Beschrijving
De MycAway™ Mycoplasma qPCR Detection Kit is een product dat is ontworpen voor kwalitatieve detectie van mycoplasma-contaminatie in verschillende bronnen, waaronder grondstoffen, celbanken, viruszaden, virale of celoogstoplossingen en cellen die worden gebruikt in klinische behandelingen, onder andere. Deze kit maakt gebruik van Taqman fluorescerende probes (FAM en VIC) en gebruikt Multiple polymerase chain reaction (PCR)-technieken om het doelwit en de interne controle afzonderlijk te detecteren. Het is gevalideerd voor specificiteit, detectielimiet en robuustheid volgens EP <2.6.7>-normen, wat een hoge gevoeligheid, specificiteit, efficiëntie en veiligheid aantoont. De detectielimiet is gelijk aan of lager dan 10 CFU/mL.
Voor extractie van nucleïnezuur kan dit product worden gebruikt in combinatie met de MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit (Cat#18461), die handmatige extractiemethoden gebruikt. Als alternatief kunnen nucleïnezuren in monsters automatisch worden geëxtraheerd met behulp van de AutoPure 32A automatische nucleïnezuurextractor (Cat#80501) en de MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA (Cat#18462). Het is belangrijk om op te merken dat kits met Cat#18461 en Cat#40619 een uitgebreide validatie hebben ondergaan; neem voor gedetailleerde validatie-informatie contact op met onze technische ondersteuning. Na het voorbehandelen van de monsters om storende onzuiverheden te verwijderen en het verkrijgen van gezuiverde nucleïnezuren, wordt een qPCR-reactie uitgevoerd met behulp van een Real-Time PCR-versterker en wordt het fluorescentiesignaal van de probe verzameld en geanalyseerd.
| Cat.Nr. | 40619ES25 / 40619ES60 |
| Maat | 25 D / 100 D |
| Detectie Beperken | 10 KVE/ml |
| Detect methode | qPCR methode (Taqman fluorescerend) |
| Duur | 4 uren |
| Fluorescerend doorvragen | FAM (Doel kanaal)；VIC (Interne kanaal) |
| Bedekt mycoplasma | ≥ 100 |
| Geldigmaking | Gevalideerd volgens naar EP <2.6.7> |
Componenten
| Componenten nr. | Naam | 40619ES25 | 40619ES60 |
| 40619-A | 4×MyqPCR-reactiebuffer | 250 μL | 1 ml |
| 40619-B | MijnPrimer & Probe MENGEN | 25 μL | 100 μL |
| 40619-C* | Interne Controle (IC) | 25 μL | 100 μL |
| 40619-D** | Positieve controle (PC) | 500 μL | 2 ml |
| 40619-E*** | DNA-verdunning buffer | 1 ml | 4×1 ml |
| 40619-F**** | Ultrazuiver water | 500 μL | 2×1 ml |
*IC: Intern controle;
**PCS: Positief controle oplossing ,de concentratie is 1.000 kopieën/µL.
***DNA Verdunning buffer: gebruikt voor ik verdunning En de sjabloon van NTC En NCS-onderzoek.
****Ultrazuiver water: gebruikt voor de voorbereiding van qPCR Mengen.
Opslag
Dit product moet gedurende 2 jaar bij een temperatuur van -25~-15℃ bewaard worden.
*Controleer bij ontvangst van de kit of alle componenten compleet zijn en bewaar ze onmiddellijk bij een temperatuur van -25 tot -15℃ conditie indien de assay niet onmiddellijk wordt uitgevoerd. Let op: 40619-B moet worden bewaard uit de buurt van licht.
Instructies
- Voorbereidingen voor het experiment
1) Bereid de benodigde reagentia en materialen voor die u bij het experiment zult gebruiken.
2) Bevestig de geschiktheid van het qPCR-instrument
Deze kit kan worden gebruikt op de onderstaande typen qPCR-instrumenten:
- Bio-Rad: CFX96
- Thermo Scientific: 7500 Real-Time PCR-systeem; QuantStudio™5;
- Experimentele methode
1) DNA-extractie
Wij raden aan om te gebruiken ' Kit voor de bereiding van magnetische rest-DNA-monsters (Cat#18461ES voor handmatige extractie en Cat#18462ES voor automatische extractie) voor de DNA-extractie, Jij kan bezoek ' http://www.yeasenbiotech.com ' voor de
gedetailleerde informatie en de aankoop.
De kit (Cat#40619ES) bevat een interne controle (IC). Als de IC aan de monsters wordt toegevoegd vóór DNA-extractie, kan het volledige proces worden geverifieerd (inclusief DNA-extractie en qPCR-reactie). Als de IC aan de qPCR-mastermix wordt toegevoegd
direct, De IC fungeert alleen als een qPCR-controle.
2) qPCR-mixbereiding
- Afhankelijk van de hoeveelheid monsters die positieve controle (PCS), geen templatecontrole (NTC), negatieve controle omvatte controleoplossing (NCS) en testmonster (TS) om het aantal reacties te berekenen. Bereid 2 reacties parallel voor
elk monster in het algemeen.
* PCS：Positief controle oplossing；NTC：Nee sjabloon controle；NCS：Negatief controle oplossing；TS：Test voorbeeld. Daar is Nee behoefte naar presteren
de steekproef extractie voor STUKS En NTC, maar NCS En TS Zijn nodig.
Reactieputten (M1) = (1 × NCS + N×TS) ×2
Reactieputten (M2) = (1×PCS + 1×NTC) ×2
Reactieputten (M3) = (1 × PCS + 1 × NTC + N × TS) ×2
- Ontdooi de benodigde hoeveelheid reagentia op ijs volgens het experimentele ontwerp en de onderstaande tabellen.
- Bereken de hoeveelheid qPCR Mix volgens het aantal reacties. Let op, als de kit gebruikt zal worden voor GMP-activiteiten zoals product release, raden we aan om Tabel 1 en 2 te gebruiken voor de voorbereiding; Als de kit zal zojuist gebruikt voor onderzoek en er is geen noodzaak om IC toe te voegen voor de extractie na de evaluatie, volg dan Tabel 3 voor
de voorbereiding. Let op: niet alle M1, M2 en M3 Zijn nodig om zijn voorbereiden.
| Onderdeel | Volume (1×40μL reacties) | Volume (M1 × 40 μL) |
| 4× MyqPCR-reactiebuffer | 10 μL | (M1+2) ×10 μL |
| MijnPrimer & Probe MENGEN | 1 μL | (M1+2) ×1 μL |
| ROX | 0,8 μL /0 μL** | (M1+2) ×0,8 μL /0 μL |
| Gezuiverd water | Tot 20 μL | Tot (M1+2) ×20 μL |
| Totaal | 20 μL | (M1+2) ×20 μL |
Tabel 1 qPCR-mixsysteem voor M1
*De configuratie systeem in Tafel 1 is gebaseerd op de stelling Dat ik is toegevoegd voor extractie voor beide NCS En TS, dus Het is niet nodig
naar toevoegen ik wanneer qPCR Mengen voorbereiding. IC toevoegen methode voor extractie: Ten eerste, verdunnen ik door 20 keer met DNA verdunningsmiddel, en toevoegen 1 μL
verdund ik naar binnen elk 100 μL test steekproef voor de verder extractie.
**Dit uitrusting doet niet bevatten ROX Referentie Verf. Als ROX referentie kleurstof is nodig voor de Echt Tijd PCR versterkers Dat Jij Zijn momenteel gebruik makend van, 50×ROX Referentie Verf (Cat.nr. 10200ES) is aanbevolen voor gebruik. In dit geval, de toegevoegd volume is 0,8 μL, als getoond in Tafel 1. Als gebruik makend van ander
merken van ROX producten, alstublieft refereren naar hun instructies voor ROX toevoeging.Als Nee ROX referentie kleurstof is vereist, de toegevoegd volume is 0 μL.
| Onderdeel | Volume (1×40μL reacties) | Volume (M2 × 40 μL) |
| 4× MyqPCR-reactiebuffer | 10 μL | (M2+2) ×10 μL |
| MijnPrimer & Probe MENGEN | 1 μL | (M2+2) ×1 μL |
| Interne controle (IC) | 1 μL* | (M2+2) ×1 μL /0 μL |
| ROX | 0,8 μL /0 μL** | (M2+2) ×0,8 μL /0 μL |
| Gezuiverd water | Tot 20 μL | Tot (M2+2) ×20 μL |
| Totaal | 20 μL | (M2+2) ×20 μL |
Tabel 2 qPCR-mixsysteem voor M2
*De configuratie systeem in Tafel 2 is gebaseerd op de stelling Dat ik is niet toegevoegd in STUKS En NTC voor extractie, Dus ik behoeften naar zijn toegevoegd tijdens qPCR Mengen voorbereiding. IC toevoegen methode na extractie: Verdund ik door 100 keer met DNA verdunningsmiddel En toevoegen 1 μL verdund ik naar binnen
elk qPCR Mengen systeem.
**Dit uitrusting doet niet bevatten ROX Referentie Verf. Als ROX referentie kleurstof is nodig voor de Echt Tijd PCR versterkers Dat Jij Zijn momenteel gebruik makend van, 50×ROX Referentie Verf (Cat.nr. 10200ES) is aanbevolen voor gebruik. In dit geval, de toegevoegd volume is 0,8 μL, als getoond in Tafel 1. Als gebruik makend van ander
merken van ROX producten, alstublieft refereren naar hun instructies voor ROX toevoeging. Als Nee ROX referentie kleurstof is vereist, de toegevoegd volume is 0 μL.
| Onderdeel | Volume (1×40μL reacties) | Volume (M3 × 40 μL) |
| 4× MyqPCR-reactiebuffer | 10 μL | (M3+2) ×10 μL |
| MijnPrimer & Probe MENGEN | 1 μL | (M3+2) ×1 μL |
| Interne controle (IC) | 1 μL* | (M3+2) ×1 μL /0 μL |
| ROX | 0,8 μL /0 μL** | (M3+2) ×0,8 μL /0 μL |
| Gezuiverd water | Tot 20 μL | Tot (M3+2) ×20 μL |
| Totaal | 20 μL | (M3+2) ×20 μL |
Tabel 3 qPCR-mixsysteem voor M3
*De configuratie systeem in Tafel 3 zijn gebaseerd op de stelling Dat ik is niet toegevoegd naar monsters voor extractie, dus ik behoeften naar zijn toegevoegd tijdens qPCR Mengen voorbereiding. IC toevoegen methode na extractie: Verdund ik door 100 keer met DNA verdunningsmiddel En toevoegen 1 μL naar binnen elk qPCR Mengen
systeem.
**Dit uitrusting doet niet bevatten ROX Referentie Verven. Als ROX referentie kleurstof is nodig voor de Echt Tijd PCR versterkers Dat Jij Zijn momenteel gebruik makend van, 50×ROX Referentie Verf (Cat.nr. 10200ES) is aanbevolen voor gebruik. In dit geval, de toegevoegd volume is 0,8 μL, als getoond in Tafel 1. Als gebruik makend van ander
merken van ROX producten, alstublieft refereren naar hun instructies voor ROX toevoeging. Als Nee ROX referentie kleurstof is vereist, de toegevoegd volume is 0 μL.
3）Sjablonen toevoegen
- Meng de qPCR-mix onder voldoende schudden, centrifugeer op lage snelheid en verzamel de resterende vloeistof uit de dop
naar de bodem van de buis.
- Voeg 20 toe μL qPCR-mix aan elke reageerbuis/well. Let op: voeg de bijbehorende qPCR-mix toe aan elke
monsterbuizen en voorkom dat u fouten bij het toevoegen maakt.
- Voeg sjablonen toe aan de buis/putjes die de qPCR-mix bevatten. Zie Tabel 4 voor het toevoegen van de sjablonen.
| Testmonsters | In elke buis of Goed … |
| TS | 20 μL qPCR-mix+20 μL Monsters na extractie |
| NTC | 20 μL qPCR-mix+20 μL DNA Verdunning buffer |
| NCS* | 20 μL qPCR-mix+20 μL Negatief monster na extractie* |
| STUKS | 20 μL qPCR-mix +20 μL Positief controle |
Tafel 4 Sjablonen toevoegen
*Wij adviseren om DNA-verdunningsbuffer (40619-E) te gebruiken als template van NCS voor de DNA-extractie.
**De totaal reactie volume in elk buis/put is 40 μL.
***Omslag de buis deksel of de bord filmen. Naar voorkomen beïnvloedend de fluorescentie signaal lezen, alstublieft nemen zorg niet naar markering de buis deksel of film
of zelfs wrijven de film herhaaldelijk met A schraper.
****Centrifuge de reactie buis of bord kort bij laag snelheid na sjablonen toevoegen. Na voldoende schudden En mengen, herhalen centrifuge
bij laag snelheid naar verzamelen de vloeistof van de deksel of muur naar de onderkant. Vermijd bubbels wanneer operatie. De basislijn zullen zijn beïnvloed als de mengen
is niet gemengd nou, dus dit stap is erg belangrijk naar A Goed experiment resultaat.
4) qPCR-programma-instellingen
- Programmabestand Instellingen
Voorbeeld (7500 Real-Time PCR System-instrument en Real-Time PCR Software v2.4):
Instrumenttype: 7500 (96 putten)
Experimenttype: Kwantificering-standaardcurve
Chemie: Taqman®-reagentia
Hellingsnelheid: Standaard (~2 uur om een run te voltooien)
- Doelkanaalinstellingen
In "Definiëren Doelen En Voorbeelden" van "Bord Instellen", creëren A Doel 1 kanaal (FAM), selecteren FAM als de verslaggeving fluorescentiegroep en MGB of geen als het blussen fluorescentie groep. Creëren A Doel 2 kanaal (VIC-gebied), selecteren de verslaggeving fluorescentie groep als VIC En de blussen fluorescentie groep als geen. In "Toewijzen Doelen En Voorbeelden" van "Bord Instellen", als Nee aanvullend ROX kleurstof is toegevoegd, selecteer "geen"; Als een aanvullend ROX is toegevoegd, selecteer
ROX.
- Standaard versterkingsprogramma-instellingen
| Serienummer | Reactiefase | Temperatuur | Tijd | Cyclus(en) |
| 1 | Initiële denaturatie | 95℃ | 5 mijn | 1 |
| 2 | Denaturatie | 95℃ | 15 sec |
45 |
| 3 | Gloeien/verlengen (fluorescentiesignaalverzameling) |
62℃ |
30 seconden |
Tabel 5 Standaard versterkingsprogramma-instellingen
- Basislijn- en drempelwaarde-instelling:
Beginsel van basislijn aanpassing: gebruik de automatisch basislijn algemeen. Als behoefte naar aanpassen in handmatig, kiezen de cyclus vóór de exponentiële groei periode als de startcyclus, en vermijd de fluctuatiezone van voorletter fluorescentie verzameling. Kies de cyclus die 1-2 cycli voor de Ct van het vroegste exponentiële amplificatiemonster ligt als de
eindpunt.
Beginsel van drempelwaarde aanpassing: gebruik de automatische drempel over het algemeen. Als u handmatig moet aanpassen, moet u de drempel zou moeten zijn set hoger dan de Negatief steekproef of de basislijn lawaai, zijn algemeen set de drempel in de laat
stadium van Voor elke tunnel is een exponentiële versterking, relatief onafhankelijke en geschikte drempelwaarde nodig.
5) Resultaat Analyse
- Resultaatbeoordeling voor PCS, NTC en NCS:
Als IC wordt toegevoegd: de specificatie van elk controlemonster moet zijn tevreden in Tabel 6:
| Controlemonster | FAM Signaal | VIC-signaal |
| STUKS | Ct < 40, en heeft een duidelijke versterkingscurve | Ct < 40 en heeft een duidelijke versterkingscurve |
| NTC | Ct ≥ 40 of geen duidelijke versterkingscurve | Ct < 40 en heeft een duidelijke versterkingscurve |
| NCS | Ct ≥ 40 of geen duidelijke versterkingscurve | Ct < 40 en heeft een duidelijke versterkingscurve |
Tafel 6 Resultaat oordeel van PC's, NTC En NCS
Als IC niet is toegevoegd: elk kwaliteitscontrolemonster moet voldoen aan de specificatie van de FAM-signaalkolom in Tabel 6, en geen
moet analyseren VIC-kanaal.
- Resultaatbeoordeling voor TS
Voorwaarde: Het is nodig om te bepalen of PC's, NTC en NCS de specificatie is geslaagd in tabel 6 voor TS Resultatenanalyse. Als het wordt aangenomen, kan ga naar de volgende stap. Zo niet voorbij, de TS resultaten kunnen niet zijn betrouwbaar, En
de reden moet worden onderzocht.
Als IC is toegevoegd: zoek de bijbehorende resultaten oordeel volgens de resultaatinformatie van FAM en VIC in Tabel 7:
| FAM Signaal | VIC-signaal | Resultaat oordeel |
| Ct<40 en heeft een duidelijke versterkingscurve | Ct<40 en heeft een duidelijke amplificatiecurve | Positief |
| Ct≥40 of geen duidelijke amplificatiecurve | Er bestaat een remming, de experiment moet herhaald worden | |
| Ct≥40 of geen duidelijke versterkingscurve | Ct<40 en heeft een duidelijke amplificatiecurve | Negatief |
| Ct≥40 of geen duidelijke amplificatiecurve | Er bestaat een remming, de experiment moet herhaald worden |
Tafel 7: Resultaat oordeel van TS (IK toegevoegd)
*Als daar is remming voor VIC signaal,behandeling is nodig naar elimineren de remmers of herhalen de test.
Als IC niet is toegevoegd: zoek de bijbehorende resultaten oordeel volgens de resultaatinformatie van FAM in Tabel 8 , en het is niet nodig om de VIC-signaal.
| FAM-signaal | Resultaat oordeel |
| Ct<40 en heeft een duidelijke amplificatiecurve | Positief |
| Ct≥40 of geen duidelijke amplificatiecurve | Negatief |
Tafel 8: Resultaat oordeel van TS (IK niet toegevoegd)
Notities
- Lees deze handleiding zorgvuldig door voordat u deze kit gebruikt. Het experiment moet op een gestandaardiseerde manier worden uitgevoerd, inclusief monsterbehandeling, voorbereiding van het reactiesysteem en monstertoevoeging.
- Voer de monstertoevoeging en de voorbereiding van de reagentia indien mogelijk op ijs uit.
- Vortex en meng goed voor elk reagens vóór gebruik.
- Werk alstublieft met labjassen en wegwerphandschoenen, uw veiligheid.
- Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
[1] Zhao F, Wang X, Li Y, Chen X, Geng Z, Zhang C.Effecten van voedingssupplementen met epigallocatechinegallaat op de vleeskwaliteit en de antioxidatieve capaciteit van spieren van vleeskuikens die aan acute hittestress worden blootgesteld. Animals (Basel). 2021;11(11):3296. Gepubliceerd op 18 november 2021. doi:10.3390/ani11113296(IF:2.752)
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.