Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit is ontworpen om antilichamen en bijbehorende antigenen te detecteren die direct of indirect zijn gelabeld met mierikswortelperoxidase (HRP). Het principe van Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit is dat eiwitten of nucleïnezuren na elektroforese werden overgebracht naar het geprinte membraan en de doeleiwitten op het membraan werden gebonden door primair antilichaam en secundair antilichaam gelabeld met HRP, of de nucleïnezuren op het membraan werden direct of indirect gebonden door probes gelabeld met HRP. Na het wassen van het membraan werd de ECL-werkoplossing die door het product was bereid, gebruikt om het membraan enkele minuten bij kamertemperatuur te incuberen. Het geprinte membraan werd in plasticfolie gewikkeld en aan de röntgenbelichtingscassette bevestigd. Vervolgens wordt de röntgenfilm in een donkere kamer op het membraan gedrukt en enkele seconden tot enkele uren belicht. Na ontwikkeling en fixatie kunnen eiwit- of nucleïnezuurbanden duidelijk op de röntgenfilm worden weergegeven.

Deze kit heeft een uniek luminescerend substraatsysteem, dat de belichtingsachtergrond vermindert terwijl een nieuwe oxidant wordt geïntroduceerd, wat de stabiliteit van de kit aanzienlijk verbetert, waardoor deze tot wel een jaar stabiel blijft bij kamertemperatuur. Naast röntgenstraling kan fluorescerende CCD-scan ook direct worden gebruikt, voornamelijk voor WB-detectie en chemiluminescentie-immuundetectiesysteem.

Functies

Dankzij de hoge gevoeligheid en de hoge signaal-ruisverhouding kan het antigenen van gemiddelde kwaliteit detecteren.

De bedrukte filmband schijnt snel en helder en kan onder een fluorescentielamp worden bekeken.

Voor het detecteren van de doelhoeveelheid zijn met name hogere, conventionele eiwitmonsters geschikt.

Nieuwe oxidant, stabiel bij kamertemperatuur gedurende maximaal een jaar.

Toepassingen

Chemiluminescentie ELISA

Westerse vlek

Dot Blot-DNA/RNA

Zuidelijke blot-DNA

Noordelijke blot-RNA

Specificaties

Componenten

Verzending en opslag

Het product wordt verzonden met kamertemperatuur en kan een jaar lang bij kamertemperatuur worden bewaard. Als het langere tijd niet wordt gebruikt, wordt het aanbevolen om het bij 2 te bewaren℃~8℃ om de geldigheidsduur te verlengen.

Opmerking: 36222-A moet op een donkere plaats bewaard worden!

Instructies (bijvoorbeeld röntgenfilm)

1. Routinematige elektroforese, overdrachtmembraan, antilichaam gelabeld met HRP of nucleïnezuursonde gelabeld met HRP, incubatie en wassen van het membraan.

Opmerkingen: ECL-luminescentieoplossing is het kleurensubstraat van HRP, dus het detectiesysteem moet gebaseerd zijn op HRP-enzymgelabelde antilichamen of nucleïnezuursondes.

2. Tegelijkertijd met het voor de laatste keer wassen van het membraan, wordt de luminescerende werkoplossing vers bereid (100-200 μL luminescerende werkoplossing/cm2 membraan): neem dezelfde volumes van Reagens A en B, meng goed voor later gebruik.

Opmerkingen: Neem Reagens A en Reagens B moeten verschillende tips gebruiken. Het wordt aanbevolen om de werkvloeistof onmiddellijk te gebruiken. Het kan nog steeds worden gebruikt na een paar uur bij kamertemperatuur, maar de gevoeligheid is iets verminderd.

3. Gebruik een platte pincet om het membraan eruit te halen, leg het op filterpapier om de lotion af te voeren, maak het membraan niet helemaal droog. Dompel het membraan volledig onder in luminescerende werkoplossing, voldoende contact met luminescerende werkvloeistof. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1-2 minuten en bereid onmiddellijk voor op blootstelling aan de tablet.

4. Pak het membraan met een pincet en leg het op filterpapier om de luminescentie-werkvloeistof af te voeren. Maar was de luminescentie-vloeistof niet af.

5. Leg een stuk plasticfolie groter dan het membraan op het binnenoppervlak van de röntgenfilm obscura. Bevestig het bedrukte membraan aan de plasticfolie, vouw de plasticfolie volledig om het bedrukte membraan en verwijder de gasbel en vouw, kan de rand van de overtollige plasticfolie afsnijden. Gebruik filterpapier om overtollige lichtgevende werkvloeistof op te zuigen. Bevestig de plasticfolie die het bedrukte membraan in de obscura bedekt met tape, met de proteïneband naar boven gericht.

6. Een stuk röntgenfilm werd uit de donkere kamer gehaald en op het ingepakte membraan gelegd. De film werd geperst en belicht gedurende 30 seconden - 2 minuten. Vervolgens werd de film ontwikkeld en gefixeerd.

Opmerkingen: De belichtingstijd moet worden aangepast aan de belichtingsintensiteit.Als de achtergrond te hoog is, gebruik dan twee röntgenfilms tegelijk.

Andere belichtingsmethoden

Indien het gebruik van CCD-fotografie: het membraan kan in de werkvloeistof worden geplaatst, na de boot volgens het gebruik van de instructies, verwijder de film, neem foto's. Bovendien kunnen de meetparameters van de machine worden aangepast aan de situatie om de signaal-ruisverhouding te verbeteren.

Notities

1. Bellen moeten worden vermeden bij membraanoverdracht, afdichting en incubatie. Daarnaast voorkomt het dragen van handschoenen dat er vingerafdrukken op het membraan achterblijven en houdt het het schoon.

2. Langdurige blootstelling of overmatige proteïne zal de achtergrond verdiepen en de verandering van bandsterkte de lineaire relatie doen verliezen. Onderbelichting zal de banden vervagen.

3. Sommige plasticfolie kan de fluorescentie doven bij het wikkelen van het geprinte membraan. Er moet plasticfolie van hoge kwaliteit worden geselecteerd.

4. Vermijd het plaatsen van meerdere membranen in dezelfde wasmembraandoos, omdat wederzijdse adsorptie of wrijving een diepe achtergrond kan veroorzaken.

5. De positie en grootte van de banden op de film kunnen nauwkeurig worden bepaald met behulp van zichtbare, vooraf gekleurde eiwitmarkers en fluorescentie-autoradiografie-belichtingstags.

6. Gebruik een biotine-avidinesysteem en vermijd het gebruik van melkafsluiting, omdat dit een te hoge achtergrond kan veroorzaken.

7. Metaaloxidedeeltjes kunnen korrelige vlekken op het membraan veroorzaken. Vermijd het gebruik van roestige scharen en pincetten. Gebruik een plat plastic pincet.

8. Natriumazide (NaN3) kan de HRP-activiteit remmen. Indien nodig mag NaN3 niet meer dan 0,01% worden gebruikt om de met HRP gelabelde sonde of antilichaam terug te winnen.

9. Dit product heeft geen speciale toxiciteit, volgens de gangbare chemische behandeling.

10. Draag de nodige PBM, zoals een labjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te waarborgen.!

11. Alleen voor onderzoeksdoeleinden!

Documenten:

Veiligheidsinformatieblad

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Handleidingen

36222_Handleiding_HB221212_NL

Citaten en referenties:

[1] He X, Li J, Zhou G, et al. Poorten van hippocampusritmes en geheugen door synaptische plasticiteit in remmende interneuronen. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] Wang X, Zhang S, Jin D, et al. μ-opioïde receptoragonist vergemakkelijkt de vorming van circulerende tumorcellen bij blaaskanker via het MOR/AKT/Slug-pad: een uitgebreide studie met gerandomiseerde gecontroleerde studie.Cancer Commun (Londen). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. CaCO3-nanodeeltjes verwerkt met KAE om versterkte calciumoverbelastingkankertherapie mogelijk te maken. Biomaterialen. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[4] Xu Z, Xu J, Sun S, et al. Mecheliolide veroorzaakt ROS-gemedieerde ERS-gedreven immunogene celdood bij hepatocellulair carcinoom. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, et al. Arseenretentie in erytrocyten en excessieve erytrofagocytose is gerelateerd aan een lage seleniumstatus door verstoorde redoxhomeostase. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, et al. Exosomale ncRNA-profilering van mycobacteriële infectie identificeerde miRNA-185-5p als een nieuwe biomarker voor tuberculose. Brief Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Hu P, Li H, Sun W, et al. Cholesterol-geassocieerde lysosomale stoornis veroorzaakt celdood van hematologische maligniteit: dynamische analyse van cytotoxische effecten van LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Wang X, Ni J, You Y, et al. SNX10-gemedieerde LPS-detectie veroorzaakt disfunctie van de darmbarrière via een caspase-5-afhankelijke signaalcascade. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] Jiang K, Chen H, Fang Y, et al. Exosomaal ANGPTL1 verzwakt colorectale kankerlevermetastasen door het reguleren van het Kupffer-celsecretiepatroon en het verhinderen van MMP9-geïnduceerde vasculaire lekkage. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Gepubliceerd 2021 Jan 7. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10 (sorterende nexine 10) remt de initiatie en progressie van colorectale kanker door de autofagische afbraak van SRC te controleren. Autophagy. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Extracellulaire blaasjes van Fusobacterium nucleatum verstoren de darmbarrière door zich te richten op het RIPK1-gemedieerde celdoodpad. Gut Microbes. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)