Firefly luciferase is een proteïne met een moleculair gewicht van ongeveer 61 kDa, dat de oxidatie van luciferine tot oxyluciferine kan katalyseren in aanwezigheid van ATP, magnesiumionen en zuurstof. Het zendt bioluminescentie uit met een golflengte van ongeveer 560 nm. Renilla luciferase is een proteïne met een moleculair gewicht van ongeveer 36 kDa, dat de oxidatie van coelenterazine tot coelenteramide kan katalyseren in aanwezigheid van zuurstof, en zendt een golflengte uit van 480 nm tijdens het oxidatieproces. over bioluminescentie. Beide bioluminescentie kan worden gemeten door chemiluminescentie. Het detectieprincipe wordt weergegeven in figuur 1:

Figuur 1: Schema van de Firefly- en Renilla-luciferase-test

Meestal wordt de 5'UTR of promotor van het doelgen gekloond stroomopwaarts van Firefly Luciferase, of de 3'UTR wordt gekloond stroomafwaarts van Firefly Luciferase, en het transcriptionele regulatie-effect van de promotor of het regulerende element wordt gedetecteerd door de hoeveelheid firefly luciferase te detecteren. Renilla Luciferase werd gebruikt als interne controle om verschillen in celnummer, transfectie-efficiëntie, enz. te elimineren. De Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit gebruikt luciferine als substraat om de activiteit van het firefly luciferase reportergen te detecteren, en gebruikt vervolgens coelenterazine als substraat om Renilla luciferine te detecteren terwijl de fluorescentiereactie wordt geblust. Activiteit van het enzymreportergen. De kit heeft de kenmerken van hoge gevoeligheid.

Functies

Verbeterde lysiscapaciteit: kan de overgrote meerderheid van de celtypen volledig vernietigen.

Sterker signaal: nauwkeurige detectie van zwakke promotorexpressie.

Hogere gevoeligheid: detecteerbaar tot 10-20 picomol luciferasemoleculen.

Breder lineair bereik: Het lineaire detectiebereik overschrijdt 8 ordegroottes van de enzymconcentratie.

Toepassingen

Verificatie van miRNA-interacties met doelgen 3'UTR's

Verificatie van lncRNA-miRNA-interacties

Verificatie van transcriptiefactorregulatie in de promotorregio

Analyse van signaalpaden

SNP-activiteitsanalyse

Specificaties

Componenten

Verzending en opslag

De Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit-producten moeten worden bewaard bij -15℃ ~ -25℃ voor 1 jaar.

Cijfers

Figuur 1. Yeasen (Kat#: 11402) heeft een fluorescentie-intensiteit die vergelijkbaar is met die van Brand P.

Figuur2. IkGEMAKKELIJK (Kat#: 11402) detectiereagentia interacteren met luciferase om optimale luminescentie-intensiteit te bereiken. Na de toevoeging van Renilla-luciferasesubstraat wordt de bioluminescentie van vuurvliegluciferase geblust: het kan in wezen volledig worden geblust.

Documenten:

Veiligheidsinformatieblad

11402 MSDS HB220209 NL.PDF

Handleidingen

11402 Handleiding HB241230 NL.pdf

Citaten en referenties:

[1] Wang H, Yang J, Cai Y, Zhao Y. Macrofagen onderdrukken de cardiale herprogrammering van fibroblasten in vivo via een IFN-gemedieerd intercellulair zelfstimulerend circuit [gepubliceerde correctie verschijnt in Protein Cell. 2024 Dec 2;15(12):938. doi: 10.1093/procel/pwae038]. (ALS=21.1)

[2] Zhao L, Zhu Y, Tao H, et al. Ailanthone verlicht longfibrose door JUN-afhankelijke MEOX1-activering te onderdrukken. Acta Pharm Sin B. 2024;14(8):3543-3560. doi:10.1016/j.apsb.2024.04.013(ALS=14,5)

[3] Wu X, Chen S, Zhang Z, et al. Een viraal klein interfererend RNA-gastheerplant mRNA-pad moduleert virus-geïnduceerde droogtetolerantie door autofagie te versterken. Plant Cell. 2024;36(9):3219-3236. doi:10.1093/plcell/koae158(ALS=12,6)

[4] Xuan H, Li Y, Liu Y, et al. Het H1/H5-domein draagt ​​bij aan OsTRBF2-fasescheiding en genrepressie tijdens rijstontwikkeling. Plant Cell. 2024;36(9):3787-3808. doi:10.1093/plcell/koae199(ALS=12)

[5] Han Y, Hu Q, Gong N, et al. Natuurlijke variatie in MORE GRAINS 1 reguleert het aantal korrels en het gewicht van de korrels in rijst. J Integr Plant Biol. 2024;66(7):1440-1458. doi:10.1111/jipb.13674(ALS=11,4)

[6] Pan M, Luo M, Liu L, et al. EGR1 onderdrukt HCC-groei en aerobe glycolyse door transcriptionele downregulatie van PFKL. J Exp Clin Cancer Res. 2024;43(1):35. Gepubliceerd 2024 Jan 29. doi:10.1186/s13046-024-02957-5(ALS=11.3)

[7] Hao X, Wang S, Fu Y, et al. De WRKY46-MYC2-module speelt een cruciale rol in E-2-hexenal-geïnduceerde anti-herbivoorreacties door de accumulatie van flavonoïden te bevorderen. Plant Commun. 2024;5(2):100734. doi:10.1016/j.xplc.2023.100734(ALS=10,5)

[8] Wu J, Li P, Li M, et al. Hittestress belemmert de beëindiging van het bloemmeristeem en de ontwikkeling van fruit door de BR-SlCRCa-cascade in tomaat te beïnvloeden. Plant Commun. 2024;5(4):100790. doi:10.1016/j.xplc.2023.100790(ALS=10,5)

[9] Chen L, Xia S, Wang F, et al. m6A-methylering-geïnduceerde NR1D1-ablatie verstoort de circadiane klok van HSC en bevordert leverfibrose. Pharmacol Res. 2023;189:106704. doi:10.1016/j.phrs.2023.106704(ALS=10,33)

[10] Niu MX, Feng CH, He F, et al. De miR6445-NAC029-module reguleert droogtetolerantie door de expressie van glutathione S-transferase U23 en reactieve zuurstofspecies-scavenging in Populus te reguleren. New Phytol. 2024;242(5):2043-2058. doi:10.1111/nph.19703(ALS=9,4)

[11]Huang T, You Q, Huang D, et al.Een positieve feedback tussen PDIA3P1 en OCT4 bevordert de kankerstamceleigenschappen van plaveiselcelcarcinoom van de slokdarm. Cell Commun Signal. 2024;22(1):60. Gepubliceerd 2024 Jan 22. doi:10.1186/s12964-024-01475-3(ALS=8,4)

[12]Wang S, Liu Y, Hao X, Chen Y, Wang Z, Shen Y. Versterking van plantendefensinen in een woestijnstruik: onderzoek naar een regulerend pad van AnWRKY29. Int J Biol Macromol. 2024;270(Pt 1):132259. doi:10.1016/j.ijbiomac.2024.132259(ALS=8.2)