A eletroforese de proteínas é uma técnica de análise de proteínas. As proteínas são carregadas negativa ou positivamente em um tampão e se movem para o ânodo em um campo elétrico chamado eletroforese. Diferentes moléculas de proteínas têm diferentes mobilidades eletroforéticas. Uma parte muito importante da eletroforese de proteínas é a preparação do gel. A preparação convencional do gel geralmente leva várias horas, e também há problemas como vazamento de líquido, gel irregular e bolhas de ar. Além do problema da preparação, os reagentes da matéria-prima também terão certa toxicidade, o que causará danos ao corpo do dispensador de cola, e a aparência da cola pré-fabricada pode resolver esses problemas. Então, qual é o princípio básico da eletroforese de proteínas e qual é a função e o princípio do gel pré-moldado?

1. Qual é o princípio básico da eletroforese de proteínas?
2. Qual é a função e o princípio da cola pré-fabricada?
3. Introdução de cola pré-fabricada fornecida pela Yeasen
4. Perguntas frequentes
5. Detalhes do produto

1. Qual é o princípio básico da eletroforese de proteínas?

A maioria das macromoléculas biológicas, como proteínas e ácidos nucleicos, têm grupos catiônicos e aniônicos, que são chamados de zwitterions. O método de eletroforese de zona no qual as partículas são dispersas na solução e o gel de amido, ágar ou gel de agarose, gel de poliacrilamida, etc. como meio de suporte é chamado de eletroforese em gel. A eletroforese em gel de poliacrilamida é um método de eletroforese no qual o suporte é um gel de poliacrilamida. Acredita-se que o tamanho do tamanho do poro do gel de poliacrilamida é controlado para polimerizar, e as proteínas são separadas pela ação de uma peneira molecular semelhante.

A eletroforese de proteínas inclui duas formas, eletroforese em gel de poliacrilamida nativa (Native-PAGE) e eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida (SDS-PAGE). A Native-PAGE mantém as proteínas intactas durante a eletroforese e as separa em um gradiente com base em seu peso molecular, forma e carga acompanhante. Por outro lado, a SDS-PAGE separa as proteínas de acordo com o peso molecular de suas subunidades. O SDS é um detergente aniônico. Como um desnaturante e um agente solubilizante, ele pode quebrar ligações de hidrogênio intramoleculares e intermoleculares, dobrar moléculas e destruir as estruturas secundárias e terciárias de moléculas de proteína. Como um forte agente redutor, o mercaptoetanol, ditiotreitol, pode quebrar as ligações dissulfeto entre resíduos de cisteína. Após adicionar o agente redutor e o SDS à amostra e ao gel, as moléculas são despolimerizadas em cadeias polipeptídicas, e as cadeias laterais de aminoácidos despolimerizadas e o SDS são combinados em micelas de proteína-SDS. A carga negativa das micelas de proteína-SDS excede a carga original da proteína, eliminando a diferença de carga e a diferença estrutural entre diferentes moléculas. A mobilidade da proteína depende apenas da massa molecular da proteína, e a massa molecular da proteína pode ser determinada comparando-a com um padrão de massa molecular conhecida.

2. Qual é a função e o princípio da cola pré-fabricada?

Comparados com os géis tradicionais moldados à mão, os géis de proteína pré-moldados pode evitar o contato com um grande número de reagentes tóxicos, economizar muito tempo e resolver efetivamente o problema de grandes diferenças em géis fundidos à mão.

O gel consiste em duas camadas de gel diferentes, a camada superior é um gel de empilhamento e a camada inferior é um gel de separação. O gel de empilhamento também é conhecido como gel de empilhamento.A concentração do gel é relativamente pequena e o tamanho do poro é relativamente grande. A amostra é adicionada ao gel de empilhamento e concentrada em uma zona estreita através da migração do gel de tamanho de poro grande. O gel de separação, também conhecido como gel de eletroforese, geralmente tem um tamanho de poro pequeno, e selecionar a concentração de gel apropriada pode fazer com que os componentes da amostra sejam bem separados.

Os géis separadores podem ser divididos em géis fixos e géis gradientes. A concentração de poliacrilamida é de 8%, 10%, 12%, 15%, 4% a 12% e 4% a 20%. Os quatro primeiros são géis pré-moldados com uma concentração fixa, e os dois últimos são géis gradientes. As concentrações representam a faixa de pesos moleculares de proteínas isoladas. Os gradientes de gel são formados por misturadores de gradiente. Uma solução de acrilamida de alta concentração é adicionada à placa de vidro e, em seguida, a concentração da solução diminui em um gradiente, e o tamanho dos poros do gel é maior na parte superior e menor na parte inferior. O gel fixador só pode separar proteínas dentro de sua faixa de separação, nem muito grande nem muito pequena. Os géis gradientes não têm essa limitação, onde moléculas grandes são separadas na parte superior e moléculas pequenas são separadas na parte inferior. Como o tamanho do poro do gel de gradiente gradualmente se torna menor, ele tem um efeito concentrador na proteína perto do tamanho do poro que a proteína não consegue penetrar, então uma zona muito estreita será formada após a eletroforese. Proteínas com pequenas diferenças no peso molecular frequentemente não podem ser separadas em géis fixos, mas podem ser resolvidas em géis de gradiente.

3. Introdução de cola pré-fabricada fornecida pela Yeasen

YEASEN Proteína pré-moldada Plus Gel contém concentração de gradiente e concentração fixa, uma variedade de concentrações diferentes pode atender às necessidades de diferentes eletroforese de proteínas. É preparado por um processo exclusivo de preparação de gel e tem um excelente efeito eletroforético. É compatível com todos os tipos de tanques de eletroforese no mercado (Bio-RAD, Tanon, Life, etc.) e tem as vantagens de ampla adaptabilidade, alta resolução, alta estabilidade, bandas claras e uniformes, etc.

3.1 YEASEN Proteína pré-moldada Plus Gel atualize para uma placa de plástico, melhor qualidade!

Fácil de usar: pronto para usar; Rasgue a fita adesiva da parte inferior da placa de plástico

Ampla gama de aplicações: compatível com proteínas desnaturadas e proteínas naturais

Faixa clara: o tratamento especial das placas de plástico reduz muito a adsorção de proteínas

Economia de tempo: o experimento pode ser concluído em 18 minutos no máximo

Garantia de qualidade: garantia rigorosa de estabilidade entre lotes

Longa vida útil: pode ser armazenado a 4℃ por 12 meses

3.2 Os seguintes parâmetros podem ajudá-lo a escolher a série de gel apropriada

Sistema tampão de eletroforese: tampão de corrida de proteína desnaturada ou tampão de corrida de proteína natural

Número de poços e carregamento de amostra: 10 ou 15 poços, o tamanho máximo da amostra foi de 70 μL e 40 μL, respectivamente

concentração de gel: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabela 1.Concentração de gel e intervalo de separação linear

3.3 Dados mostram

Figura 1. Os dados mostram

Figura 2. Os dados mostram

4. Perguntas frequentes

Q1: O pré-moldado deve gel ser colocado a 4℃? Importa se você deixá-lo em temperatura ambiente por um tempo?

UM: Recomendado 4℃, pode ser armazenado por 12 meses. Não armazene abaixo de 0℃, pode ser armazenado em temperatura ambiente (25℃) por 30 dias.

Q2: Como escolher entre concentração de gradiente e concentração fixa? Qual é o peso molecular mínimo da proteína separada por pré-moldado? gel?

A: O tamanho da separação de proteínas pelo pré-moldado gel está relacionado à sua concentração, e o intervalo de separação correspondente é mostrado na figura acima.

Pré-moldado de concentração fixa gel tem melhor resolução. Concentração de gradiente pré-moldado gel tem uma faixa de separação mais ampla e uma gama mais ampla de aplicações; Clientes devem escolher a concentração apropriada de acordo com suas próprias necessidades.

Nosso pré-moldado com gradiente de 4%-20% gel (Cat#36250, Cat#36256) tem uma ampla faixa de separação para proteínas tão baixas quanto 3,5 kDa.

Figura 3. Pré-moldado gradiente dados de gel

Q3: O pré-moldado gel tem que ser equipado com seu buffer especial? Você pode fazer seu buffer?

A: Buffer especial YEASEN (Cat#36236, Cat#36237) e pré-moldado a aplicabilidade do gel é melhor. Não misture com outros tampões. O tampão pode ser preparado comprando reagentes, mas os clientes precisa usar nossa fórmula, que pode ser encontrada no pré-moldado relevante instruções do gel.

Q4: Como distinguir entre gel separador e gel concentrado? É necessário para eletroforese de voltagem seccional?

R: Os dois componentes são os mesmos, mas a concentração não é a mesma, a olho nu não consegue distinguir; A altura da cola concentrada é de 1,5 cm.

Não, a eletroforese a 150 V é recomendada e são necessários 30–40 minutos para concluir o experimento.

Q5: O seu pré-moldado é gel adequado para todos os tipos de tanques de eletroforese do mercado?

R: Sim, nossos pré-moldados gel é adequado para todos os tipos de tanques de eletroforese do mercado,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra System) e Tanon VE180 (Observe a montagem reversa da tira de vedação);

Minicélula Novex Life Technology (usada com defletor especial);

Outra largura de placa de gel em tanque de eletroforese de 10 cm.

5. Detalhes do produto

Os produtos fornecidos pela Yeasen são os seguintes:

Tabela 2.Detalhes do produto