Para fornecer mais opções de tratamento para pacientes diabéticos, alguns novos medicamentos para diabetes surgiram no início do século XXI, como os análogos do peptídeo semelhante ao glucagon-1 (GLP-1). A semaglutida, como um dos medicamentos representativos dos análogos do GLP-1, foi comprovada em vários estudos clínicos para controlar efetivamente o açúcar no sangue quando combinada com diferentes medicamentos hipoglicemiantes orais, e pode ajudar os pacientes a perder peso, reduzir a pressão sistólica e melhorar a função das células β pancreáticas. Suas três formulações (injeção hipoglicêmica Ozempic, medicamento hipoglicemiante oral Rybelsus e injeção para perda de peso Wegovy) ultrapassaram US$ 20 bilhões em vendas em 2023. Devido ao seu excelente desempenho em redução de açúcar no sangue e perda de peso, a indústria espera que a Semaglutida mantenha um forte impulso de vendas por algum tempo, atraindo muitas empresas para competir pelo layout!

A estrutura da cadeia principal do Semaglutide é um polipeptídeo intermediário de 29 aminoácidos Arg34GLP-1(9-37) ou um polipeptídeo intermediário de 27 aminoácidos Arg34GLP-1(11-37). A produção e fabricação deste polipeptídeo intermediário incluem principalmente métodos de síntese química e biopreparação. Comparada à síntese química, a biopreparação rompeu o gargalo de capacidade e é mais adequada para produção contínua em larga escala, o que pode reduzir ainda mais os custos de produção e trazer benefícios econômicos mais significativos.

Tabela 1. Exemplos de métodos de biopreparação para polipeptídeos intermediários de semaglutida

	Método de biopreparação (Exemplo 1)	Método de biopreparação (Exemplo 2)
Síntese genética	Sintetizar uma sequência de proteína de fusão, incluindo um peptídeo de fusão, local de clivagem da enterocinase e a sequência da molécula principal alvo	Sintetizar uma sequência de expressão em tandem com a sequência do gene GLP-1(9-37)
Engenharia Bactérias Construção	Introduzir em E. coli para construir bactérias recombinantes modificadas	Introduzir em E. coli para construir bactérias recombinantes modificadas
Expressão de proteína de fusão	Ao otimizar a sequência do peptídeo de fusão, alterando o ponto isoelétrico e a hidrofilicidade da proteína, etc., a expressão da proteína de fusão é efetivamente aumentada	Após a indução da fermentação de alta densidade, uma proteína de corpo de inclusão de expressão em tandem expressando GLP-1(9-37) é obtida, e o redobramento produz uma proteína solúvel
Aquisição de Peptídeo Intermediário	Após a proteína de fusão passar pela clivagem da enteroquinase, purificação e outras etapas, o polipeptídeo intermediário semaglutida Arg34GLP-1(9-37) pode ser obtido	A proteína solúvel pode ser obtida após passar por clivagem enzimática em duas etapas com a enzima Kex2 e carboxipeptidase B, e etapas de purificação, para obter o polipeptídeo intermediário semaglutida GLP-1(9-37)

A enzima enteroquinase ou Kex2 combinada com a carboxipeptidase B é uma enzima essencial para a principal cadeia peptídica da Semaglutida (método de biopreparação), e o efeito de corte da enzima e o custo são cruciais para a produção.A Yisheng Biology está comprometida em fornecer matérias-primas enzimáticas estáveis ​​para empresas farmacêuticas, oferecendo enzimas de alta qualidade e padrões completos de controle de qualidade para ajudar os clientes a melhorar a capacidade de produção e a estabilidade do lote, reduzir custos e entrar rapidamente o mercado.

Yeasen solução geral para Semaglutida

1.Enteroquinase recombinante

Enteroquinase recombinante (rEK) é uma subunidade de cadeia leve de enteroquinase intestinal bovina de alta pureza, que tem a mesma atividade enzimática de corte específica que a enteroquinase extraída naturalmente, com um sítio de corte de Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, capaz de remover a proteína de fusão localizada no N-terminal da proteína para remover marcadores de fusão desnecessários, e é uma protease comumente escolhida para fusão N-terminal. Ela tem um baixo nível de corte irregular em outros resíduos.

Atualmente, a Yisheng oferece enterocinases recombinantes de diferentes fontes, diferentes qualidades e com ou sem etiquetas His para os clientes escolherem.

Yeasen recombinante Bovino Enteroquinase, His, Expressa em Levedura é uma enteroquinase bovina de alta pureza, alta atividade e altamente específica expressa pela secreção de Pichia pastoris. Ela pode efetivamente clivar proteínas de fusão dentro de uma ampla faixa de pH (4,5-9,5) e uma ampla faixa de temperatura, e ainda tem atividade parcial sob vários detergentes e desnaturantes. Este produto tem uma etiqueta His, que pode ser facilmente removida através de Ni²⁺ coluna de afinidade após a reação de corte, simplificando muito o processo de purificação subsequente.

Características

Alta especificidade: Uma protease específica que corta a extremidade carboxila da lisina contendo quatro ácidos aspárticos: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;

Alta pureza: Nenhuma outra protease, nenhum corte não específico;

Sem origem animal: Produção recombinante, sem contaminação viral exógena, sem uso de qualquer matéria-prima de origem animal no processo de produção;

Qualidade estável: A produção em lote pode garantir uma produção em lote estável e contínua; sem diferenças entre lotes, qualidade estável;

Capacidade suficiente: O fermentador de 500 L pode obter ~50 MU de enteroquinase. A Yeasen tem fermentadores de sistemas diferentes de 5 L a 1500 L para atender a diferentes requisitos do cliente em diferentes estágios para requisitos de lote de produtos;

Fornecimento de produtos de diferentes qualidades: Produtos de grau P&D (20395ES), grau GMP (20396ES) e grau GMP estão em conformidade com o sistema de gestão de qualidade ISO 13485.

Dados de teste

Teste de atividade da enteroquinase:

Figura 1. Efeito de corte enzimático de Yeasen enteroquinase (20395ES) é consistente com Concorrente N

Nota: O substrato positivo (20391ES) é uma proteína de fusão composta de duas sequências de proteínas específicas conectadas por DDDDK (local de reconhecimento e corte de enteroquinase), com um peso molecular geral de cerca de 64,6 kDa, que pode ser especificamente cortado em dois fragmentos de proteína independentes por enteroquinase, com pesos moleculares de cerca de 27,9 kDa e 36,6 kDa, respectivamente. Este produto, como um substrato de enteroquinase, pode ser usado para detecção semiquantitativa ou qualitativa da atividade enzimática de enteroquinase recombinante ou natural.

Teste de pureza de enteroquinase:

Nota: O valor teórico da enteroquinase é 22,7 kDa. Devido ao efeito de glicosilação após a expressão em Pichia pastoris, o SDS-PAGE mostra que o peso molecular da proteína alvo é de cerca de 40 kDa. Geralmente, as bandas glicosiladas terão uma banda ligeiramente difusa correndo para cima (como mostrado na figura à direita). Nossa empresa também pode fornecer a enzima de desglicosilação Endo H (Cat#20414) para os clientes desglicosilarem e executarem o gel para medir a pureza (como mostrado na figura à esquerda).

Teste de especificidade de corte de enteroquinase:

Figura 3. Yeasen enteroquinase (20395ES) tem menos corte não específico do que o concorrente importador N

Nota: Nas mesmas condições, Yeasen enteroquinase (20395ES) e a enteroquinase do concorrente de importação N foram usadas para testes de corte enzimático. Os resultados mostram que após a purificação, as impurezas de corte não específicas produzidas por Yeasen enteroquinase (20395ES) são significativamente menores do que as do concorrente importador N.

Teste de estabilidade acelerado e repetido de congelamento e descongelamento de enteroquinase:

Figura 4. Yeasen enteroquinase (20395ES) teste de estabilidade acelerada por congelamento e descongelamento repetido mostra que a atividade da enzima não mudou significativamente.

Nota: A enteroquinase de Yeasen (20395ES) selecionou aleatoriamente 2 lotes, repetiu o congelamento e o descongelamento 10 vezes, 20 vezes, a atividade enzimática não mudou significativamente em relação à atividade enzimática inicial.

Armazenamento a 25°C por 7, 16, 32 dias, 37°C por 7, 14 dias, a atividade enzimática não mudou significativamente em relação à atividade enzimática inicial.

2. Enzima Kex2 recombinante, Carboxipeptidase B

Tabela 2. Guia de seleção de produtos da enzima Kex2 recombinante de Yeasen, carboxipeptidase B

Número do produto	20418ES	20417ES
Produto Nome	Protease Kex2 recombinante, expressa em levedura	CPB recombinante, expresso em E. coli
Grau do produto	Grau GMP	Grau GMP
Fonte	Expressão recombinante de Pichia pastoris	Expressão recombinante de E. coli
Atividade	≥10,0 unidades/mg pró	≥170 Unidades USP/mg pro
Local de clivagem	Reconhece e cliva especificamente ligações peptídicas no terminal de ácido carboxílico de aminoácidos dibásicos, como Arg-Arg, Lys-Arg	Hidrolisa especificamente proteínas no lado amino-terminal de aminoácidos básicos (lisina, arginina, histidina) no C-terminal
Aplicação do produto	1. Processar a clivagem enzimática na produção de medicamentos peptídicos. 2. Digestão enzimática de proteínas e mapeamento de peptídeos, sequenciamento, etc.	1. Produção de insulina recombinante e seus análogos. 2.Determinação de aminoácidos no C-terminal de proteínas. 3. Remoção de marcadores de histidina no C-terminal das proteínas. 4. Produção de outras substâncias peptídicas recombinantes. 5. Síntese enzimática de certos compostos especiais.

Enzima Kex2 combinada com carboxipeptidase B: Requisitos do processo de expressão em tandem, alto rendimento de intermediário semaglutida após corte da enzima

Ealiviar Base de produção de enzimas de grau GMP

Base de produção de enzimas moleculares ultralimpas com certificação ISO - UCF.ME, equipada com equipamentos de purificação e análise físico-química AKTA de nível industrial, unidades de fermentação de alta densidade de cem litros, oficinas limpas padrão de dez mil graus e linhas de produção automatizadas. Ela possui sistemas de fermentação e purificação de várias especificações, incluindo 5L, 10L, 30L, 100L, 500L e 1.500L, com capacidade de aumentar a produção de 5L para 1.500L no campo da industrialização de enzimas moleculares, atendendo totalmente às principais necessidades de matéria-prima enzimática de clientes downstream em diferentes estágios, como pesquisa e desenvolvimento, escala piloto e produção em larga escala.

A Yeasen conta com uma forte equipe de P&D e uma base avançada de produção de enzimas, melhorando continuamente a qualidade e a capacidade das principais enzimas para a produção de semaglutida (enteroquinase recombinante) por meio de inovação e otimização tecnológica contínuas, oferecendo preços diferenciados para diferentes especificações para atender às diversas necessidades dos clientes em diferentes estágios de produção.

Informações promocionais do produto

Nome do produto	Número do produto	Especificação	Preço de lista ($）	Promocional Preço($）
Enteroquinase bovina recombinante, His, expressa em levedura	20395ES60/76/90/ 92/94	100 U/500 U/ 5000 você/ 100 KU/ 1 UM (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ 19600

Informações relacionadas ao produto

Nome do produto	Número do produto	Especificação
Proteína de controle de clivagem (enteroquinase)	20391ES03/11	1 mg/ 4 mg
Protease Kex2 recombinante, expressa em levedura	20418ES60	100 mcg
CPB recombinante, expresso em E. coli	20417ES03/10	1 mg/10 mg
Endo E	20414ES92/97	10000 U/50000 U