Beschrijving
ArCas12a, afgeleid van het CRISPR-systeem van Agathobacter rectale bacteriën en ook bekend als Cpf1, is een monomeer eiwit dat bestaat uit 1263 aminozuren. Als een klasse II (type V) lid van het CRISPR/Cas-systeem, functioneert ArCas12a uitsluitend via een enkel effector-eiwit en vertoont het significante verschillen van Cas9, zoals het richten op motieven die rijk zijn aan T, het niet nodig hebben van trans-activerende crRNA, het produceren van kleverige uiteinden bij DNA dubbelstrengsbreuken, het deelnemen aan RNA-verwerking en het bezitten van DNA-nuclease-activiteit.
ArCas12a mist het HNH-domein en kan onafhankelijk zijn RuvC-domein gebruiken om de PAM-regio te herkennen die rijk is aan thymine (T) aan het 5'-uiteinde van het doelwitnucleïnezuur onder begeleiding van CRISPR RNA (crRNA), waardoor de splitsing van het doelwit-DNA wordt geïnitieerd. Het is succesvol gebruikt voor genoombewerking bij veel zoogdieren en planten. Bovendien vertoont ArCas12a trans-splitsingsactiviteit, waardoor het in staat is om willekeurig niet-doelwit enkelstrengs DNA (ssDNA) in het reactiesysteem te knippen.
Vergeleken met andere LbCas12a/AsCas12a vertoont ArCas12a een hogere temperatuuraanpassingsvermogen (25-55OC), waardoor het geschikt is voor toepassingen op het gebied van genoombewerking en detectie van nucleïnezuur.
Functies
Breed reactietemperatuurbereik: Vertoont splijtactiviteit binnen het temperatuurbereik van 25-55OC
Laag nucleaseresidu: Geen resterend exonuclease, nickase of RNase
Cis-splitsingsactiviteit: Zeer effectieve splitsing van dubbelstrengs DNA in vitro
Trans-klievingactiviteit: Hoge trans-klievingactiviteit, geschikt voor detectie van nucleïnezuur
Toepassingen
CRISPR/Cas-genbewerking
Diagnostiek en detectie op basis van het CRISPR/Cas-systeem
Andere detectietoepassingen gecombineerd met isotherme nucleïnezuurversterkingstechnologieën (RPA en LAMP), enz.
Specificaties
| Bron | Het Cpf1-gen van Agathobacter rectale wordt uitgedrukt door recombinante expressie in E. coli |
| Moleculair gewicht | 149 kDa |
| PAM-sequentie | TTTN of TTTV |
| Reactieomstandigheden | 50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, pH 7.9 @25OC |
| Concentratie | 10 µM |
| Zuiverheid | >95% (SDS-PAGINA) |
| Inactivatievoorwaarden | 85OC, 5-10 minuten |
Componenten
| Componenten Nee. | Naam | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | ArCas12a-nuclease (10 μM) | 100 μL | |
| 14702-B | 10×ArCas12a-reactiebuffer | 1 ml | 1 ml |
Verzending en opslag
Dit product moet worden bewaard bij -25 ~ -15OC gedurende 2 jaar.
Cijfers
Figuur 1. Test van ArCas12a cis-klievingactiviteit: M: Marker; C: Template dubbelstrengs DNA (dsDNA)
Opmerking: Onder leiding van crRNA kan het dsDNA (600 bp) efficiënt splitsen om twee fragmenten te produceren (200 bp + 400 bp).
Figuur 2. Resultaten van de ArCas12a Trans-klieving Activiteitstest
Opmerking: Met dsDNA als doelwit werden ArCas12a, crRNA en een ssDNA-reporterprobe (met een fluorescerende reportergroep) toegevoegd voor in vitro-splitsing. Zodra ArCas12a een complex vormt met crRNA en het doelwit-DNA, activeert het trans-splitsingsactiviteit, waarbij de ssDNA-reporterprobe wordt doorgesneden en fluorescentie wordt uitgezonden.
Documenten:
Veiligheidsinformatieblad
14702_MSDS_Versie EN20241205.pdf
Handleidingen
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.