Beschrijving
De AapCas12b-nuclease (ook bekend als C2c1) is een DNA-endonuclease die wordt gemedieerd door tracrRNA:crRNA (of sgRNA), afkomstig van de thermofiele bacterie Alicyclobacillus acidophilus. In aanwezigheid van een PAM (TTN) sequentie op het doel dubbelstrengs DNA (dsDNA), splitst het specifiek het doel dsDNA, wat dubbelstrengs breuken veroorzaakt en kleverige uiteinden genereert. AapCas12b kan specifiek enkelstrengs DNA-doelen splitsen, onafhankelijk van de PAM sequentie. Zowel dubbelstrengs als enkelstrengs DNA-doelen kunnen de trans-splitsingsactiviteit van AapCas12b activeren. Wanneer het AapCas12b enzym een ternair complex vormt met sgRNA en doel DNA, wordt het geactiveerd voor niet-specifieke ssDNA trans-splitsingsactiviteit, waarbij elke willekeurige sequentie van ssDNA in het systeem wordt geknipt. De optimale splitsingsreactietemperatuur voor AapCas12b is 60OC, waardoor het hittebestendiger is dan AacCas12b en geschikter voor gebruik met LAMP om isotherme amplificatie/CRISPR-Cas-detectiesystemen te ontwikkelen.
Functies
Breed reactietemperatuurbereik: Vertoont splijtactiviteit binnen het temperatuurbereik van 37~65OC
Laag nucleaseresidu: Geen resterend exonuclease, nickase of RNase
Cis-splitsingsactiviteit: Zeer effectieve splitsing van dubbelstrengs DNA in vitro
Trans-klievingactiviteit: Hoge trans-klievingactiviteit, geschikt voor detectie van nucleïnezuur
Toepassingen
CRISPR/Cas-genbewerking
Diagnostiek en detectie op basis van het CRISPR/Cas-systeem
Andere detectietoepassingen gecombineerd met isotherme nucleïnezuurversterkingstechnologieën (RPA en LAMP), enz.
Specificaties
| Moleculair gewicht | 130 kDa |
| Concentratie | 10 µM |
| Zuiverheid | >95% (SDS-PAGINA) |
| Eenheid Definitie | De hoeveelheid Cas12b-enzym die nodig is om 1 pmol ssDNA-sonde binnen 1 minuut bij 60 °C te splitsenOC in een totaal reactievolume van 20 μL, bevat 1×reactiebuffer, wordt gedefinieerd als 1 U |
Componenten
| Componenten Nee. | Naam | 14808ES65 | 14808ES80 |
| 14808-A | AapCas12b-nuclease (10 μM) | 100 μL | |
| 14808-B | 10×Reactiebuffer | 1 ml | 1 ml |
Schipping en opslag
Dit product moet worden bewaard bij -25 ~ -15OC gedurende 2 jaar.
Cijfers
Figuur 1. Verificatie van de cis-splitsingsactiviteit van AapCas12b-nuclease
Opmerking: In een 20 μL-reactiesysteem dat Target dsDNA met een PAM-sequentie, sgRNA, Cas12b en 1 bevat×reactiebuffer, het mengsel werd geïncubeerd bij 60OC gedurende 30 minuten en vervolgens gedeactiveerd bij 85OC gedurende 5 minuten. De agarosegelelektroforeseresultaten toonden aan dat drie batches AapCas12b Nuclease allemaal in staat waren om het dsDNA effectief te splitsen, met een splitsingsefficiëntie die vergelijkbaar was met die van het geïmporteerde merk T*.
Figuur 2. Resultaten van de AapCas12b Nuclease Trans-cleavage Activiteitstest
Opmerking: In een 20 μL-reactiesysteem dat Target dsDNA met een PAM-sequentie, sgRNA, Cas12b, Report ssDNA fluorescerende probe en 1 bevat×reactiebuffer, het mengsel werd geïncubeerd bij 60OC gedurende 1 uur en het fluorescentiesignaal werd elke 30 seconden verzameld. De resultaten toonden aan dat in de aanwezigheid van Target DNA, sgRNA en Cas12b samen, de Report ssDNA fluorescent probe kon worden gesplitst, waardoor het fluorescentiesignaal vrijkwam.
Documenten:
Veiligheidsinformatieblad
14808_MSDS_Versie EN20241209.pdf
Handleidingen
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.