Hifair^™ Advanced One Step RT-qPCR Kit is een kit voor fluorescentiekwantificering op basis van SYBR Green I-kleurstof. Met behulp van genspecifieke primers worden reverse transcriptie en qPCR-reacties voltooid in één buis, waardoor de noodzaak voor herhaalde dopopenings- en pipetteerbewerkingen wordt geëlimineerd, wat de assay-efficiëntie aanzienlijk verbetert en het risico op contaminatie vermindert. Voor RNA-monsters gebruikt de kit hittebestendige Hifair^™ V Reverse Transcriptase voor efficiënte cDNA-synthese en UNICON^™ HotStart Taq DNA Polymerase voor kwantitatieve amplificatie. Onder het geoptimaliseerde buffersysteem kan de gevoeligheid van de kit oplopen tot 0,1 pg voor sterk tot expressie gebrachte targets en tot 1 pg voor matig tot expressie gebrachte targets. De kit is ook geschikt voor amplificatie en kwantificering van DNA-monsters. Het maakt de gevoelige detectie en kwantificering van nucleïnezuren uit verschillende planten- en dierenmonsters, cellen en micro-organismen mogelijk.

Specificaties

Componenten

Opslag

Dit product moet worden bewaard bij -25~-15℃ weg van licht voor 1 jaar.

Instructies

1. Reactie systeem configuratie*****

* Low Rox-modellen en modellen zonder Rox-correctie worden direct bereid volgens bovenstaand reactiesysteem. Voeg bij gebruik van het High Rox-model Hieff™ SP High Rox toe aan 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer in een verhouding van 1:250 v/v, meng goed en centrifugeer. De 2× Hifair^™ Geavanceerde SG Buffer met Hieff™ SP High Rox heeft geen invloed op het gebruik van de correctiemodellen Low Rox en No Rox.

** De uiteindelijke primerconcentratie bedroeg 0,2 μmol/L, maar kon indien nodig ook worden aangepast tussen 0,1 en 1 μmol/L.

*** Het reagens is uiterst gevoelig, met totaal RNA in het bereik van 1 pg-1 μg. Uit testen van menselijke monsters bleek een optimale input van 1 pg-100 ng, waarbij rekening werd gehouden met een algehele Ct-waarde in het bereik van 15-30, indien van toepassing.

**** Het wordt aanbevolen om 20 μL of 50 μL te gebruiken om de geldigheid en reproduceerbaarheid van de doelgenamplificatie te garanderen.

***** Bereid u voor in de ultra-schone werkbank en gebruik nuclease-residuvrije tips en reageerbuisjes; tips met filterpatronen worden aanbevolen. Voorkom kruisbesmetting en aerosolbesmetting.

2) Reactieprogramma

*De reverse transcriptietemperatuur kan worden geselecteerd tussen 50-55°C, afhankelijk van de experimentele behoeften. Voor DNA-monsters kan het reverse transcriptieproces worden weggelaten.

** In speciale gevallen kan de gloei-/verlengingstemperatuur worden aangepast aan de Tm-waarde van de primer. Aanbevolen wordt 60°C.

3) Toepasselijk model

Instrumentmodellen waarvoor geen Rox-kalibratie nodig is:

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Toegepaste Wetenschap: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lichtfietser 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;

Low Rox toepasbare modellen:

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 en 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Toepasbare modellen met hoge Rox*:

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Snel, StepOne, StepOne Plus.

* Voor High Rox-modellen moet u er rekening mee houden dat Hieff™ SP High Rox proportioneel aan 2 x Hifair moet worden toegevoegd^™ Geavanceerde SG-buffer vóór gebruik.

Notities

1. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
2. Voor uw eigen veiligheid, draag alstublieft een labjas en wegwerphandschoenen.

Documenten:

Veiligheidsinformatieblad

11175ES-A-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-B-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-C-MSDS-HB230927.PDF

Handleidingen