—Ilumine sua membrana de borrão, na ponta dos seus dedos!
Os reagentes ECL, conhecidos como substratos quimioluminescentes para peroxidase de raiz-forte (HRP), são atualmente os reagentes mais sensíveis usados na detecção por Western blotting. Problemas comuns com reagentes ECL no mercado incluem extinção, alto background, instabilidade e dificuldade em detectar proteínas de baixa abundância, o que pode afetar os resultados experimentais finais.
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Características do produto
- Sensibilidade soberba — Detecção de antígenos desde níveis de picograma até níveis de femtograma baixo.
- Maior relação sinal-ruído — Substratos luminescentes precisos reduzem o ruído de fundo.
- Mais eficiente em anticorpos — Sistemas de substrato otimizados para maior afinidade de ligação de anticorpos.
- Alta relação custo-desempenho — Maior desempenho a um preço menor.
- Excelente estabilidade — Novos oxidantes garantem armazenamento estável a 4°C por até um ano.
Princípio do produto
O princípio central da detecção de reagentes ECL é a luminescência das reações de oxidação: Luminol, o principal componente do substrato luminescente, é oxidado por H2O2 sob condições alcalinas por meio da catálise da peroxidase de raiz-forte (HRP), formando um intermediário de estado excitado do ácido 3-amino-ftálico. Quando ele retorna ao estado fundamental, fótons são emitidos, com um comprimento de onda de emissão máximo de 425 nm. Esses sinais de fótons podem ser capturados por filme de raio-X ou dispositivos de imagem CCD.
Guia de Seleção
Atualmente, a
Então, qual produto você deve escolher para seu experimento?
Tabela 1.Guia de seleção de reagentes ECL
| | ECL aprimorado Tipo aprimorado | Super ECL Tipo ultrassensível | SuperDura Tipo durável | MaxiSinal Tipo de sensibilidade ultra-alta |
| Amostras aplicáveis | Alvo com alta abundância, amostras de proteína de rotina | Alvo com baixa abundância, amostras limitadas | Alvo com baixa abundância, amostras limitadas | Alvo com abundância extremamente baixa, amostras preciosas |
| Sensibilidade de detecção | Nível médio de picograma | Baixo nível de picograma | Nível médio do femtograma | Nível baixo de femtograma |
| Duração do sinal | < 2 horas | < 12 h | < 24 h | < 8 horas |
| Sistema de detecção aplicável | Todos os reagentes são adequados para filmes de raios X e dispositivos de imagem CCD | |||
| Concentração de diluição do anticorpo primário | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10.000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Concentração de diluição de anticorpo secundário | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Membrana Recomendada | Membrana NC | Membrana NC ou membrana PVDF | Membrana NC ou membrana PVDF | Membrana NC ou membrana PVDF |
| Estabilidade de armazenamento | Temperatura ambiente por 1 ano | 4°C por 1 ano, temperatura ambiente por meio ano | ||
| Vantagens | Sinal mais forte entre o mesmo nível de sensibilidade | Maior relação custo-benefício, adequado para a maioria dos experimentos WB | Maior duração de sinal, extremamente adequado para múltiplas exposições | Excelente sensibilidade, extremamente adequado para detecção de proteínas vestigiais |
Observação: a concentração de diluição de anticorpos recomendada é baseada em uma concentração de estoque de anticorpos de 1 mg/mL.
Aplicação do produto
Os reagentes
Figura 1. Comparação dos efeitos de detecção entre o substrato ultrassensível Super da
Figura 2. Comparação dos efeitos de detecção entre o substrato de ultra-alta sensibilidade
Figura 3.Comparação dos efeitos de detecção entre o substrato durável
Literatura publicada
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Células B expressando leucina-tRNA-sintase-2 contribuem para a imunoevasão do câncer colorretal. Imunidade. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al.Estrutura e engenharia de miniaturaAcidibacillus sulfuroxidansCas12f1[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. O macrófago IRX3 promove obesidade induzida por dieta e inflamação metabólica. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (SE:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Gating de ritmos hipocampais e memória por plasticidade sináptica em interneurônios inibitórios. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Vantagem de preço
Figura 7.Comparação de preços dos produtos
Perguntas frequentes
| Problemas encontrados | Análise de Causa | Soluções Recomendadas |
| O filme tem imagens invertidas | O filme tem imagens invertidas | O filme tem imagens invertidas |
| O filme tem faixas marrons ou amarelas | ||
| Extinção de fluorescência | O tempo de operação é muito longo, a membrana seca gradualmente | Evitar que a membrana seque |
| Contaminação de filme plástico, revelador ou fixador | Desenvolva bons hábitos experimentais | |
| HRP insuficiente no sistema de reação | Aumentar o material rotulado com HRP | |
| Sem bandas ou sinal fraco no filme | Baixa eficiência de transferência | Melhore a eficiência da transferência, use marcador pré-corado para julgamento |
| Antígeno/anticorpo insuficiente ou incompatível | Aumentar a quantidade de antígeno/anticorpo ou selecionar o antígeno/anticorpo apropriado | |
| Problemas com filme de raio X | Se o filme de raio-X estiver completamente preto (não transparente) após a exposição, isso indica que o filme está totalmente exposto; use um novo filme de raio-X | |
| Problemas do desenvolvedor/corretor | Pré-exponha um filme para verificar; se houver problemas, substitua por um novo revelador/fixador | |
| HRP excessivo no sistema de reação | Material diluído marcado com HRP | |
| Alto plano de fundo | Concentrações de anticorpos primários e secundários muito altas | Reduz a concentração de anticorpos, prolonga o tempo de bloqueio |
| Anticorpos não limpos completamente | Aumentar o número de lavagens | |
| Bloqueio incompleto | Otimizar as condições de bloqueio | |
| Agente de bloqueio errado usado | Use um agente de bloqueio diferente | |
| Superexposição | Reduza o tempo de exposição | |
| Baixa especificidade de anticorpos | Substituir por anticorpos de alta qualidade | |
| HRP excessivo no sistema de reação | Material diluído marcado com HRP | |
| Bandas com espaços vazios | Alta concentração de antígeno e anticorpo secundário | Dilua a amostra e execute o gel novamente, ou resfrie a solução cromogênica misturada e aplique-a à membrana para um desenvolvimento rápido imediato. |
| Forma de banda irregular | Bolhas de ar durante a transferência ou hidratação irregular com metanol (para membranas de PVDF) | Otimize as condições de transferência. |
| Anúncios de filmes | Agregados de material marcado com HRP | Filtrar material marcado com HRP com uma membrana de 0,2 μm |
| Bandas não específicas | HRP excessivo no sistema de reação | Material diluído marcado com HRP |
| SDS causando ligação proteica não específica | Não use SDS no procedimento experimental | |
| Baixa especificidade de anticorpos | Substituir por anticorpos de alta qualidade | |
| Bloqueio inadequado | Aumente o tempo de bloqueio ou use um agente de bloqueio diferente |
Informações para pedidos
| Nome do produto | Número do produto | Especificação |
| Reagente de detecção Super ECL | 36208ES60/76 | 100 mL/50 mL |
| Kit de substrato quimioluminescente ECL aprimorado | 36222ES60/76 | 100 mL/500 mL |
| Substrato de duração estendida SuperSignal SuperDura | 36223ES10/60/70/76 | 10 mL/100 mL/200 mL/500 mL |
| SuperSignal MaxiSignal Substrato de Sensibilidade Máxima | 36224ES10/60/70/76 | 10 mL/100 mL/200 mL/500 mL |