Ultra-Clean UCF.ME ™ Термостабильная РНКаза H: Точная резка для более эффективных экспериментов!

Идеально подходит для удаление рРНК и кэпирование мРНК эффективность обнаружения!

Термостабильная РНКаза H, обладая исключительной термостойкостью, превосходит обычную РНКазу H как по специфичности, так и по эффективности!

Введение в РНКазу H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) — это фермент, который специфически разрушает РНК-компонент гибридных цепей РНК-ДНК. Он играет важную роль в таких процессах, как репликация, репарация и транскрипция ДНК, расщепляя РНК-цепь для поддержания целостности и стабильности ДНК-матрицы. Это делает его широко используемым в экспериментах по молекулярной биологии, включая синтез кДНК, удаление рРНК и исследования РНК-интерференции. Однако у E. coli RNase H есть некоторые ограничения:

  • Это может вызвать неспецифическое расщепление одноцепочечной РНК или ДНК, что снижает точность экспериментальных результатов.
  • Его низкая термостабильность не позволяет ему сохранять активность при высоких температурах, что делает его непригодным для таких экспериментов, как высокотемпературная обратная транскрипция или ПЦР, требующих повышенных температур.

Эти недостатки побудили исследователей разработать термостабильную РНКазу Н для расширения ее применения и повышения экспериментальной эффективности.

Figure 1: RNase H Mechanism

Рисунок 1: Механизм действия РНКазы H

Термостабильная РНКаза H из Thermus thermophilus

Термостабильная РНКаза H, полученная из Thermus thermophilus, является гомологом РНКазы H E. coli и имеет схожие функции рибонуклеазы. Она точно идентифицирует и эффективно расщепляет фосфодиэфирные связи цепи РНК в гибридах РНК:ДНК, сохраняя при этом целостность цепи ДНК. Глубокий структурный анализ показывает, что, хотя ее общее распределение стабильности напоминает распределение РНКазы H E. coli, РНКаза H T. thermophilus демонстрирует значительные улучшения как в общей стабильности, так и в локальной стабильности остатков.

При оптимальной температуре активности выше 65°C термостабильная РНКаза H обеспечивает повышенную специфичность и эффективность при более высоких температурах реакции, сводя к минимуму неспецифическое расщепление. Это свойство раскрывает ее огромный потенциал в экспериментах по молекулярной биологии, включая:

  • удаление рРНК
  • Определение скорости кэппинга мРНК
  • Удаление мРНК поли(А), гибридизированной с поли(dT)
  • Удаление мРНК во время синтеза второй цепи кДНК
  • Повышение эффективности амплификации в экспериментах по высокотемпературной обратной транскрипции, изотермической амплификации и ПЦР
Figure 2: Three-Dimensional Structure Comparison of Thermostable RNase H and E. coli RNase H [1]

Рисунок 2: Сравнение трехмерной структуры термостабильной РНКазы H и РНКазы H E. coli [1]

UCF.ME™Термостабильная РНКаза H (Cat14545)

Термостабильная РНКаза H часто используется в экспериментах по обнаружению патогенов, таких как удаление рРНК при метагеномном секвенировании (mNGS) и патоген-таргетном секвенировании (tNGS). Остаточные хозяина или фоновые бактериальные нуклеиновые кислоты в ферменте могут значительно ухудшить точность обнаружения. Чтобы решить эту проблему, Yeasen Биотехнология представляет UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H (Cat14545), разработанная с использованием собственной разработки UCF.ME™ Технология сверхчистого процесса. Произведено на UCF.ME™ Этот продукт, произведенный на сверхчистом молекулярно-ферментном предприятии, проходит строгий контроль качества — от выбора материалов и управления окружающей средой до оптимизации и тестирования процесса, — что гарантирует минимальное количество фоновых остатков бактериальной геномной ДНК и нуклеазы.Это гарантирует точные, надежные и воспроизводимые экспериментальные результаты.

Преимущества продукта:

  • Высокая активность и превосходная однородность от партии к партии
  • Крайне низкий остаток геномной ДНК хозяина: <0,02 копий/U
  • Нет остатков экзонуклеазы, эндонуклеазы или РНКазы
  • Исключительная стабильность: отсутствие значительной потери активности фермента после 32 дней при 4°C, 16 дней при 25°C или 7 дней при 37°C.

Демонстрация производительности UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H (Cat14545)

1. Высокая активность и постоянство партии

Три партии UCF.ME™ Термостабильную РНКазу H инкубировали с субстратами РНК:ДНК, а изменения полос анализировали с помощью электрофореза в агарозном геле. Результаты показывают, что всего 0,05 U этого фермента эффективно расщепляет РНК в субстратах РНК:ДНК 20 пмоль с превосходной согласованностью от партии к партии, что подчеркивает ее стабильность и надежность.

Figure 3: Activity Detection Results of UCF.ME® Thermostable RNase H &nbsp;

Рисунок 3: Результаты обнаружения активности UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H

Примечание: Условия реакции: 50°C в течение 20 минут; РНК:ДНК субстрат – 20 пмоль.

2. Низкий остаток геномной ДНК хозяина: <0,02 копий/U

Тестирование остатков геномной ДНК хозяина (E. coli) в нескольких партиях показывает, что все три партии UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H имеет уровни остатков значительно ниже 0,02 копий/U, что обеспечивает высокую чистоту и экспериментальную надежность.

Figure 4: Host gDNA Residue Results of UCF.ME® Thermostable RNase H

Рисунок 4: Результаты анализа остатков геномной ДНК хозяина UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H

3. Отсутствие остатков экзонуклеазы, эндонуклеазы или РНКазы.

25 UCF.ME ™ Термостабильная РНКаза H инкубировалась с субстратами нуклеиновых кислот, а изменения полос оценивались с помощью электрофореза в агарозном геле. Ни в одной из трех партий не было обнаружено остатков экзонуклеазы, эндонуклеазы или РНКазы, что обеспечивает надежную гарантию точности и надежности результатов.

Figure 5: Detection Results of Exonuclease, Endonuclease, and RNase Residues in UCF.ME® Thermostable RNase H

Рисунок 5: Результаты обнаружения остатков экзонуклеазы, эндонуклеазы и РНКазы в UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H

4. Превосходная устойчивость

UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H была подвергнута испытаниям на стабильность: 32 дня при 4°C, 16 дней при 25°C и 7 дней при 37°C. Измерения активности фермента не показали существенного снижения, что подтверждает ее исключительную стабильность в широком диапазоне температур и пригодность для длительного хранения и различных экспериментальных условий.

Figure 6: Accelerated Stability Results of UCF.ME® Thermostable RNase H

Рисунок 6: Результаты ускоренного испытания на устойчивость UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H

Рекомендуемые сопутствующие товары

Источник

Название продукта

Кат Nо.

Т. термофильный

UCF.ME™ Термостабильная РНКаза H

14545ES

Э.кишечная палочка

РНКаза H

12906ES

Ссылки

1. Холлиен Дж., Маркузи С. Структурное распределение стабильности в термофильном ферменте [J]. Труды Национальной академии наук, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Вольф Э. Дж., Дай Н., Чан Ш. Селективная характеристика 5'-конца мРНК с помощью направленного обогащения ДНК-зондом с сайт-специфическими эндорибонуклеазами [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Разработаны новые методы истощения рРНК для секвенирования тотальной РНК и профилирования рибосом для видов птиц [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.

Расследование