervolgens een acetylgroep om de basiciteit van NH te verminderen en zijn waterstofbindingsvermogen te verbeteren. De activiteit van LzCap is beter dan methylated natuurlijke dop, mogelijk door toegenomen waterstofbindingen. Vergeleken met de methyl- en methoxygroepen kan de acetylaminogroep ook de van der Waals-interacties tussen het substraat (cap) en de initiërende factor (enzym) vergroten.
2.Is de acetylaminogroep stabiel?
De acetylaminogroep is al voldoende stabiel. Het is veel stabieler dan de 7-gemethyleerde positie en de fosfodiesterbinding, die de minst stabiele delen van de cap zijn.
Neem contact met ons op voor meer informatie over de LZCap-licentie.
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.