(1) V: Wat is het verschil tussen DNA-transfectie en siRNA-transfectie?

A: 1. Omdat er slechts 20 basenparen zijn, is siRNA veel kleiner dan DNA, met duizenden of zelfs meer dan 10.000 basenparen.

2. De transfectiereagentia en -methoden die worden gebruikt om DNA te transfecteren, zijn niet geschikt voor de transfectie van siRNA.

3. Bij siRNA-transfectie gelden strengere eisen voor de cytotoxiciteit van transfectiereagentia dan bij DNA-transfectie.

(2) V: Moet het transfectiereagens na transfectie worden vervangen?

A: Voor de gemiddelde verandering kunnen twee situaties worden onderscheiden:

1. Als er vóór de transfectie geen mediumwisseling heeft plaatsgevonden, moet het medium ongeveer 6 uur na de transfectie worden vervangen om de voedingsstoffen te garanderen die nodig zijn voor de celgroei;

2. Als er een verandering is vóór de transfectie Het medium kan zoals gebruikelijk worden vervangen wanneer het medium een ​​voedingstekort heeft.

(3) Vraag: Wat is de efficiëntie van het PEI-transfectiereagens voor het transfecteren van siRNA en plasmide?

A: Dit PEI-transfectiereagens is speciaal ontwikkeld voor siRNA. Plasmidetransfectie wordt niet aanbevolen.

(4) V: Kan het transfectiereagens worden ingevroren?

A: Niet invriezen, omdat het transfectiereagens een PEI-kationisch transfectiereagens is. Invriezen bij lage temperatuur zal de activiteit van het PEI-transfectiereagens vernietigen. Daarom is het het beste om het op 4 graden te bewaren om de beste transfectie-efficiëntie te behouden.

(5) V: Hoe kan de transfectie-efficiëntie worden verbeterd?

A: a: Dichtheid van cellen op het moment van transfectie, 30%-50%.

b: Opti-MEM serumvrij medium moet worden gebruikt voor siRNA- en liposomenverdunning tijdens transfectie.

c: Het medium kan 4-6 uur na transfectie worden vervangen.

[1] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanismen van senescentie-gerelateerde NKG2D-ligandvrijgave en immuunontsnapping geïnduceerd door chemotherapie in neuroblastoomcellen. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Gepubliceerd 2022 maart 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)

[2] Cui B, Wang Y, Jin J, et al. Resveratrol behandelt UVB-geïnduceerde fotoveroudering door anti-MMP-expressie, via ontstekingsremmende, antioxiderende en anti-apoptotische eigenschappen, en behandelt fotoveroudering door VEGF-B-expressie te verhogen. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:6037303. Gepubliceerd op 4 januari 2022. doi:10.1155/2022/6037303(IF:6.543)

[3] Liu Y, Zeng Y, Si HB, Tang L, Xie HQ, Shen B. Exosomen afgeleid van uit menselijke urine afkomstige stamcellen die miR-140-5p overexpressie vertonen, verlichten knieartrose door downregulatie van VEGFA in een rattenmodel. Am J Sports Med. 2022;50(4):1088-1105. doi:10.1177/03635465221073991(IF:6.203)

[4] Zhang ZD, Wen B, Li DJ, et al. AKT serine/threonine kinase 2-gemedieerde fosforylering van fascin threonine 403 reguleert de progressie van slokdarmkanker. Int J Biochem Cell Biol. 2022;145:106188. doi:10.1016/j.biocel.2022.106188(IF:5.085)

[5] Tan S, Zhou Y, Zhao H, et al. Uitgebreide transcriptoomanalyse van de hypothalamus onthult genen die verband houden met stoornissen in de geslachtsontwikkeling bij varkens. J Steroid Biochem Mol Biol. 2021;210:105875. doi:10.1016/j.jsbmb.2021.105875(IF:4.294)

[6] Niu M, Yi M, Dong B, Luo S, Wu K. Upregulatie van de STAT1-CCL5-as is een biomarker van darmkanker en bevordert de proliferatie van darmkankercellen. Ann Transl Med. 2020;8(15):951. doi:10.21037/atm-20-4428(IF:3.297)