Nos últimos anos, com o rápido desenvolvimento das técnicas de biologia molecular, métodos de diagnóstico baseados em ácido nucleico foram amplamente estabelecidos e amplamente aplicados em testes laboratoriais de doenças humanas. Comparada a outras técnicas de amplificação de ácido nucleico, a amplificação isotérmica oferece as vantagens de ser rápida, eficiente e específica, e não requer equipamento especializado. Portanto, desde seu surgimento, ela tem sido considerada por muitos estudiosos como um método de detecção que poderia potencialmente rivalizar com a PCR.

Como resultado, acredita-se que o desenvolvimento e a aplicação de instrumentos e kits de diagnóstico baseados na tecnologia de amplificação isotérmica representarão uma nova direção para os testes no ponto de atendimento (POCT) em diagnósticos moleculares.

Introdução aos princípios das principais tecnologias de amplificação isotérmica

1、Amplificação isotérmica mediada por loop

(LAMP) Tecnologia

Princípio:A amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) utiliza a DNA polimerase Bst, que tem atividade de deslocamento de fita. Ela projeta quatro tipos de primers específicos visando seis regiões do gene alvo, permitindo amplificação eficiente, rápida e específica da sequência alvo sob condições isotérmicas. A amplificação pode ser conduzida a uma temperatura constante de 60-65°C e, em 15-60 minutos, uma amplificação de ácido nucleico de 10⁹ para 10¹⁰ vezes podem ser alcançados.

Vantagens e aplicações:Devido a sua reação rápida, alta especificidade, equipamento simples e fácil de operar e resultados fáceis de interpretar, a amplificação isotérmica tem sido aplicada na detecção de bactérias patogênicas, parasitas, vírus, doenças e produtos geneticamente modificados. Também é esperado que seja amplamente utilizado em diagnóstico clínico de doenças infecciosas, monitoramento ambiental, segurança alimentar e outros campos. Tornou-se um método ideal adequado para testes moleculares no ponto de atendimento (POCT) plataformas.

Classificação:Os métodos de detecção de LAMP são classificados em vários tipos, incluindo turbidimetria, métodos de indicadores de pH, métodos de corantes fluorescentes (como NHB, calceína, SYBR Green, Syto, etc.) e métodos de sonda fluorescente.

2、Tecnologia de amplificação de polimerase recombinante (RPA)

Princípio:A enzima recombinase, quando ligada a primers, forma um complexo proteína-DNA que pode procurar sequências homólogas dentro do DNA fita dupla. Uma vez que os primers localizam as sequências homólogas, ocorre uma reação de troca de fita, levando à formação e início da síntese de DNA, que amplifica exponencialmente a região alvo no molde. A fita de DNA deslocada se liga à proteína de ligação de fita simples (SSB) para evitar deslocamento adicional. Neste sistema, um evento de síntese é iniciado por dois primers opostos, contando principalmente com as atividades da recombinase, enzima Bsu e proteína SSB. A tecnologia pode atingir a detecção rápida do alvo de interesse dentro de 10-30 minutos em temperaturas que variam de 37 a 42 °C.

Vantagens e aplicações:A RPA se orgulha alta sensibilidade, forte especificidade, baixa dependência de equipamento especializado, e a capacidade de integrar vários formatos de detecção. É particularmente adequado para testes de ponto de atendimento no nível de base e em ambientes de campo. O RPA pode ser amplamente aplicado em diagnósticos in vitro, doenças animais, segurança alimentar, biossegurança, agricultura e outros campos.

Classificação:Os métodos de detecção de RPA são categorizados em vários tipos, incluindo eletroforese em gel, método de sonda EXO, método de sonda Fpg, vareta de fluxo lateral (LF-RPA) e análise de floculação, entre outros.

Apresentação do desempenho do produto

01 Reagentes RT-LAMP de corantes sensíveis ao pH

O corante sensível ao pH RT-LAMP usa um corante visual como um indicador sensível, sob condições isotérmicas de 60-65℃, para completar a amplificação de ácido nucleico de RNA de uma etapa usando um banho de água de temperatura constante ou uma máquina de PCR padrão. Em apenas 30 minutos, a mudança de cor após a reação pode ser usada para determinar se uma infecção por patógeno está presente, com resultados mais intuitivos (positivo é amarelo-alaranjado, negativo é magenta). Este método é adequado para testes rápidos de grandes populações.

Produtos recomendados:

Kit de corante sensível ao pH RT-LAMP (13906ES)
RT-LAMP pH Sensitive Dye Versão Cromogênica Kit Liofilizável (13920ES)

Apresentação de desempenho:

1.Guia de seleção de mistura RT-LAMP/RPA

Classificação do produto	Mistura RT-LAMP			Mistura de RPA
Nome do produto	Kit de ensaio de corante RT-LAMP (UDG plus)	Kit de corante sensível ao pH RT-LAMP	RT-LAMP pH Sensitive Dye Versão Cromogênica Kit Liofilizável	Amplificador de fusível rápido
Número do item do produto	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Categoria do produto	Corante fluorescente	Corante sensível ao pH	Corante sensível ao pH	Sonda
Componentes do produto	2 componentes Tampão、Mistura de enzimas	3 componentes Tampão, enzima RT, enzima Bst	4 componentes Tampão、Enzima RT、Enzima Bst、Lioprotetor	4 componentes Tampão、Mistura de enzimas、Acetato de magnésio
Liofilização Suportada	Não	Sim, sem Lioprotetor	Sim, contendo lioprotetor	Não

2.Guia de seleção de enzimas LAMP/RT-LAMP

Classificação do produto	Enzima Bst		Transcriptase reversa		Enzima UDG
Nome do produto	BST Mais	Bst Plus liofilizado	Ⅲ Transcriptase reversa	III Transcriptase Reversa, Sem glicerol	UDG	UDG, sem glicerol
Número do item do produto	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Atividade enzimática	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
Componentes do produto	3 componentes	2 componentes	2 componentes	componente único	solteiro- componente	componente único
Liofilização Suportada	Não	Sim	Não	Sim	Não	Sim

3、Guia de seleção de enzimas RPA

Classificação do produto	Bsu	T4 X	T4 E	SSB	CK	EXO
Nome do produto	Bsu	T4 UVSX	T4 UVSY	po 32	Creatina Quinase	Exonuclease III
Número do item do produto	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Atividade enzimática	5 U/μL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 U/μL
Componentes do produto	componente único	componente único	componente único	componente único	componente único	2 componentes
Liofilização Suportada	Não	Não	Não	Não	Não	Não