Você ainda se incomoda com a baixa eficiência da recombinação homóloga de fragmentos múltiplos ou superlongos e com o pequeno número de colônias?
Ainda para o transportador ou fragmento é mais precioso, baixo rendimento, a fim de economizar matérias-primas, o uso de pequeno sistema de ligação de baixa concentração, mas a eficiência da ligação é baixa e incomodada?
Produto YEASEN: Melhoria significativa, baixa concentração, sistema pequeno e fragmentos ultralongos da eficiência de ligação, alta taxa de clonagem positiva, ajudam você a concluir facilmente o ligadura.
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Comparação da clonagem em uma etapa com métodos tradicionais de clonagem por restrição enzimática
Método | Preparação do fragmento de inserção | Restrição de locais de restrição | Propriedade universal | Tempo de conexão | Taxa positiva |
Técnica de clonagem recombinante rápida de uma etapa | Etapa 1 purificação | Nenhum | ★★★★★ | O tempo mais rápido foi de 5 min | Até 95% |
A técnica de clonagem por digestão de restrição e ligação | Etapa 2 purificação | Sim | ★★ | passar a noite | Genes diferentes variam muito |
Vantagem do produto
Orientação: 1-7 fragmentos de DNA clonagem em uma etapa.
Simples: vários fragmentos podem ser ligados em um tubo.
Rápido: Ligadura mais rápida em 5 min.
Alta eficiência: alta taxa de clonagem positiva.
Sistema pequeno: O sistema de ligação total pode ser tão baixo quanto 6 μL.
Excesso de comprimento: acima de 25 kb (comprimento do portador+fragmento) para ligação.
Desempenho Mostrar
- Recombinação eficiente de um único fragmento de 6 μL em um pequeno sistema
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Figura 1 10 ng de fragmentos únicos de baixa entrada foram ligados no estado de células receptivas não ressuscitadas do pequeno sistema de 6 μL.Os resultados mostraram que 10923ES teve melhor desempenho do que produtos concorrentes, com alta eficiência de ligação, mais colônias e uma taxa positiva de 100%. AB: Placa de conversão reconstituída. A razão molar de transportador (10 kb) para fragmento de inserção (1 kb) foi de 1:2. C: Identificação de PCR do fragmento de inserção. M: YEASEN 10505ES. Volume de transportador: 40 ng/6 μL Sistema de reação, condições de reação: 50℃, 15 min.
- Recombinação eficiente de múltiplos fragmentos
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Figura 2 Seis fragmentos (7,6 kb) ligados. Os resultados mostraram que 10923ES teve melhor desempenho do que produtos concorrentes, com mais colônias e taxa positiva de 100%. AB: Placa de conversão reconstituída. A razão molar de transportador (11,6 kb) para fragmento de inserção (7,6 kb) foi de 1:2. C: Identificação de PCR do fragmento de inserção. M: YEASEN 10505ES, comprimento de PCR 2,6 kb. Volume de transportador: 200 ng/20 μL Sistema de reação, condições de reação: 50℃, 50 min.
- Recombinação eficiente de múltiplos fragmentos de baixa concentração
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Figura 3 Ligue os fragmentos cinco e seis de baixa concentração separadamente. Os resultados mostraram que 10923ES exibiu conectividade estável em baixas concentrações, com uma alta contagem bacteriana e uma taxa de positividade de 100%. AB: Placa de Conversão Recombinante. CD: Imagem de eletroforese de identificação de PCR de fragmento de inserção, M: YEASEN 10505ES, comprimento de PCR 2,6 kb.
- Estabilidade do reagente
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Figura 4 Após ser colocado a 37℃ por 7 dias, os resultados mostraram que o 10923ES permaneceu estável na ligação dos fragmentos cinco e seis em baixas concentrações. AF: Placa de conversão recombinante. GH: Imagem de eletroforese de identificação de PCR de fragmento de inserção, M: YEASEN 10505ES, comprimento de PCR 2,6 kb.
Caso do cliente
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Reorganização eficiente de pequenos sistemas
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Fig. 5 10923ES foi ligado a um único fragmento em um Sistema de reação pequeno de 10 μL, com uma taxa positiva de 100%. A: Placa de conversão reconstituída. B: Identificação de PCR do fragmento inserido. Tamanho do portador: 5.631 pb; Tamanho do fragmento alvo: 1.384 pb.
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Figura 6 10 μL de clone de fragmento único de sistema pequeno e mutação pontual, taxa de positividade de 100%. A e C: Placas de transformação de recombinação. B: Identificação de PCR de fragmentos de inserção, as pistas 1-5 são colônia 1, colônia 2, controle negativo, controle positivo (genoma como molde), controle positivo (fragmento purificado de PCR como molde). D: Eletroforegrama de identificação de PCR de fragmentos de inserção.
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Recombinação eficiente de fragmentos curtos de baixa concentração
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Fig. 7 10923ES conectando o fragmentos de baixa concentração. Comparado com produtos concorrentes, o número de colônias foi alto, e a taxa positiva (10/11) foi > 90,9%. AB: Placa de conversão reconstituída. C: Identificação de PCR do fragmento de inserção. Tamanho do portador: 3.000 pb; tamanho do fragmento alvo: 441 pb.
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Ligadura multissegmentar eficiente e rápida
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Figo.8 10923ES ligação de quatro segmentos, GC alto e conexão de combinação de segmento curto, comparado à marca S, tem uma contagem bacteriana maior de 10923ES e uma taxa positiva de 100%. D: Comprimido de conversão recombinante. E: Inserir mapa de identificação de sequenciamento de fragmento. F: O sequenciamento de Sanger confirmou a conexão bem-sucedida entre o vetor e os fragmentos, e o sequenciamento no local da conexão estava correto.
Recomendação de produto Strength Star
Canal de pedidos 10923ES
Orientação do produto | Nãoeu sou | Arte.Não | Sespecificações |
1 – 7 fragmentos foram unidos em uma etapa e a reação de recombinação foi concluída no tempo mais rápido de 5 minutos | Clone de HieffTM Kit de clonagem universal II em uma etapa | 20 toneladas/50 toneladas |
Rexultante Pprodutos
Orientação do produto | Nãoeu sou | Arte.Não | Sespecificações |
PCR de alta fidelidade | 2× Hieff CanaceTM AdvanceFast PCR Master Mix (com corante) | 1 mL/5×1 mL | |
Atualização rápida de PCR, pode ser PCR de colônia e adequado para amplificação de modelo complexo | 2×HieffTM Mistura Master PCR Ultra-Rapid II HotStart | 1 mL/5×1 mL |