RNase HII is een ribonuclease-intern enzym dat wordt verkregen uit de Pyrococcus abyssi en recombinant tot expressie gebracht in E. Coli. Het herkent de DNA-rN-DNA/DNA dubbelstrengs en knipt op de plaats waar ribonucleotiden in DNA zijn opgenomen. De activiteit op enkelstrengs RNA is echter erg laag en het vertoont geen knipactiviteit op dsDNA of ssDNA. RNase HII knipt op de plaats van een enkel ribonucleotideresidu van het 5'-uiteinde, waardoor een 5'-fosfaatgroep en een 3'-hydroxyluiteinde na het knippen ontstaan. Dit RNase HII-enzym heeft een optimale activiteit bij 70~75°C, is actief tussen 50°C en 75°C, maar heeft een zeer lage activiteit bij kamertemperatuur. Het product is zeer thermostabiel, met vrijwel geen verlies van activiteit na incubatie bij 95°C gedurende 45 minuten, en is compatibel met verschillende PCR-reactiesystemen.

Specificaties

Componenten

Opslag

Dit product moet worden bewaard bij -25~-15℃ gedurende 2 jaar.

Producttoepassing

1. Detectie door LAMP met zeer gevoelige probes.
2. RNase HII-afhankelijke PCR (rhPCR).
3. Verwijdering van niet-passende ribonucleotiden die gevormd worden tijdens de polymerasekettingreactie.
4. Afbraak van het RNA-gedeelte van Okazaki-fragmenten.

Notities

1. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
2. Voor uw eigen veiligheid draagt ​​u een labjas en wegwerphandschoenen.

Cijfers

1. E. coli genomische DNA-residu < 0,5 kopieën/100 U

Detectie van E. coli genomische DNA-residuen in verschillende batches van RNase HII toonden aan dat de gastheergenomische DNA-residuen van YeasenDe RNase HII van ligt ver onder de 0,5 kopieën/100 U.

Figuur 4. Detectie van E. coli genomische DNA-rest

2. 95°C hittebestendigheidstest

Na het verwarmen van RNase HII op 95°C gedurende 0 tot 45 minuten werd de enzymactiviteit van RNase HII getest. De resultaten gaven aan dat er vrijwel geen verlies van enzymactiviteit was in Yeasen's RNase HII zelfs na 45 minuten verhitting.

Figuur 5. Hittebestendigheidstest van 95°C

3. Geen exonuclease, nicking-enzym of RNase-residu (1 U-dosis)

Door 1 U van verschillende batches RNase HII te incuberen met hun respectievelijke substraten DNA/RNA bij 37 °C gedurende 4 uur, gaven de resultaten van agarosegelelektroforese aan dat er geen exonuclease, nicking-enzym of RNase-residu in RNase HII aanwezig was.

Figuur 6. Detectie van exonuclease, nicking-enzym en RNase-residu

Documenten:

Handleidingen