----Fundo limpo, padrões de banda estáveis, tamanhos precisos
Marcadores de DNA são uma combinação de fragmentos de DNA com diferentes pesos moleculares. Seu uso primário é comigrar com o DNA da amostra em eletroforese em gel de agarose para separar as moléculas de DNA. Comparando o tamanho e o brilho das bandas da amostra com as do Marcador de DNA, pode-se estimar aproximadamente o peso molecular e a concentração do DNA da amostra em solução. YEASEN Os marcadores de DNA cobrem uma faixa de peso molecular de 100 pb a 15 kb, atendendo às necessidades da maioria dos experimentos.
Características do produto
- Forte estabilidade, pode ser armazenado em temperatura ambiente por 3-6 meses;
- Fundo limpo, padrões de banda estáveis e tamanhos precisos;
- Contém bandas de referência com concentrações conhecidas para fácil posicionamento e análise semiquantitativa;
- Inclui tampão de carga para eletroforese direta, prático e rápido;
- Vem com um buffer de carregamento 5× para carregamento de amostra.
Diagrama de Eletroforese
Pontos de atenção
- Método de armazenamento: Armazenamento estável em temperatura ambiente por 3 a 6 meses; para períodos mais longos, armazene a 4°C ou -20°C.
- O marcador de DNA é adequado para analisar bandas de DNA em eletroforese em gel de agarose e não é recomendado para uso em eletroforese em gel de poliacrilamida.
- Seleção da concentração do gel e da solução tampão:
| Concentração de Agarose | Faixa de separação efetiva (pb) | Buffer recomendado |
| 0,5% | 2.000-50.000 | 1×TAE |
| 0,8% | 800-10.000 | 1×TAE |
| 1,0% | 400-8.000 | 1×TAE |
| 1,2% | 300-7.000 | 1×TAE |
| 1,5% | 200-3.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 2,0% | 100-2.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 3,0% | 25-1.000 | 0,5×TBE |
【Observação】: Para fragmentos grandes, escolha um gel de baixa concentração e use um sistema tampão TAE para eletroforese; para fragmentos pequenos, escolha um gel de alta concentração e use um sistema tampão TBE para eletroforese.
- Seleção de Colorações de Ácido Nucleico:
EB (Ethidium Bromide) é um corante fluorescente altamente sensível com um comprimento de onda de excitação máximo de 302 nm, que pode ser usado para observar ácidos nucleicos em géis de agarose e poliacrilamida. EB intercala com as bases em ácidos nucleicos e é conhecido por ser tóxico.
YeaRed (Cat#10202ES76) e YeaGreen (Cat#10204ES76) são novos corantes de ácido nucleico não tóxicos com uma estrutura molecular oleosa exclusiva que não consegue penetrar nas membranas celulares para entrar nas células, não são facilmente voláteis ou sublimáveis e, portanto, não são inalados por humanos, garantindo a segurança do experimentador.Os resultados do teste de Ames também mostram que YeaRed e YeaGreen não têm mutagenicidade em concentrações de coloração de gel, tornando-os uma alternativa segura e não tóxica ao EB altamente cancerígeno. Além disso, YeaRed tem as mesmas características espectrais que EB, então pode substituir perfeitamente EB sem alterar o sistema de imagem existente.
Perguntas e respostas
P1: Por que as bandas de alto peso molecular do marcador de DNA se arrastam e não se separam bem?
A1: O corante de ácido nucleico não se liga suficientemente ao marcador de DNA. Como as bandas de alto peso molecular exigem mais corante de ácido nucleico, se o corante não estiver saturado, as bandas de alto peso molecular são mais suscetíveis aos efeitos de migração, levando ao arrasto e à separação ruim. É recomendado reduzir a quantidade de marcador de DNA usado (ele pode ser diluído com água em 5 vezes e então 8-10 μL podem ser carregados) ou aumentar a concentração do corante de ácido nucleico.
P2: Por que não há bandas ou há bandas fracas para o DNA?
A2:
- Carga de DNA insuficiente, aumente a quantidade carregada;
- A banda de DNA saiu do gel;
- A banda de DNA é obscurecida pelo corante de rastreamento;
- Corante de ácido nucleico não foi adicionado ao gel;
- O gel de agarose ficou muito tempo, é recomendável prepará-lo e usá-lo imediatamente.
Q3: Por que as bandas dos marcadores de DNA são difusas?
A3:
- Degradação parcial do DNA, verifique se as condições de armazenamento estão muito quentes;
- A voltagem durante a eletroforese é muito baixa, causando a difusão das bandas de DNA. É recomendado executar o gel em 110V-130 V por mais de 45 min;
- A concentração do gel de agarose não é adequada, prepare de acordo com a concentração de gel recomendada no manual;
- A qualidade do gel de agarose é ruim, recomenda-se preparar um novo.
P4: Por que as bandas de amostra parecem ter tamanhos diferentes em comparação às bandas de marcadores de DNA?
A4:
- A migração de DNA não está relacionada apenas ao tamanho real, mas também se ele é combinado com proteínas, estado iônico, estrutura de DNA, gel e outros fatores. A taxa de migração eletroforética de ácidos nucleicos está relacionada à proporção de DNA/corante e, quando a quantidade de corante de ácido nucleico é insuficiente, pode levar a erros maiores na taxa de migração;
- Se a amostra contiver uma alta concentração de íons de sal, também poderá causar erros de migração significativos;
- Se a quantidade de amostra carregada diferir significativamente da quantidade de bandas do marcador de DNA ou se os volumes diferirem significativamente, isso também pode causar erros de migração maiores.
Informações para pedidos
| Orientação do produto | Nome do produto | Número do produto | Especificações |
| Marcador de DNA | Marcador de DNA GoldBand DL2000 | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
| Marcador de DNA GoldBand DL5000 | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 100bp DNA Ladder | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 1 kb DNA Ladder | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |