A tecnologia de amplificação isotérmica de ácido nucleico pode ser categorizada em muitos tipos com base em diferentes princípios de amplificação. O método mais comum e amplamente aplicado é a tecnologia de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) desenvolvida por acadêmicos japoneses, incluindo Notomi, em 2000. A característica técnica do LAMP é o design de quatro primers visando seis regiões no gene alvo, utilizando uma polimerase de DNA Bst do tipo de deslocamento de fita para conduzir a reação de amplificação a uma temperatura constante de 60~65°C. Isso atinge um 109-1010- amplificação de vezes em 15-60 minutos.
A Bst DNA polymerase é a enzima central na tecnologia de amplificação isotérmica LAMP. Ela possui forte estabilidade térmica, atividade de deslocamento de fita e atividade de polimerase, permitindo amplificação rápida, eficiente e específica do molde sob condições de temperatura constante. Ao contrário da PCR, que requer ciclos de desnaturação térmica para amplificação, todo o experimento LAMP pode ser concluído em uma hora sem a necessidade de tais ciclos.
Vantagens do produto
Enzima sem glicerol, adequada para liofilização
Transporte em temperatura ambiente, reduzindo custos
Forte atividade de deslocamento de fios, sensível e estável
Reidratação rápida, fácil de operar
Destaques do desempenho
01 Aplicação do Método de Corante Fluorescente
1、Alta sensibilidade e boa especificidade
No sistema de amplificação de corante fluorescente RT-LAMP, o desempenho de amplificação do bolo de pó liofilizado 14405ES é consistente com o da enzima Bst líquida (incluindo glicerol e sem glicerol), e ambos podem detectar 100% a uma sensibilidade de 50 cópias/T. A especificidade é boa, sem detecção em 48 poços de NTC (Controle de modelo negativo).
2、Boa estabilidade térmica acelerada
No sistema de amplificação de corante fluorescente RT-LAMP, o pó liofilizado foi submetido a tratamentos de armazenamento a 45°C por 7 dias, 45°C por 15 dias e temperatura ambiente por 19 dias, respectivamente. Após a aceleração térmica, o desempenho do produto permaneceu consistente com o da versão líquida da enzima Bst sem glicerol, e nenhum pico foi observado no NTC (Controle de Molde Negativo).
3、Suporta recongelamento após aceleração
No sistema de amplificação de corante fluorescente RT-LAMP, o pó liofilizado foi submetido a tratamentos de armazenamento a 45°C por 7 dias e 45°C por 15 dias, respectivamente. O pó liofilizado após o tratamento de aceleração térmica foi então submetido a uma segunda rodada de liofilização (incluindo enzima única e reagentes RT-LAMP). Os experimentos mostram que após o tratamento acelerado e a segunda liofilização, o desempenho do produto permanece consistente com o da versão líquida da enzima Bst sem glicerol, e nenhum pico foi observado no NTC (Controle de Molde Negativo). A estabilidade do produto é boa, suportando liofilização secundária e aceleração após liofilização secundária.
02 Aplicação do Método Colorimétrico de pH
1、Alta sensibilidade e boa especificidade
No sistema de amplificação colorimétrica de pH RT-LAMP, a sensibilidade de amplificação do bolo de pó liofilizado 14405ES pode atingir 50 cópias/T (taxa de detecção de 100%) e a especificidade é boa, sem detecção em 24 poços de NTC (Controle de modelo negativo).
2、Boa estabilidade térmica acelerada
No sistema de amplificação colorimétrica de pH RT-LAMP, a estabilidade acelerada termicamente do pó liofilizado 14405ES foi investigada a 45°C por 15 dias, a estabilidade após liofilização secundária após aceleração (reidratação após aceleração a 45°C por 7 dias) e a estabilidade de armazenamento após reidratação (armazenado a -20°C por 7 dias após reidratação). Os experimentos indicam que o produto 14405ES tem boa estabilidade, sem impacto no desempenho do produto após aceleração térmica, e suporta liofilização secundária após aceleração.
Recomendações de produtos em destaque
| Tipo de produto | Função do produto | Nome do produto | Número do item |
| Mistura RT-LAMP | Corante fluorescente | RT-LÂMPADA Tingir Ensaio Kit (UDG) Mais) | 13762ES |
| Indicador de pH | RT-LÂMPADA pH Confidencial Corante Kit | 13906ES | |
| Indicador de pH liofilizável | RT-LÂMPADA pH Confidencial Tingir Cromogênico Versão Liofilizável Kit | 13920ES | |
| Enzima Bst | Glicerol | Hieff® BST-Série Mais ADN Polimerase (40 U/μL) | 14402ES |
| Sem glicerol | Liofilizado BST-Série Mais ADN Polimerase (60 U/μL (sem glicerol) | 14405ES | |
| Tampão | Buffer básico (sem corantes, etc.) | 10× Hieff® BST-Série Mais ADN Polimerase Tampão | 15441ES |