De Magnetisch Resterend DNA Steekproef Voorbereidingskit is geschikt voor de voorbehandeling van resterend DNA in verscheidene biologisch monsters. Het kan de scheiding en zuivering van sporen van rest-DNA van de gastheercel in monsters maximaliseren door gebruik te maken van unieke magnetische kralen en een zorgvuldig geoptimaliseerd buffersysteem.

De magnetische Kit voor de bereiding van rest-DNA-monsters kan worden gebruikt met een verscheidenheid aan rest-DNA van de gastheercel detectiekits, waaronder CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (Cat#41301ES), HEK293 Host Cell DNA Residu Detectie Kit (Cat#41302ES), Vero Host Cell DNA Residu Detectie Kit (Cat.nr. 41303ES), en E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (Cat.nr. 41304ES).

Productcomponenten

Verzending en opslag

1. Deel I wordt verzonden met een ijspakking, 4°C gedurende 1 jaar of -20°C voor langdurige opslag.

2. Deel II wordt bij kamertemperatuur verzonden en gedurende 1 jaar bij kamertemperatuur bewaard.

3. Deel III wordt op droogijs verzonden en bij -20°C opgeslagen voor 1 jaar.

4. Controleer na ontvangst van de goederen of de drie componenten van Deel I, Deel II en Deel III compleet zijn en bewaar ze onmiddellijk bij de juiste opslagtemperatuur.

Voorzorgsmaatregelen

1. Lees de gebruiksaanwijzing zorgvuldig door voor gebruik en handel strikt volgens de gebruiksaanwijzing. Het wordt aanbevolen om de monsterverwerking uit te voeren op een schone werkbank of een biologische veiligheidskast.

2. Let op of er neerslag of troebelheid optreedt in de oplossing die bij kamertemperatuur is bewaard (vooral wanneer de kamertemperatuur laag is, zoals in de winter). U kunt de oplossing in een waterbad van 37°C bewaren totdat de oplossing helder is, om te voorkomen dat het effect van het gebruik wordt beïnvloed.

3. Er kunnen tijdens de elutie restanten van magnetische kralen achterblijven. Probeer daarom te voorkomen dat u magnetische kralen opzuigt bij het nemen van monsters.

4. Vervang de tips regelmatig om kruisbesmetting te voorkomen wanneer u met dit product werkt.

5. Draag voor uw veiligheid en gezondheid persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM), zoals laboratoriumjassen en wegwerphandschoenen, wanneer u met dit product werkt.

6. Dit product is ALLEEN bedoeld voor onderzoeksdoeleinden!

Voorbereiden

1. Zelf te voorziene apparatuur: vortex shaker, waterbad of metaalbad, centrifuge, magnetisch scheidingsrek, Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A automatische nucleïnezuur-extractor of andere merken volautomatische nucleïnezuur-extractor.

2. Zelf meegebrachte verbruiksartikelen: 10 μL-1000 μL filtertips met lage adsorptie, 1,5 ml centrifugebuizen met lage adsorptie, PCR-buizen of 96-wells platen en bijbehorende buisdoppen of membranen.

3. Zelfbereide reagentia: absolute ethanol (analytische kwaliteit), 1×PBS-buffer (pH 7,4, vrij van Mg- en Ca-ionen), ultrazuiver water.

4. Voeg voor het eerste gebruik watervrije ethanol toe van het volume dat op het etiket of in de instructies staat aangegeven aan de flessen Wasoplossing A* en Wasoplossing B*, grondig mengen voor gebruik en ze goed markeren. Sluit de fles na gebruik goed af om het ethanolniveau in de fles te behouden.

Handmatige rest-DNA-extractie

1. Monsterverwerking

1.1 Als het monster een relatief hoog DNA-gehalte bevat, zoals een vaccin, verdun het dan in een geschikte verhouding met 1×PBS-buffer (pH 7.4, vrij van Mg- en Ca-ionen) en vervolgens extraheren (verdunning van het monster is bedoeld om de detectiewaarde binnen het lineaire bereik van de standaardcurve te krijgen en vervolgens de nauwkeurigheid van de detectie te garanderen. Meestal kan een 100-voudige verdunning worden overwogen).

1.2 Als het te testen monster is een droog poeder, verdun het tot 10 mg/ml of 100 mg/ml met ultrazuiver water voor gebruik.

1.3 Als het monster een complexe matrix heeft, moet een standaardadditie- en terugwinningsexperiment worden uitgevoerd om de juiste verdunning te bepalen.

2. Voeg 100 μL monster toe aan een 1,5 ml-buis, Voeg vervolgens 100 μL lysisbuffer en 10 μL proteinase K toe, meng met de vortexmixer en meng gedurende 10 seconden.

[Opmerkingen]: Voeg 10 μL proteinase K toe als de concentratie van het eiwitmonster 0-100 mg/ml is, en voeg 20 μL proteinase K toe als de concentratie van het eiwitmonster 100-200 mg/ml is.

3. Incubeer bij 60°C gedurende 20 minuten.

4. Voeg vervolgens toe 400 μL van de bindingsoplossing, 9 μL glycogeen en 6 μL Poly A kaliumzout, en vortexen en goed mengen.

5. Voeg 20 μL magnetische kralen toe, vortex en meng goed, en laat 10 minuten staan. Vortex en meng het 10 seconden elke 3 minuten.

[Opmerkingen]: De magnetische kralen moeten voor gebruik worden gevortexed om ervoor te zorgen dat de magnetische kralen grondig worden geresuspendeerd. Nadat er 4-5 keer tegelijk monsters zijn toegevoegd, wordt aanbevolen om opnieuw te mengen.

7. Centrifugeer kort om de oplossing naar beneden te krijgen en plaats de centrifugebuis 1-2 minuten op het magnetische rek. Nadat de magnetische kralen volledig zijn geabsorbeerd, verwijdert u voorzichtig de vloeistof.

8. Voeg 500 μL wasoplossing A toe (controleer voor gebruik of er absolute ethanol is toegevoegd), schud of vortex om te mengen en zorg ervoor dat de magnetische kralen worden verspreid en er geen magnetische kralen op de wand van de centrifugebuis blijven plakken.

9. Centrifugeer kort en plaats de centrifugebuis 1-2 minuten op een magnetisch rek. Nadat de magnetische kralen volledig zijn geabsorbeerd, verwijdert u voorzichtig de vloeistof.

10. Voeg 500 μL wasoplossing B toe (controleer voor gebruik of er absolute ethanol is toegevoegd), Schud of vortex om te mengen en zorg ervoor dat de magnetische kralen verspreid worden en er geen magnetische kralen op de wand van de centrifugebuis blijven plakken.

11. Centrifugeer kort en plaats de centrifugebuis 1-2 minuten op een magnetisch rek. Nadat de magnetische kralen volledig zijn geabsorbeerd, verwijdert u voorzichtig de vloeistof.

12. Om ervoor te zorgen dat de resterende vloeistof zoveel mogelijk wordt verwijderd, centrifugeer je de buis gedurende 10 seconden. Plaats het snel op een magnetisch rek en gebruik een 10 μL-pipet om de resterende vloeistof op te zuigen.

13. Open de dop van de tube en laat deze 3 minuten op kamertemperatuur staan. totdat de ethanol volledig is verdampt. Geen reflectie of scheuren op het oppervlak van de magnetische kralen geven aan dat de ethanol volledig is verdampt.

14. Haal de buis uit de magnetische standaard, voeg 50-100 μL voorverwarmd eluaat toe op 65°C, schud en meng goed. Centrifugeer vervolgens kort, incubeer het gedurende 5 minuten op 65°C, schud en meng elke 2-3 minuten.

15. Centrifugeer nogmaals kort, plaats de centrifugebuis gedurende 2 minuten op een magnetische standaard. Nadat de magnetische kralen volledig zijn geadsorbeerd, breng je de DNA-oplossing voorzichtig over naar een nieuwe centrifugebuis en bewaar je deze bij -20°C, of ​​bij -80°C voor langdurige opslag.