Dubbelstrengs RNA (dsRNA) ontstaat als bijproduct tijdens de in vitro transcriptie van mRNA. Dit bijproduct bezit immunogene eigenschappen in het menselijk lichaam, die een immuunreactie kunnen uitlokken, wat vervolgens de mRNA-niveaus verlaagt. Dit maakt dsRNA een lastige procesonzuiverheid die grondige eliminatie en strikte controle van de resterende aanwezigheid ervan noodzakelijk maakt.

Om dit probleem aan te pakken, maakt de dsRNA (Double-stranded RNA) ELISA-detectiekit gebruik van de experimentele principes van een enzyme-linked immunoassay (ELISA) met dubbele antilichamen voor de kwantificering van resterend dsRNA. De kit kan niet alleen worden gebruikt bij de detectie van reguliere dsRNA's, maar ook bij de detectie van peudo UTP, N1-Me-peudo UTP en 5-OMe-UTP gemodificeerde dsRNA's.

De procedure omvat het toevoegen van zowel een standaard als het testmonster aan een enzymplaat (aangeduid als 36717-A) die eerder is gecoat met anti-dsRNA-antilichamen. Vervolgens worden biotine-gelabelde dsRNA-detectie-antilichamen (36717-F) toegevoegd in een verdunde vorm. Ten slotte wordt Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) geïntroduceerd om een ​​complex te creëren dat antilichamen, antigenen, biotine en SA-HRP omvat.

Na het wassen van de plaat, initieert de toevoeging van TMB chromogene oplossing (36717-K) de kleurontwikkeling. Onder invloed van HRP-enzymkatalyse ondergaat TMB een transformatie van kleurloos naar blauw, die vervolgens wordt gestopt door de toepassing van de stopoplossing (36717-L). Uiteindelijk resulteert deze transformatie in een gele tint, waarvan de intensiteit positief correleert met de hoeveelheid dsRNA die in het monster is geïdentificeerd.

Deze kit is veelzijdig inzetbaar en maakt optimalisatie van het zuiveringsproces van biologische producten, controle op onzuiverheden tijdens tussenliggende fasen en vrijgavetesten voor de beoordeling van het uiteindelijke product mogelijk.

Pproduct Valliantie Rapport

Componenten

Verzending en opslag

De kit wordt geleverd met een ijspakket en kan worden bewaard bij 2°C ~8°C. Ongeopend product is een jaar geldig. Zodra het reagens is geopend, is het een half jaar geldig. Vries dit product nooit in.

Instructies

1. Voorbereiding voor het experiment

1) Experimentele materialen die niet in deze kit zijn opgenomen, maar die wel nodig zijn voor het experiment:

a. RNase-vrije tips;

b. RNase-vrije centrifugebuis;

c. Stofvrij papier;

d. RNase-vrije monstervoorbehandelingsplaat;

e. Gedemineraliseerd water of dubbel gedestilleerd water.

2) Vereiste maar niet meegeleverde instrumenten en apparatuur:

a. Multifunctionele microtiterplaatlezer (met inbegrip van een detectiemodus met twee golflengten, die 450 nm en 650 nm bestrijkt; die 450 nm als detectiegolflengte en 650 nm als referentiegolflengte kan gebruiken);

b. Volledig automatische plaatwasser, vortexmenger, constante temperatuurmenger, centrifuge;

c. Precisiemicropipetten en multikanaalsmicropipetten met verschillende specificaties;

d. Timer, 4℃ koelkast;

e. Microtiterplaatschudapparaat.

2. Resultaatanalyse

a. Als de OD-waarde van het te testen monster de OD-waarde op het hoogste punt van de standaardcurve overschrijdt, moet het monster worden verdund en opnieuw worden gemeten.

b. Curve Development Procedure: Maak een standaardcurve door de standaardconcentraties op de x-as en de bijbehorende gekalibreerde standaardabsorptiewaarden op de y-as te plotten. Verschillende teken- en statistische softwaretools kunnen helpen bij het genereren van standaardcurven en het bepalen van onbekende monsterconcentraties. Het is raadzaam om een ​​vier-parameter of vijf-parameter fittingmethode te gebruiken voor dit experiment.Bereken uiteindelijk de resterende hoeveelheid dsRNA in het monster door te verwijzen naar de standaardcurve en rekening te houden met de verdunningsfactor van het monster.

c. De meegeleverde standaardcurve is een illustratief voorbeeld (alleen ter referentie). De werkelijke monsterinhoud moet worden bepaald met behulp van een standaardcurve die specifiek is gegenereerd voor dezelfde experimentele standaard.

3. Experimenteel stroomdiagram

Figuur 5 Experimenteel stroomdiagram

4. Productprestaties

De prestaties van deze kit zijn volledig geëvalueerd. Neem voor meer informatie contact op met technisch personeel om het bijbehorende prestatieverificatierapport te verkrijgen.

5. Notities

1. Lees deze gebruiksaanwijzing zorgvuldig door voordat u deze kit gebruikt.
2. Gebruik dit product binnen de geldigheidsperiode. Het is niet toegestaan ​​om gerelateerde reagentia uit verschillende batches te mengen.
3. Alle reagentia moeten voor gebruik op kamertemperatuur worden gebracht.
4. Draag voor uw veiligheid en gezondheid een laboratoriumjas en wegwerphandschoenen.
5. Dit product is uitsluitend bedoeld voor wetenschappelijk onderzoek.
   
   

   Documenten:

   Veiligheidsinformatieblad

   Handmatig