--Набор для анализа Yeasen TUNEL демонстрирует более красивую флуоресценцию
Связывание флуоресцеина-dUTP с никированной ДНК с помощью трансферазы TdT является одним из наиболее распространенных методов обнаружения апоптоза, например, набор In Situ Cell Death Kit от Roche основан на этом принципе. Активность трансферазы TdT в продукте напрямую влияет на эффективность маркировки. Yeasen Biologicals, основанная на производстве ферментов, стремится разрабатывать высококачественные продукты на основе ферментов и выпустила три меченых флуоресцеином (Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 и FITC) анализа Tunel для удовлетворения высоких требований к качеству наших клиентов.
В настоящее время этот продукт используют более 120 исследовательских групп, которые опубликовали множество статей на английском языке в авторитетных журналах, таких как Theranostics и EMBO Molecular Medicine.
Механизм обнаружения
На поздней стадии апоптоза двухцепочечные разрывы хромосомной ДНК или одноцепочечные разрывы приводят к образованию большого количества липких 3-ОН концов, и под действием терминального переноса дезоксирибонуклеотидов (TdT) меченый флуоресцеином/ферментом dUTP связывается с 3-концом ДНК, так что обнаружение апоптоза может быть достигнуто путем обнаружения флуоресценции, что называется опосредованной дезоксирибонуклеотидной терминальной трансферазой ник-концевой маркировкой. Этот метод называется опосредованной терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой ник-концевой маркировкой (TUNEL), и его принцип показан на рисунке 1.
Рисунок 1: Схематическая диаграмма опосредованной терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой ник-концевой маркировки (TUNEL)
Характеристики продукта
- Широкий спектр применения
Может использоваться для залитых в парафин срезов тканей, замороженных срезов тканей, культивированных клеток и клеток, выделенных из тканей.
- Высокая чувствительность обнаружения
Можно обнаружить очень небольшое количество апоптотических клеток.
- Низкий уровень фоновых помех
Высокое отношение сигнал/шум.
- Универсальность наблюдения
Наблюдение с помощью флуоресцентной микроскопии, проточное обнаружение.
Представление данных
1. Туннельный анализ мышиных преадипоцитов (3T3-L)
Рисунок 2: Обнаружение апоптоза мышиного преадипоцита 3T3-L. Первый ряд представляет собой отрицательный контроль, а второй ряд представляет собой положительный контроль. Реагент для обнаружения: Кат. № 40306 Набор для обнаружения апоптоза TUNEL (FITC)
2. Туннельное обнаружение образцов парафиновых срезов
Рисунок 3: LY3009120 отдельно или в сочетании с вемурафенибом и обатоклаксом эффективно замедлял развитие рака щитовидной железы в модели подкожной трансплантации опухоли. IF=8,8. Тип образца: залитая парафином опухолевая ткань (взятая у голых мышей). Реагент для обнаружения: Кат. № 40307 Набор для обнаружения апоптоза TUNEL (Alexa Fluor 488).
3. Туннельное обнаружение обходов ячеек
Рисунок 4: Влияние сульфата цинка на апоптоз эндотелиальных клеток в различных подгруппах. Тип образца: HUVEC (эндотелиальные клетки пупочной вены человека). Реагент для обнаружения: Кат. № 40308 Набор для обнаружения апоптоза TUNEL (Alexa Fluor 640)
4. Проточная цитометрия для обнаружения апоптоза.
Рисунок 5: Обработка PA может эффективно снизить возникновение апоптоза во время перепрограммирования. IF=3,7. Тип образца: iPS-клетки. Реагент для обнаружения: Кат. № 40307 Набор для обнаружения апоптоза TUNEL (Alexa Fluor 488).
Цитирование литературы
[1] Ли С, Ван Цюй, Гу С и др. Пористый нанокомпозит Se@SiO2 способствует миграции и остеогенной дифференцировке мезенхимальных стволовых клеток костного мозга крысы, ускоряя заживление переломов костей в модели крысы [J].Международный журнал наномедицины, 2019, 14: 3845. (ЕСЛИ 4.76)
[2] Мяо Т., Цянь Л., Юй Ф. и др. Защитные эффекты гидроксисафлорового желтого на высокоокисленные липопротеины низкой плотности, индуцированные повреждения эндотелиальных клеток коронарных артерий человека [J]. Развитие, 2019, 22: 581-589.(ЕСЛИ 6.208)
[3] Вэнь И., Лю Г., Чжан И. и др. МикроРНК-205 связана с эректильной дисфункцией, вызванной сахарным диабетом, посредством снижения регуляции андрогенового рецептора [J]. Журнал клеточной и молекулярной медицины, 2019, 23(5): 3257-3270.(ЕСЛИ 4.41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X и др. ARC регулирует запрограммированный некроз и ишемию миокарда/реперфузионное повреждение посредством ингибирования открытия mPTP [J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(ЕСЛИ 8.37)
[5] Ли П., Хао Л., Го Й.Й. и др. Хлорохин подавляет аутофагию и ухудшает митохондриальную дисфункцию и апоптоз в гипоксических нейронах крысы [J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(ЕСЛИ 3.40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X и др. Байкалин ослабляет нарушение гематоэнцефалического барьера и геморрагическую трансформацию и улучшает неврологический исход у крыс с ишемическим инсультом при отсроченном лечении t-PA: участие пути ONOO−-MMP-9 [J]. Трансляционные исследования инсульта, 2018, 9(5): 515-529.(ЕСЛИ 4.87)
[7] Лю Цюй, Цянь И, Ли П и др. Комбинированные терапевтические эффекты многофункциональных микросфер, содержащих сульфид меди, меченных йодом-131, при лечении рака молочной железы [J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(ЕСЛИ 6.88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT и др. Нокаут миостатина вызывает апоптоз в клетках рака шейки матки человека посредством повышения генерации активных форм кислорода [J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(ЕСЛИ 8.37)
[9] Ван С., Сюй И., Вэн И. и др. Астилбин уменьшает нефротоксичность, вызванную цисплатином, за счет снижения окислительного стресса и воспаления [J]. Пищевая и химическая токсикология, 2018, 114: 227-236.(ЕСЛИ 3.78)
[10] Лю Л., Панг XL, Шанг В.Дж. и др. Сверхэкспрессированная микроРНК-181a уменьшает гломерулярный склероз и повреждение эпителия почечных канальцев у крыс с хроническим заболеванием почек посредством снижения регуляции пути TLR/NF-κB путем связывания с CRY1[J]. Молекулярная медицина, 2018, 24(1): 49.(ЕСЛИ 3.46)
[11] Ли Г, Инь Кью, Джи Х и др. Исследование скрининга и противоопухолевого эффекта пептида лиганда, специфичного к CD55, в клетках рака шейки матки [J]. Drug Design, Development and Therapy, 2018, 12: 3899.(ЕСЛИ 3.27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F и др. Наномицеллы, контролируемые микроокружением опухоли, со свойством AIE для усиления терапии рака и мониторинга апоптоза [J]. Биоматериалы, 2019, 188: 96-106.(ЕСЛИ 9,85)
[13] Ли З., Ли Д., Ли К. и др. In situ низкоиммуногенные наночастицы, конъюгирующие с альбумином и направляющие корону, для химиотерапии, нацеленной на опухоли [J]. Biomaterials Science, 2018, 6(10): 2681-2693.(ЕСЛИ 5.31)
[14] Лю И., Чжи Х., Хоу В. и др. Агрегаты самосборки углеродных точек, индуцированные ионами Gd3+, загруженные фотосенсибилизатором для улучшенной флуоресцентной/МРТ-двойной визуализации и противоопухолевой терапии [J]. Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063.(ЕСЛИ 7.17)
[15] Лю Цюй, Цянь И, Ли П и др. Микросферы, содержащие сульфид меди, меченный 131 I, для лечения опухолей печени с помощью эмболизации печеночной артерии [J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(ЕСЛИ 8.12 )
Часто задаваемые вопросы
В: Появление неспецифической флуоресцентной маркировки?
1) Сами ткани/клетки имеют высокий уровень активности нуклеазы или полимеразы, что может легко привести к появлению неспецифической флуоресцентной маркировки, например, гладкомышечных клеток. Решение состоит в том, чтобы зафиксировать клетки или ткани сразу после их взятия и зафиксировать их достаточно, чтобы эти ферменты не вызывали ложных положительных результатов.
2) Использование неподходящих фиксаторов, таких как некоторые кислотные фиксаторы, приводит к ложным положительным результатам. Рекомендуется свежеприготовленный 4% нейтральный параформальдегидный фиксатор.
3) Неспецифическая флуоресценция может также возникнуть, когда время реакции анализа TUNEL слишком велико и поверхность клетки или ткани не может оставаться влажной. Контролируйте время реакции и убедитесь, что раствор для реакции анализа TUNEL хорошо покрывает образец.
В: Фон флуоресценции очень высокий?
1) Клетки, которые делятся и размножаются с высокой скоростью, с высоким уровнем транскрипции, иногда также демонстрируют разрывы ДНК в ядре.
2) Длительное воздействие возбуждающего света приводит к ложным срабатываниям.
В: Низкая эффективность маркировки?
1) Фиксация этанолом или метанолом приводит к низкой эффективности маркировки.
2) Время фиксации слишком велико, что приводит к слишком высокой степени сшивания. Рекомендуется сократить время фиксации.
3) Срез ткани слишком толстый, что делает эффект фиксации неудовлетворительным, лучше контролировать в пределах 10 мкм.
(4) Гашение флуоресценции: флуоресценция будет сильно гаснуть через 10 мин нормального освещения. Решение — избегать работы при свете.
Подробная информация о продукте
| Название продукта | Номер товара | Спецификация |
| Набор для обнаружения апоптоза Аннексин V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т |
| 40302ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т | |
| Набор для обнаружения апоптоза аннексина V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т |
| 40303ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т | |
| Набор для обнаружения апоптоза Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100т |
| 40305ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т | |
| 40304ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т | |
| Набор для обнаружения апоптоза Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т |
| 40306ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т | |
| 40307ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т | |
| 40308ES20/50/60 | 20Т/50Т/100Т |