Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) is een snelle reverse transcriptiekit die is ontwikkeld op basis van de Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye), geschikt voor PCR-amplificatie en RT-qPCR-experimenten. Vergeleken met de Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (zonder kleurstof) biedt stabiele detectiepercentages, specificiteit en opbrengstgarantie, waarbij de totale reverse transcriptietijd potentieel kan worden teruggebracht tot minder dan 6 minuten, wat de experimentele duur aanzienlijk verkort.

De kit bevat gDNA Digester Mix, dat genomische DNA-verontreiniging die in de RNA-template achterblijft, kan elimineren, wat zorgt voor betrouwbaardere daaropvolgende resultaten. De kit bevat twee typen cDNA-syntheseprimers: Random Primers N6 en Oligo (dT)₁₈Gebruikers kunnen kiezen tussen Random Primers N6, Oligo (dT)₁₈, of genspecifieke primers als reverse transcriptieprimers volgens hun behoeften. Het gesynthetiseerde enkelstrengs cDNA-product kan direct worden gebruikt voor daaropvolgende PCR- of qPCR-reacties.

Specificaties

Componenten

Opslag

Dit product moet worden bewaard bij -25~-15℃ gedurende 1 jaar.

Instructies

1. Als het experiment de verwijdering van resterend genomisch DNA vereist

1) gDNA-vertering

Bereid het volgende mengsel in een RNase-vrije centrifugebuis en pipetteer voorzichtig om het goed te mengen. Incubeer gedurende 2 minuten bij 42℃.

* Het wordt aanbevolen dat de invoerhoeveelheid van Total RNA niet hoger is dan 2 μg. Als het expressieniveau van het doelgen laag is, kan de invoerhoeveelheid worden verhoogd tot maximaal 5 μg Total RNA.

2) Voorbereiding van het reverse transcriptiereactiesysteem (20 μL-systeem)

* De hoeveelheid primers kan worden aangepast op basis van de hoeveelheid template-input. Als het reverse transcriptieproduct wordt gebruikt voor qPCR-experimenten, kunnen Random Primers aan het systeem worden toegevoegd volgens de aanbevolen hoeveelheid.

** Het wordt aanbevolen om eerst 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (zonder kleurstof) toe te voegen, goed te mengen en vervolgens de reverse transcriptieprimer toe te voegen om ervoor te zorgen dat de primer niet wordt beïnvloed door gDNA Digester.

3) Instellingen voor de omgekeerde transcriptieprocedure

* Voor sjablonen met een hoog GC-gehalte of complexe sjablonen kan de temperatuur voor omgekeerde transcriptie worden verhoogd tot 60℃.

** Dit product kan cDNA-sequenties synthetiseren die kleiner zijn dan 14 kb. Als u langere cDNA-producten nodig hebt, kunt u de reverse transcriptietijd op passende wijze verlengen.

2. Als het experiment niet vereist dat genomisch DNA wordt verwijderd

1) Voorbereiding van het reverse transcriptiereactiesysteem (20 μL-systeem)

* Het wordt aanbevolen dat de invoerhoeveelheid van Total RNA niet hoger is dan 2 μg. Als het expressieniveau van het doelgen laag is, kan de invoerhoeveelheid worden verhoogd tot maximaal 5 μg Total RNA.

** De hoeveelheid primers kan worden aangepast op basis van de hoeveelheid template-invoer. Als het reverse transcriptieproduct wordt gebruikt voor qPCR-experimenten, kunnen Random Primers aan het systeem worden toegevoegd volgens de aanbevolen hoeveelheid.

2) Instellingen voor de omgekeerde transcriptieprocedure

* Voor sjablonen met een hoog GC-gehalte of complexe sjablonen kan de temperatuur voor omgekeerde transcriptie worden verhoogd tot 60℃.

** Dit product kan cDNA-sequenties synthetiseren die kleiner zijn dan 14 kb. Als u langere cDNA-producten nodig hebt, kunt u de reverse transcriptietijd op passende wijze verlengen.

Notities

1. Alle handelingen dienen op ijs te worden uitgevoerd en wel op een manier die RNase-verontreiniging voorkomt.
2. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
3. Voor uw eigen veiligheid, draag alstublieft een labjas en wegwerphandschoenen.

Documenten: