Hieff Trans™ Liposomale transfectiereagens Veelgestelde vragen

(1) V: Kan serum aanwezig zijn bij de bereiding van een nucleïnezuurtransfectiereagenscomplex?

A: De aanwezigheid van serum heeft invloed op de vorming van liposomen. Het wordt aanbevolen om serumvrij medium (meestal MEM-medium) te gebruiken bij het bereiden van nucleïnezuurtransfectiereagenscomplexen.

(2) V: Kan het transfectiereagens worden ingevroren?

A: Nee. Dit reagens moet worden bewaard bij 2-8 ℃ en er moet voor worden gezorgd dat de dop niet herhaaldelijk en langdurig wordt geopend. Als de dop langdurig wordt geopend, kan dit oxidatie van de liposomen veroorzaken en de transfectie-efficiëntie beïnvloeden.

(3) V: Waar moet ik op letten bij het gebruik van Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent?

A: 1) Tijdens de transfectiebewerking is het beter dat de celconfluentie 80%-95% bereikt, en de specifieke plaatdichtheid wordt bepaald op basis van de situatie van de cellen;

2) Door gebruik te maken van DNA met een hoge zuiverheidsgraad kan een hogere transfectie-efficiëntie worden bereikt;

3) DNA en transfectiereagentia moeten worden verdund met serumvrij medium bij de bereiding van transfectiecomplexen;

4) Tijdens de transfectie kunnen geen antibiotica aan het medium worden toegevoegd;

5) De DNA-concentratie en de hoeveelheid kationisch liposomenreagens moeten worden geoptimaliseerd voor het eerste gebruik om de maximale transfectie-efficiëntie te verkrijgen. De verhouding van DNA tot transfectiereagens is over het algemeen wordt een verhouding van 1:2-1:3 aanbevolen.

(4) V: Moet het na transfectie worden beëindigd?

A: Niet nodig. Liposomencomplexen zijn 6 uur stabiel. Als het celmedium niet wordt gewijzigd voor transfectie, is het noodzakelijk om na 4 tot 6 uur over te stappen op een nieuw medium om de voedingsstoffen te garanderen die nodig zijn voor normale celgroei. Als het medium echter is gewijzigd voor transfectie, is het niet nodig om het medium te wijzigen na liposomentransfectie.

(5) V: Waar moet ik op letten als ik de transfectie-efficiëntie wil verbeteren?

A: a: De celdichtheid op het moment van transfectie bedraagt ​​90%-95%.

b: Gebruik tijdens de transfectie MEM-serumvrij medium voor verdunningen van nucleïnezuur en liposomen.

c: Het medium kan 4-6 uur na transfectie worden vervangen.

(6) V: Kan co-transfectie van DNA en siRNA worden uitgevoerd? Wat is het effect?

A: Co-transfectie kan worden uitgevoerd, maar het wordt aanbevolen om aparte transfectie uit te voeren, en DNA-transfectie moet 6 uur na siRNA worden uitgevoerd. Als ze samen worden uitgevoerd, zal de siRNA-transfectie-efficiëntie slechter zijn.

(7) V: Kan het transfectiereagens worden gebruikt voor lentivirale verpakkingstransfectie?

A: Lentivirale verpakking is mogelijk, maar de efficiëntie van lentivirale verpakking hangt niet noodzakelijkerwijs samen met de efficiëntie van transfectie, maar ook met de selectie van verpakkingsplasmiden en de verhouding tussen plasmiden.

(8) V: Kan Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent worden gebruikt voor de transfectie van suspensiecellen?

A: Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent kan worden gebruikt voor suspensieceltransfectie, zie Protocol voor details. Daarnaast hebben we ook een transfectiereagens gelanceerd dat specifiek is voor suspensiecellen (Cat.nr. 40805, Liposome nucleic acid transfection reagent voor suspensiecellen).

[1] Liu R, Yang J, Yao J, Zhao Z, He W, Su N, Zhang Z, Zhang C, Zhang Z, Cai H, Zhu L, Zhao Y, Quan S, Chen X, Yang Y. Optogenetische controle van RNA-functie en metabolisme met behulp van geconstrueerde lichtschakelbare RNA-bindende eiwitten. Nat Biotechnol. 2022 3 jan. doi: 10.1038/s41587-021-01112-1. Epub vóór druk. PMID: 34980910. (IF:54.908)

[2] Zhou J, Chen P, Wang H, Liu H, Li Y, Zhang Y, Wu Y, Paek C, Sun Z, Lei J, Yin L. Cas12a-varianten ontworpen voor een lager off-target-effect op het genoom door middel van strikte PAM-herkenning. Mol Ther. 2022 5 jan;30(1):244-255. doi: 10.1016/j.ymthe.2021.10.010. Epub 2021 20 okt. PMID: 34687846; PMCID: PMC8753454. (IF:11.454)

[3] Chen S, Cao X, Zhang J, Wu W, Zhang B, Zhao F.circVAMP3 drijft CAPRIN1-fasescheiding aan en remt hepatocellulair carcinoom door c-Myc-translatie te onderdrukken. Adv Sci (Weinh). 2022 mrt;9(8):e2103817. doi: 10.1002/advs.202103817. Epub 2022 24 jan. PMID: 35072355; PMCID: PMC8922094. (IF:16.808)

[4] Zhang Y, Yu X, Sun R, Min J, Tang X, Lin Z, Xie S, Li X, Lu S, Tian Z, Gu C, Teng L, Yang Y. Splicingfactor arginine/serine-rijk 8 bevordert maligniteit van multipel myeloom en botlaesie door alternatieve splicing van CACYBP en op exosomen gebaseerde cellulaire communicatie. Clin Transl Med. 2022 feb;12(2):e684. doi: 10.1002/ctm2.684. PMID: 35184390. (IF:11.492)

[5] Tang X, Deng Z, Ding P, Qiang W, Lu Y, Gao S, Hu Y, Yang Y, Du J, Gu C. Een nieuw eiwit gecodeerd door circHNRNPU bevordert de progressie van multipel myeloom door de micro-omgeving van het beenmerg en alternatieve splitsing te reguleren. J Exp Clin Kankeronderzoek. 8 maart 2022;41(1):85. doi: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID: 35260179. (IF:11.161)

[6] Hua Z, Wei R, Guo M, Lin Z, Yu X, Li X, Gu C, Yang Y. YTHDF2 bevordert de proliferatie van multipel myeloomcellen via de STAT5A/MAP2K2/p-ERK-as. Oncogene. 2022 mrt;41(10):1482-1491. doi: 10.1038/s41388-022-02191-3. Epub 2022 jan 24. PMID: 35075244. (IF:9.867)

[7] Liang Y, Lu Q, Li W, Zhang D, Zhang F, Zou Q, Chen L, Tong Y, Liu M, Wang S, Li W, Ren X, Xu P, Yang Z, Dong S, Zhang B, Huang Y, Li D, Wang H, Yu W. Reactivatie van tumorsuppressor bij borstkanker door enhancer-switching via NamiRNA-netwerk. Nucleic Acids Res. 2021 7 sep;49(15):8556-8572. doi: 10.1093/nar/gkab626. PMID: 34329471; PMCID: PMC8421228. (IF:16.9)

[8] Dai L, Dai Y, Han J, Huang Y, Wang L, Huang J, Zhou Z. Structureel inzicht in de rekrutering van het BRCA1-BARD1-complex naar beschadigd chromatine. Mol Cell. 2021 1 juli;81(13):2765-2777.e6. doi: 10.1016/j.molcel.2021.05.010. Epub 2021 7 juni. PMID: 34102105. (IF:17.97)

[9] Zhang K, Wang A, Zhong K, Qi S, Wei C, Shu X, Tu WY, Xu W, Xia C, Xiao Y, Chen A, Bai L, Zhang J, Luo B, Wang W, Shen C. UBQLN2-HSP70-as vermindert poly-Gly-Ala-aggregaten en verlicht gedragsdefecten in het C9ORF72-diermodel. Neuron. 2021 16 juni; 109 (12): 1949-1962.e6. doi: 10.1016 / j.neuron.2021.04.023. Epub 2021 14 mei. PMID: 33991504. (IF: 17.17)

[10] Liang Y, Lu Q, Li W, Zhang D, Zhang F, Zou Q, Chen L, Tong Y, Liu M, Wang S, Li W, Ren X, Xu P, Yang Z, Dong S, Zhang B, Huang Y, Li D, Wang H, Yu W. Reactivatie van tumorsuppressor bij borstkanker door enhancer-switching via NamiRNA-netwerk. Nucleic Acids Res. 2021 7 sep;49(15):8556-8572. doi: 10.1093/nar/gkab626. PMID: 34329471; PMCID: PMC8421228. (IF:16.9)

[11] Li T, Chen X, Qian Y, Shao J, Li X, Liu S, Zhu L, Zhao Y, Ye H, Yang Y. Een synthetisch BRET-gebaseerd optogenetisch apparaat voor pulserende transgeenexpressie die glucosehomeostase bij muizen mogelijk maakt. Nat Commun. 2021 27 jan;12(1):615. doi: 10.1038/s41467-021-20913-1. PMID: 33504786; PMCID: PMC7840992. (IF:14.92)

[12] Pan Y, He X, Li C, Li Y, Li W, Zhang H, Wang Y, Zhou G, Yang J, Li J, Qu J, Wang H, Gao Z, Shen Y, Li T, Hu H, Ma H. Neuronale activiteit rekruteert de CRTC1/CREB-as om transcriptieafhankelijke autofagie aan te drijven voor het handhaven van LTD in de late fase. Cell Rep. 2021 20 juli;36(3):109398. doi: 10.1016/j.celrep.2021.109398. PMID: 34289350. (IF:9.42)

[13] Liu H, Xing R, Ou Z, Zhao J, Hong G, Zhao TJ, Han Y, Chen Y. G-proteïne-gekoppelde receptor GPR17 remt glioomontwikkeling door polycomb repressief complex 1-gemedieerde ROS-productie te verhogen. Cell Death Dis. 2021 12 juni;12(6):610. doi: 10.1038/s41419-021-03897-0. PMID: 34120140; PMCID: PMC8197764. (IF:8.463)

[14] Fan Y, Wang J, Jin W, Zon Y, Xu Y, Wang Y, Liang X, Su D.CircNR3C2 bevordert HRD1-gemedieerd tumoronderdrukkend effect via het sponsen van miR-513a-3p bij triple-negatieve borstkanker. Mol Cancer. 2021 Feb 2;20(1):25. doi: 10.1186/s12943-021-01321-x. PMID: 33530981; PMCID: PMC7851937. (IF:27.403)

[15] Gu C, Wang Y, Zhang L, Qiao L, Sun S, Shao M, Tang X, Ding P, Tang C, Cao Y, Zhou Y, Guo M, Wei R, Li N, Xiao Y, Duan J, Yang Y. AHSA1 is een veelbelovend therapeutisch doelwit voor cellulaire proliferatie en resistentie tegen proteasoomremmers bij multipel myeloom. J Exp Clin Cancer Res. 2022 6 jan;41(1):11. doi: 10.1186/s13046-021-02220-1. PMID: 34991674; PMCID: PMC8734095. (IF:11.161)

[16] Luo Q, Wu X, Zhao P, Nan Y, Chang W, Zhu X, Su D, Liu Z. OTUD1 activeert caspase-onafhankelijke en caspase-afhankelijke apoptose door AIF-nucleaire translocatie en MCL1-afbraak te bevorderen. Adv Sci (Weinh). 2021 8 feb;8(8):2002874. doi: 10.1002/advs.202002874. PMID: 33898171; PMCID: PMC8061361. (IF:15.84)

[17] Luo Q, Wu X, Nan Y, Chang W, Zhao P, Zhang Y, Su D, Liu Z. TRIM32/USP11 balanceert ARID1A-stabiliteit en de oncogene/tumor-onderdrukkende status van plaveiselcelcarcinoom. Cell Rep. 2020 7 jan;30(1):98-111.e5. doi: 10.1016/j.celrep.2019.12.017. PMID: 31914402. (IF:9.42)

[18] Sun X, Peng X, Cao Y, Zhou Y, Sun Y. ADNP bevordert neurale differentiatie door Wnt/β-catenine-signalering te moduleren. Nat Commun. 12 juni 2020;11(1):2984. doi: 10.1038/s41467-020-16799-0. PMID: 32533114; PMCID: PMC7293280. (IF:14.911)

[19] Yang X, Wang H, Xie E, Tang B, Mu Q, Song Z, Chen J, Wang F, Min J. Herprogrammering van ERBB3 en ERK-signalering verleent resistentie tegen FGFR1-remming bij gastro-intestinale kanker met een ERBB3-E928G-mutatie. Protein Cell. 2020 dec;11(12):915-920. doi: 10.1007/s13238-020-00749-z. PMID: 32632529; PMCID: PMC7719122. (IF:14.872)

[20] Chen, T., Chen, Y., Chen, H. et al. Dual-enzyme-propelled unbounded DNA walking nanomachine voor intracellulaire beeldvorming van laag-geëxprimeerde microRNA. Nano Res. 12, 1055–1060 (2019). https://doi.org/10.1007/s12274-019-2344-5 (IF:8.21)

[21] Zhang X, Qi Z, Yin H, Yang G. Interactie tussen p53 en Ras-signalering controleert cisplatineresistentie via HDAC4- en HIF-1α-gemedieerde regulatie van apoptose en autofagie. Theranostics. 2019 30 jan;9(4):1096-1114. doi: 10.7150/thno.29673. PMID: 30867818; PMCID: PMC6401400. (IF:8.12)

[22] Zou Y, Wang A, Shi M, Chen X, Liu R, Li T, Zhang C, Zhang Z, Zhu L, Ju Z, Loscalzo J, Yang Y, Zhao Y. Analyse van redoxlandschappen en dynamiek in levende cellen en in vivo met behulp van genetisch gecodeerde fluorescerende sensoren. Nat Protoc. 2018 okt;13(10):2362-2386. doi: 10.1038/s41596-018-0042-5. PMID: 30258175; PMCID: PMC6714056. (IF:13.49)

[23] Zhang K, Zhao X, Chen X, Wei Y, Du W, Wang Y, Liu L, Zhao W, Han Z, Kong D, Zhao Q, Guo Z, Han Z, Liu N, Ma F, Li Z. Verbeterde therapeutische effecten van mesenchymale stamcel-afgeleide exosomen met een injecteerbare hydrogel voor de behandeling van ischemie van de achterpoot. ACS Appl Mater Interfaces. 2018 12 sep;10(36):30081-30091. doi: 10.1021/acsami.8b08449. Epub 2018 29 aug. PMID: 30118197. (IF:8.09)

[24] Hao H, Hu S, Chen H, Bu D, Zhu L, Xu C, Chu F, Huo X, Tang Y, Sun X, Ding BS, Liu DP, Hu S, Wang M. Verlies van endotheliale CXCR7 verstoort vasculaire homeostase en hartremodellering na een hartinfarct: implicaties voor de ontdekking van cardiovasculaire geneesmiddelen. Circulation. 28 maart 2017; 135 (13): 1253-1264. doi: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.116.023027. Epub 2 februari 2017. PMID: 28154007. (IF: 18.881)