Concanavalin A (ConA) kralen zijn superparamagnetische polymeermicrobolletjes die covalente gekoppeld zijn aan Concanavalin A (een plantaardige mannose/glucose-bindende lectine geïsoleerd uit de zaden van graanplanten) op hun oppervlak. Deze kralen meerdere bezitten opmerkelijke kenmerken, waaronder monodispersiteit en sterke magnetische reactiviteit. Wanneer Ca²⁺ en Mg²⁺ ionen aanwezig zijn, kunnen magnetische ConA-korrels efficiënt en snel verschillende biomoleculen scheiden en zuiveren, zoals polysachariden, glycoproteïnen en glycolipiden, door gebruik te maken van de affiniteit tussen ConA globuline A en de terminale α-D-mannose- en α-D-glucosegroepen.

ConA magnetische kralen bieden een handige methode om cellen te scheiden of te fixeren, wat zorgt voor minimaal celverlies tijdens daaropvolgende wasstappen. Daarnaast kunnen ze worden gebruikt voor het verzamelen en fixeren van kernen. Bovendien vinden deze kralen hun nut in innovatieve technieken zoals CUT & Run en CUT & Tag, wat revolutionaire benaderingen zijn die worden gebruikt in ChIP-seq experimenten.

Samenvattend zijn ConA magnetische kralen krachtige hulpmiddelen voor de efficiënte zuivering van biomoleculen, gemakkelijke celscheiding en -fixatie, verzameling van kernen en toepassing in geavanceerde experimentele technieken.

Specificaties

Kenmerken

Figuren en tabellen

Tabel 1. De Yeasen ConA-kralen hebben een hoge vangstsnelheid. De hoeveelheid Concanavalin A (ConA) die in verhouding tot de microsferen wordt gebruikt, is geverifieerd om een ​​maximale bindingscapaciteit te garanderen en tegelijkertijd overmatige aggregatie van magnetische kralen na celbinding in CUT&Tag-experimenten te voorkomen. Bijvoorbeeld, het gebruik van 10 μL ConA-gecoate kralen kan een hoeveelheid cellen binden die gelijk is aan E7-niveaus, met een bindingsefficiëntie van meer dan 98%.

Figuur 1. Yeasen ConA-kralen vertonen een hoge dispersiteit. In het kraallabelingsproces werd een niet-biologisch afdichtmiddel gekozen om een ​​efficiënte sluiting te garanderen zonder beïnvloed te worden door variaties van batch tot batch. Dit garandeert een uitstekende afdichting van de magnetische kralen, waardoor hun hoge monodispersiteit behouden blijft tijdens de opslag van ConA-gecoate kralen, wat gunstig is voor een efficiënte binding aan koolhydraatmoleculen in daaropvolgende experimenten.

Figuur 2. CUT&Tag chromatine signaaldistributie met behulp van Yeasen Met kralen.

Opslag

Dit product moet gedurende 2 jaar bij 2~8℃ bewaard worden.

Instructies

De volgende handelingen nemen de zuivering van glycoproteïnen of de isolatie van cellen als voorbeeld. Knippen en taggen experimenten , zien Yeasen Cat# 12598ES voor protocol.

1. Voorbereiding van buffers

1) Door de klant geleverd

1. Vereiste materialen die niet zijn inbegrepen: magnetische standaard, Eppendorf-buizen, PCR-buizen, magnetische standaards, thermocyclers enz.
2. Breng de Kralen bij kamertemperatuur gedurende ten minste 30 min. Resuspendeer de kralen grondig door de fles te vortexen of te schudden.

1. Monsterverwerking（ zoogdiercellen als voorbeeld nemen ）

1. Bereid zoogdiercellen voor (1,0 × 10 ⁴~1.0×10 ⁵ cellen), centrifugeer (4℃，600×g, 3~5 min) en voorzichtig weggooien de bovenstaande vloeistof.
2. Voeg 140 μL bindingsbuffer toe, meng goed en resuspendeer de cellen, centrifugeer en verzamel (4℃，600×g, 3~5 min), zorgvuldig weggooien de bovenstaande vloeistof.
3. Voeg 90 μL bindingsbuffer toe, meng goed en resuspendeer de cellen.
   Let op: Sterk hechtende zoogdiercellen kunnen worden verkregen door gedeeltelijke vertering met behulp van een enzym zoals trypsine. Voor dierlijke weefsels, plantencellen of schimmelcellen vereist het verkrijgen van verspreide cellen of protoplasten vaak speciale behandelingen die zijn afgestemd op hun specifieke kenmerken.

1. ConA-kralen voorbereiden

1. Pipetteer de ConA-kralen voorzichtig tot ze volledig zijn gesuspendeerd, plaats 10 μL van de kralensuspensie in een nieuwe centrifugebuis van 200 μL.
2. Voeg 40 μL bindingsbuffer toe, meng goed en laat het geheel 1 min op de magnetische standaard staan. Gooi de supernatant weg nadat de magnetische kralen aan de zijwand van de centrifugebuis zijn geadsorbeerd.
3. Voeg 10 μL bindingsbuffer toe, meng goed en suspendeer de ConA-kralen opnieuw.

1. Voorbeeldbinding

1. Voeg het voorbereide celmonster toe aan de voorbehandelde kralen, pipetteer de opnieuw gesuspendeerde kralen voorzichtig en laat ze vervolgens incuberen op een omgekeerde mixer (kamertemperatuur 30 min of 4℃ gedurende de nacht).
2. Plaats het geheel 1 minuut op een magnetische standaard en wacht tot de magnetische kralen aan de zijwand van de centrifugebuis zijn geadsorbeerd. Gooi de supernatant vervolgens voorzichtig weg.
3. Toevoegen 500 μL elutiebuffer voor het cel-ConA-kralencomplex en Voorzichtig pipetteren resuspendeer kralen, dan Plaats het geheel 1 minuut op een magnetische standaard en wacht tot de magnetische kralen aan de zijwand van de centrifugebuis zijn geadsorbeerd. Gooi de supernatant vervolgens voorzichtig weg.
4. Herhaal stap 3) nog drie of vier keer.

1. Elutie

1. Voor glycoproteïnen, voeg 50~250 μL elutiebuffer toe, pipetteer de geresuspendeerde kralen voorzichtig en incubeer vervolgens op een omgekeerde mixer (kamertemperatuur gedurende 10~30 min). Na omgekeerde mix, plaats op een magnetische standaard gedurende 1 min, verzamel de supernatant in een nieuwe 1,5 ml buis voor stap SDS-PAGE of Western blot.
2. Voor cellen is elutie niet nodig.

Notities

1. Breng de ConA kralen bij kamertemperatuur voor gebruik.
2. Voorkom bevriezing, anders kan het kralenmateriaal achteruitgaan of kan de activiteit verloren gaan.
3. ConA vereist de aanwezigheid van Ca2+- en Mn2+-ionen om actief te zijn. Daarom moeten reagentia die EDTA of andere metaalionchelatoren bevatten, tijdens het experiment worden vermeden.
4. Wanneer ConA-korrels met cellen worden geïncubeerd, kunnen ze aggregeren. Dit is normaal en heeft geen invloed op het normale gebruik van magnetische korrels.
5. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
6. Voor uw eigen veiligheid, draag alstublieft een labjas en wegwerphandschoenen.

Handmatig