Beschrijving
Hieff Trans™ universeel transfectiereagens is een multifunctioneel, handig en efficiënt liposomentransfectiereagens dat is ontwikkeld op basis van de nieuwste nanotechnologie. Het is geschikt voor de transfectie van DNA, RNA en oligonucleotiden, inclusief primaire cellen. Moeilijk te transfecteren cellen, inclusief neuronen, hebben een hoge transfectie-efficiëntie. De unieke formule maakt het mogelijk om het direct aan het medium toe te voegen en de aanwezigheid van serum heeft geen invloed op de transfectie-efficiëntie, wat de schade aan cellen veroorzaakt door serumverwijdering vermindert. Het is niet nodig om het nucleïnezuur-transfectiereagenscomplex te verwijderen of te vervangen door vers medium na transfectie en het verse medium kan ook na 4-6 uur worden vervangen, afhankelijk van de voedingsstatus van de cellen.
Productcomponenten
| Onderdeelnummer | Componenten | Cat#/Maat | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universeel-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
| 40808-B | Universeel-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
Verzending en opslag
Het product wordt geleverd met ijspakketten en kan een jaar lang worden bewaard bij 2-8℃. Niet invriezen!
Voorzorgsmaatregelen
1) Tijdens de transfectiebewerking is het beter dat de celconfluentie 70%-90% bereikt, en de specifieke plaatdichtheid wordt bepaald op basis van de situatie van de cellen.
2) Voor de bereiding van transfectiecomplexen is verdunning van DNA en transfectiereagentia in serumvrij medium nodig.
3) Tijdens de transfectie mogen er geen antibiotica aan het medium worden toegevoegd.
4) Het gebruik van DNA of RNA met een hoge zuiverheidsgraad zorgt voor een hogere transfectie-efficiëntie. Endotoxinen in plasmiden zijn de vijand van transfectie.
5) Bewaar bij een temperatuur van 2-8ºC. Let op dat u het deksel niet gedurende langere tijd herhaaldelijk opent.
6) De nucleïnezuurconcentratie en het reagensvolume moeten voor het eerste gebruik worden geoptimaliseerd om een maximale transfectie-efficiëntie te verkrijgen.
7) Dit product is uitsluitend bedoeld voor wetenschappelijk onderzoek!
Instructies
Transfectie van DNA
[Opmerking] De hoeveelheid transfectiereagens die wordt gebruikt, wordt beïnvloed door het celtype en andere experimentele omstandigheden. Het wordt aanbevolen om een gradiënt in te stellen om de optimale hoeveelheid gebruik voor de eerste keer te optimaliseren.
1) De cellen worden geplateerd en de celconfluentie moet 70%-90% bedragen op het moment van transfectie.
2) Verdun de Universal-B-oplossing met Opti-MEM-medium volgens onderstaande tabel en meng voorzichtig.
3) Verdun het DNA met Opti-MEM medium om een DNA-premix te verkrijgen. Voeg vervolgens de Universal-A-oplossing toe en meng voorzichtig om verdund DNA te verkrijgen.
4) Voeg het verdunde DNA toe aan de verdunde Universal-B-oplossing (verhouding 1:1).
5) Laat 5 minuten bij kamertemperatuur incuberen.
6) Voeg het DNA-liposoomcomplex druppelsgewijs toe aan de cellen en meng voorzichtig.
7) Incubeer bij 37°C, 5% CO2 in een broedstoof gedurende 48-96 uur tot de genexpressieanalyse.
Transfectie van siRNA
De procedure voor transfectie van siRNA is dezelfde als die voor DNA-transfectie, behalve dat Universal-A-oplossing (stap 3) niet hoeft te worden toegevoegd bij het verdunnen van siRNA.
Tabel 1 De hoeveelheid transfectie in verschillende celkweekvaten (alleen ter referentie)
| Celcultuurvaten | 96-putten | 24-putten | 6-puts | |
| Aanhangende cellen | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Verdun de Universal-B-oplossing met Opti-MEM-medium volgens onderstaande tabel en meng voorzichtig. | Opti-MEM-medium | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universeel-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Verdun het DNA met Opti-MEM medium om een DNA-premix te verkrijgen. Voeg vervolgens de Universal-A-oplossing toe en meng voorzichtig om verdund DNA te verkrijgen. | Opti-MEM-medium | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universeel-A (2 μL/μg DNA) | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Voeg het verdunde DNA toe aan de verdunde Universal-B-oplossing (verhouding 1:1). | Verdunde DNA-oplossing | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universeel-B | 5 μL | 25 μL | 125 μL | |
| Laat 5 minuten bij kamertemperatuur incuberen. | ||||
| DNA-Liposoom Complex | Componenten (elke put) | 96-putten | 24-putten | 6-puts |
| Opti-MEM | 10 μL | 50 μL | 250 μL | |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0.5 μg | 2,5 μg | |
| Universeel-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Universeel-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Voeg het DNA-liposoomcomplex druppelsgewijs toe aan de cellen en meng voorzichtig. | DNA-Liposoom Complex | 10 μL | 50 μL | 250 μL |
[Opmerking] De hoeveelheid die in de tabel wordt gebruikt, is alleen ter referentie. De specifieke hoeveelheid DNA en Universal-B-oplossing die wordt gebruikt, moet worden geoptimaliseerd op basis van het celtype en andere experimentele omstandigheden. Het wordt aanbevolen om de verhouding tussen 1:0,5 en 1:5 te houden.
(1) V: Kan serum aanwezig zijn bij de bereiding van een nucleïnezuurtransfectiereagenscomplex?
A: De aanwezigheid van serum heeft invloed op de vorming van liposomen. Het wordt aanbevolen om serumvrij medium (meestal MEM-medium) te gebruiken bij het bereiden van nucleïnezuurtransfectiereagenscomplexen.
(2) V: Kan het transfectiereagens worden ingevroren?
A: Dit reagens moet worden bewaard bij 2-8°C en het is niet nodig om de dop herhaaldelijk en langdurig te openen. Als de dop langdurig wordt geopend, kan dit oxidatie van de liposomen veroorzaken en de transfectie-efficiëntie beïnvloeden.
(3) V: Waar moet ik op letten bij het gebruik van Hieff Trans™ Universal Transfection Reagent?
A: 1) Tijdens de transfectiebewerking is het beter dat de celconfluentie 70%-90% bereikt, en de specifieke plaatdichtheid wordt bepaald op basis van de situatie van de cellen.
2) Voor de bereiding van transfectiecomplexen is verdunning van DNA en transfectiereagentia in serumvrij medium nodig.
3) Tijdens de transfectie mogen er geen antibiotica aan het medium worden toegevoegd.
4) Het gebruik van DNA of RNA met een hoge zuiverheidsgraad zorgt voor een hogere transfectie-efficiëntie. Endotoxinen in plasmiden zijn de vijand van transfectie.
5) Bewaar bij een temperatuur van 2-8ºC. Let op dat u het deksel niet gedurende langere tijd herhaaldelijk opent.
6) De nucleïnezuurconcentratie en het reagensvolume moeten voor het eerste gebruik worden geoptimaliseerd om de hoogste transfectie-efficiëntie te verkrijgen.
(4) V: Moet het na transfectie worden beëindigd?
A: Niet nodig. Het is niet nodig om het nucleïnezuur-transfectiereagenscomplex te verwijderen of te vervangen door vers medium na transfectie, en het verse medium kan ook na 4-6 uur worden vervangen, afhankelijk van de voedingsstatus van de cellen.
(5) V: Kan het transfectiereagens worden gebruikt voor de transfectie van virale vectorverpakkingen?
A: Jazeker.De efficiëntie van virale vectorverpakking hangt niet noodzakelijkerwijs samen met de efficiëntie van de transfectie, maar ook met de selectie van verpakkingsplasmiden en de verhouding tussen plasmiden.
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.