Polyacrylamidegel (PAGE-gel) wordt vaak gebruikt voor proteïne-elektroforese om proteïnescheiding te realiseren. Dit soort gel bestaat over het algemeen uit geconcentreerde gel en scheidingsgel. De eerste speelt de rol van het concentreren van proteïnemonsters, terwijl de laatste proteïnen van verschillende groottes scheidt op basis van de concentratie van acrylamidemonomeer en N,N-methylenebisacrylamide (methyleneacrylamide) crosslinking-middel dat in de gel wordt gebruikt.

Deze kit biedt een verscheidenheid aan reagentia die nodig zijn voor snelle bereiding van PAGE-gel. Gebruikers hoeven alleen hun eigen gelbereidingsapparatuur voor te bereiden om gel te bereiden, wat het gelbereidingsproces aanzienlijk vereenvoudigt. De gel die met deze kit wordt bereid, kan alleen worden gebruikt voor denaturerende PAGE-gelelektroforese. Deze specificatie kan ongeveer 125 stukjes minigel bereiden (berekend op 0,75 mm dikke gel).

Specificaties

Componenten

Verzending en opslag

Het product wordt geleverd met een koelelement en kan tot 2 uur bewaard worden.℃~8℃ voor 1 jaar.

Instructies: Het is aan te raden om niet te veel stukjes gel tegelijk te mengen om te voorkomen dat de bovenste oplossing te laat wordt toegevoegd (maximaal 2-3 stukjes worden aanbevolen)

1. Selecteer de juiste gelconcentratie op basis van het molecuulgewicht van het doelproteïne (zie tabel 1)

2. Gelproductieproces (neem een ​​stukje 0,75/1,0/1,5 mm minigel als voorbeeld)

2.1 Neem een ​​gelijk volume scheidingsgelbuffer en scheidingsgeloplossing en meng deze, d.w.z. neem respectievelijk 2,0/2,7/4,0 ml van de twee oplossingen.

2.2 Weeg 0,1 g ammoniumpersulfaat af en los het op in 1 ml gedemineraliseerd water. De klant moet het ammoniumpersulfaat zelf aanschaffen.

2.3 Voeg 35/45/70 μL APS toe aan de gemengde oplossing in stap 1 (de hoeveelheid APS kan worden gehalveerd als het stollen te snel gaat) en meng volledig.

2.4 Injecteer de oplossing in stap 2 in de gelvormende glasplaat. Let op dat de geconcentreerde gel binnen 2 minuten na toevoeging van de scheidingsgel in de gelvorm moet worden geïnjecteerd en dat het gieten van de geconcentreerde gel langzaam moet zijn om vermenging van de geconcentreerde gel en de scheidingsgel te voorkomen. Als het individu het moeilijk vindt om te configureren, kan het ook worden aangepast om geconcentreerde gel te configureren na het afdichten met ethanol.

2.5 Bereiding van geconcentreerde gel: neem een ​​gelijk volume geconcentreerde gelbuffer en geconcentreerde geloplossing, d.w.z. neem respectievelijk 0,5/0,75/1,0 ml van de twee oplossingen en voeg vervolgens 10/13/18 μL APS toe en meng goed.

2.6 Injecteer het in de gelvormende glasplaat en plaats de kamtanden (gebruik geen overmatige kracht om de kamtanden voorzichtig in te brengen).

2.7 Nadat de geconcentreerde gel 15 min is gestold, kunnen de kamtanden worden verwijderd en gebruikt voor elektroforese. Let op: probeer vers bereide elektroforesebuffer te gebruiken.

Notities

1. Het wordt aanbevolen dat de spanning tijdens elektroforese tussen 100-120 V ligt. Als het nodig is om de elektroforesesnelheid te versnellen, kan deze worden verhoogd tot 150 V.

2. Zorg ervoor dat de geloplossing op kamertemperatuur is voordat u de gel vult (laat de oplossing bijvoorbeeld enkele minuten staan) om de vorming van luchtbellen in de gel effectief te voorkomen.

3. De klant moet het ammoniumpersulfaat zelf aanschaffen. Wij raden aan om het product met Cat#A3678 van Sigma te gebruiken.

4. De hoeveelheid ammoniumpersulfaatoplossing is alleen ter referentie en de werkelijke hoeveelheid kan worden verhoogd of verlaagd op basis van persoonlijke experimentele gewoonten en ervaring. Het toevoegen van meer ammoniumpersulfaat kan de gelsnelheid versnellen en vice versa. De stollingssnelheid van PAGE-gel is nauw verwant aan de temperatuur en de hoeveelheid ammoniumpersulfaat.

5. Er is een geschikte hoeveelheid TEMED-vervangers aan dit product toegevoegd. Als het nodig is om de gelsnelheid verder te versnellen, kan er een geschikte hoeveelheid TEMED worden toegevoegd, indien nodig, vóór het doseren.

6. Er is een significante positieve correlatie tussen gelstolling en temperatuur. Onder dezelfde omstandigheden geldt: hoe hoger de temperatuur, hoe sneller de stollingssnelheid.

7.Color geconcentreerde gel kan een kleine hoeveelheid neerslag produceren tijdens opslag, wat een normaal verschijnsel is. Voel u vrij om het te gebruiken.

8. De APS werd opgeslagen bij -20℃Voor het gemak kan de APS die geopend is en in gebruik is, worden opgeslagen op 4℃.

9. Draag de nodige PBM, zoals een labjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te waarborgen.!

10. Alleen voor onderzoeksdoeleinden!

Tabel 1 Referentiescheidingsbereik van SDS-PAGE-gel met verschillende concentraties

Documenten:

Veiligheidsinformatieblad

20326-A-MSDS-CN20250110

20326-B-MSDS-CN20250110

20326-C-MSDS-CN20250110

20326-D-MSDS-CN20250110

Handleidingen

20326_Handleiding_HB230113_NL

Citaten en referenties:

[1] Liu C, Sun W, Zhu T, et al. Glia maturation factor-β induceert ferroptosis door chaperone-gemedieerde autofagische afbraak van ACSL4 bij vroege diabetische retinopathie te belemmeren. Redox Biol. 2022;52:102292. doi:10.1016/j.redox.2022.102292(IF:11.799)

[2] Li Y, Qin G, Du J, Yue P, Zhang Y, Hou N. circRNA LDLRAD3 verbetert het kwaadaardige gedrag van NSCLC-cellen via de miR-20a-5p-SLC7A5-as die het mTORC1-signaalpad activeert. J Healthc Eng. 2022;2022:2373580. Gepubliceerd op 6 januari 2022. doi:10.1155/2022/2373580(IF:2.682)