Productbeschrijving

Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit is een magnetische kralenkit speciaal voor mRNA-zuivering. De mRNA Capture-kralen zijn paramagnetische microbolletjes van micrometerformaat gekoppeld aan Oligo dT (poly A)-staarten, die kunnen worden gebruikt om mRNA te isoleren van 10 ng tot 4 μg compleet RNA door binding aan mRNA met poly A-staarten.

Specificaties

Componenten

Opslag

Het product moet gedurende een jaar bij een temperatuur van 2 tot 8℃ worden bewaard en mag niet bevriezen.

Instructies

1. Benodigde materialen niet inbegrepen

Magnetisch rek, Nuclease-vrije PCR-buizen

2. Bediening

1) Breng de mRNA-vangstparels in evenwicht bij kamertemperatuur (~ 30 min).

2) Verdun 10 ng – 4 μg totaal RNA tot 50 μL met nucleasevrij water in een nucleasevrije PCR-buis en zet deze op ijs.

3) Meng de magnetische kralen door ze ondersteboven te keren of te vortexen. Voeg 50 μL van de magnetische kralen toe aan 50 μL totaal RNA-monster en pipetteer 6 keer om goed te mengen. Draai kort naar de bodem van de buis.

4) Incubeer het mengsel van magnetische kralen en RNA in een thermocycler en voer het volgende programma uit: 65°C, 5 min; 25°C, 5 min; 25°C, vasthouden.

5) Plaats de buis op een magnetische rek gedurende 5 minuten om mRNA van totaal RNA te scheiden. Verwijder voorzichtig de supernatant.

6) Verwijder de buis uit de magnetische rek en resuspendeer de magnetische kralen met 200 μL Beads Wash Buffer. Pipetteer het gehele volume 6 keer op en neer om grondig te mengen. Plaats de buis op een magnetische rek gedurende 5 min. en verwijder voorzichtig de bovenstaande vloeistof.

7) Herhaal stap 6.

8) Verwijder de buis uit de magnetische rekVoeg 50 μL Tris-buffer toe om de magnetische kralen opnieuw te suspenderen en pipetteer 6 keer om grondig te mengen.

9) Doe het monster in een thermocycler en voer het volgende programma uit om het mRNA te elueren: 80°C, 2 min; 25°C, vasthouden.

10) Haal het monster uit de thermocycler. Voeg 50 μL Beads Binding Buffer toe en pipetteer herhaaldelijk 6 keer om grondig te mengen.

11) Laat het 5 minuten bij kamertemperatuur incuberen, zodat het mRNA zich aan de magnetische kralen kan binden.

12) Plaats de buis op de magnetische Zet het rek 5 minuten op het vuur en verwijder voorzichtig de bovenstaande vloeistof.

[Opmerking]: Er is een pipet van 10 μL nodig om de resterende vloeistof op te zuigen.

13) Verwijder de buis uit de magnetische rek, resuspendeer de magnetische kralen met 200 μL Beads Wash Buffer, pipetteer herhaaldelijk 6 keer om grondig te mengen. Plaats de buis op de magnetische rek bij kamertemperatuur gedurende 5 minuten. Verwijder en gooi alle supernatant weg.

14) mRNA-eind-elutie

Schema A: Voor reserve transcriptiereactie

Verwijder de buis van de magnetische rekVoeg 12 μL nucleasevrij water toe en pipetteer het mengsel 6 keer totdat het goed gemengd is. Plaats de buis in de thermocycler en voer het volgende programma uit: 80°C, 2 min. Plaats vervolgens de buis op de magnetische rek onmiddellijk, laat 5 min. op kamertemperatuur staan. Nadat de oplossing is opgehelderd, zuigt u voorzichtig 10 μL supernatant op in een andere nieuwe Nuclease-vrije PCR-buis.

Schema B: Voor RNA bibliotheek voorbereiding

Voeg het juiste volume Frag/Primer Buffer toe volgens de relevante kitinstructies voor bibliotheekconstructie.

Opmerking

1. Voor uw veiligheid en gezondheid verzoeken wij u om tijdens de operatie een labjas en wegwerphandschoenen te dragen.
2. Alleen voor onderzoeksdoeleinden.
3. Zorg ervoor dat u de magnetische kralen op kamertemperatuur laat komen en ze goed mengt voordat u ze gebruikt. Anders kan de terugwinning van de monsters worden beïnvloed.
4. De operatie mag absoluut geen RNase- of nucleïnezuurverontreiniging bevatten.
5. Wanneer dit product met andere reagentia wordt gebruikt, volg dan de specifieke experimentele instructies voor de bediening.
6. Om goede zuiveringsresultaten te verkrijgen, moet de integriteit van het totale RNA goed zijn en moet de RIN-waarde >7,0 zijn.