Linearized Polyethyleneimine PEI 25000 Transfection Reagent is een sterk geladen kationisch polymeer dat gemakkelijk negatief geladen nucleïnezuurmoleculen bindt, een complex vormt en het complex de cel laat binnendringen. Het transfectiereagens is een transiënt transfectiereagens met lage cytotoxiciteit, hoge transfectie-efficiëntie en hoge genexpressie-efficiëntie in cellen zoals HEK293 en CHO. Het is geverifieerd dat het lineaire PEI-transfectiereagens breed toepasbaar is op een verscheidenheid aan cellijnen, waaronder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 en HeLa-cellen, enz. Het reagens is compatibel met serumbevattende media en kan nucleïnezuren efficiënt in cellen introduceren.

Specificatie

Verzending en opslag

Het product wordt verzonden bij kamertemperatuur en het poeder kan twee jaar bewaard worden bij 2-8 ºC. De voorraadoplossing wordt 3 maanden bewaard bij 2-8 ºC.

Voorzorgsmaatregelen


1) Nadat de bereide PEI-oplossing uit de koelkast (-20 ºC) is gehaald en is ontdooid, kan deze in een koelkast van 4 ºC worden bewaard en mag deze niet opnieuw worden ingevroren.

2) Voor de meeste cellen kan 3,0 μL PEI-transfectiereagens per 1 μg DNA een hoge transfectie-efficiëntie bereiken. U kunt ook proberen om 1,5~4 μL volume lineair PEI-transfectiereagens per 1 μg DNA te gebruiken voor optimalisatie.

3) Draag voor uw eigen veiligheid en gezondheid een laboratoriumjas, wegwerphandschoenen en een afzuigkap tijdens de operatie.

4) Dit product is uitsluitend bestemd voor wetenschappelijk onderzoek en niet voor menselijk gebruik.

Bereiding van de voorraadoplossing (1 mg/ml)


1. Materialen

PEI 25000, Milli-Q® water/water voor injectie (WFI) of soortgelijk biologisch water, 12 mol/l zoutzuur (HCl), 10 mol/l natriumhydroxide (NaOH), wegwerpbaar 0,1~0,2 μm PES vacuümsteriel filter, steriele HDPE of polypropyleen opslagfles.

2. Bereid de voorraadoplossing (1 mg/ml)

1) Voeg in een glazen beker van 1 l 1 g PEI 25000-poeder toe aan 900 ml Milli-Q® ultrapuur water of ander gelijkwaardig biologisch water en roer gelijkmatig op een magneetroerder om een ​​kleine werveling te creëren.

2) Voeg druppelsgewijs zoutzuur (12 mol/L) toe terwijl u roert om de pH aan te passen tot pH<2,0.

3) Bedek de bovenkant van de beker en roer gedurende 3 uur totdat het mengsel volledig is opgelost. Zorg ervoor dat de pH tijdens het hele proces < 2,0 blijft.

【Let op】: Er kunnen kleine vezelachtige deeltjes aanwezig zijn die niet opgelost kunnen worden. Dit is normaal.

4) Voeg druppelsgewijs NaOH (10 mol/L) toe terwijl u roert om de pH aan te passen totdat deze 6,9 ​​~ 7,1 bereikt.

5) Giet de oplossing in een maatcilinder en voeg water toe tot u 1 liter hebt.

6) Filter en steriliseer met een wegwerpbaar 0,1-0,2 µm PES vacuümfilter om een ​​voorraadoplossing van 1 mg/ml te verkrijgen.

7) Verdeel indien nodig en bewaar bij -20 °C. Het is dan 1 jaar houdbaar.

【Opmerking】: Na het ontdooien van de bewaaroplossing kan deze bij 4 °C worden bewaard en is deze 2 weken stabiel, maar mag niet opnieuw worden ingevroren.

Transfectieprocedure (met een 6-wellsplaat als voorbeeld)


1. Celinoculatie: Om de transfectie-efficiëntie te verbeteren, wordt aanbevolen om de cellen één dag vóór de transfectie te inoculeren. De celdichtheid op het moment van transfectie bedraagt ​​bij voorkeur 70%~80%.

2. Bereid het DNA-PEI-complex voor: Bereid het DNA-PEI-nucleïnezuur-transfectiereagenscomplex voor volgens het volgende systeem:

1) Verdun voor elke celput 2 μg doel-DNA met 100 μl serumvrij medium en meng grondig om een ​​DNA-verdunning te vormen.

[Opmerking]: Opti-MEM of ddH2O wordt aanbevolen voor serumvrije verdunningsmiddelen

2) Voeg onmiddellijk 5 μL PEI 25000-transfectiereagens toe aan 100 μL DNA-verdunningsmiddel, vortex gedurende 10 seconden en meng goed.

3) Incubeer gedurende 10-25 min bij kamertemperatuur om een ​​DNA-PEI kationisch nucleïnezuurtransfectiereagenscomplex te vormen.

3. Getransfecteerde cellen:

1) Verwijder tijdens de complexvorming het celgroeimedium en voeg 2 ml vers, voorverwarmd, compleet medium toe aan elke well.

2) Voeg 100 μL DNA-PEI nucleïnezuur-PEI complex rechtstreeks toe aan de cellen, schud de kweekplaat en meng voorzichtig.

3) Kweek in een 37°C, 5% CO2 incubator, en de expressie van het transgen kan al 7 uur na transfectie worden gedetecteerd. Bepaal zelf de geschikte testtijd.

4. Continue rotatiescreening (optioneel)

24 uur na transfectie werden de cellen gesubkweekt in vers groeimedium (verdun de cellen meer dan 10 keer) en 's nachts geïncubeerd bij 37 °C in een 5% CO2-incubator. De volgende dag werd een screeningmedicijn toegevoegd dat overeenkwam met het gen voor transfectieresistentie. Geneesmiddelresistente klonen kunnen in ongeveer 1 tot 2 weken worden gescreend. Gedurende deze periode moet het groeimedium met de screeningmedicijnen regelmatig worden vervangen.

Transfectiedosering voor verschillende celkweekvaten (alleen ter referentie):